Биохимические свойства бактерий. Методы изучения
Блок
Бактериологический метод диагностики. Достоинства и недостатки.
Бактериологический метод – метод идентификации микроорганизмов по их биологических свойствам.
Метод выделения чистых культур позволяет выделить из естественной среды обитания ― тканей и жидкостей организма человека или внешней среды ― отдельные виды микробов. Это достигается посевом материалов в искусственные питательные среды
Чистые культуры патогенных микробов, выделенные от больных людей и животных, позволяют своевременно установить диагноз и определить природу инфекционного заболевания. Они являются исходным материалом для получения бактерийных препаратов (вакцины, токсины, фаги, антибиотики и т. д.) Выделенная чистая культура идентифицируется по морфологическим, тинкториальиым, культуральным, токсигенным и биохимическим свойствам, по антигенной структуре и вирулентности. Идентификация представляет собой комплекс микроскопических, бактериологических, иммунологических и биологических исследований, применяемых для определения типа и вида бактерий.
Свойства м.о.:
· культуральные
· биохимические
· антигенные
· вирулентные
· морфологические
· тинкториальные
Достоинства метода:
· высокая информативность, объективность
· высокая чувствительность, специфичность
· точность
· возможно определить чувствительность к антибиотикам
· возможно внутривидовое типирование (разделение микроорганизмов на мелкие группы для установления источников заражения)
|
|
|
Недостатки:
· долго! (3-5 дней)
· материалоемкость
· трудоемкость
· опасность
· не все м.о. растут на питательных средах
· результат зависит от квалифицированности и опыта работника
Условия для культивирования:
· Т=37 градусов
· Время
· Специфические требования
Результат: рост колоний. Колония-потомство одной микробной клетки на плотной среде
Для уплотнения среды используют агар-агар, его преимущества:
· Его не переваривают м.о.
· Т плавления=100 градусов
· Т застывания=45 градусов
Полужидкие среды используют для длительного хранения культур, изучения подвижности.
Бактериологический метод диагностики. Основные этапы.
Этап
· Подготовительные мероприятия. Эта стадия включает в себя забор, хранение и транспортировку материала. Также, при необходимости, может проводиться его обработка, в зависимости от свойств изучаемых бактерий. Например, при обследовании материала на туберкулёз, для выявления кислоустойчивых микробактерий используются растворы щёлочи или кислоты.
· Обогащение. Данная стадия не является обязательной и проводится в том случае, если количества бактерий в исследуемом материале недостаточно для проведения полноценного исследования. Например, при выделении гемокультуры, исследуемую кровь помещают в среду в соотношении 1 к 10 и хранят в течение суток при температуре 37о.
|
|
|
· Микроскопия. Мазок исследуемого материала окрашивается и изучается под микроскопом - исследуется микрофлора, её свойства и количество. В дальнейшем из первичного мазка необходимо отдельно выделить все находящиеся в нём микроорганизмы.
· Создание отдельных колоний. На чашку, со специальной, селективной средой, наносится материал, для этого используют петлю или шпатель. Далее, устанавливают чашку вверх дном, для защиты колоний от конденсата, и хранят в термостате около 20 часов, поддерживая температуру 37о. Важно! Следует помнить, что в процессе исследования, необходимо придерживаться правил изоляции. С одной стороны, для защиты исследуемого материала и выводимых бактерий, и с другой стороны, для предотвращения заражения окружающих лиц и внешней среды.
Этап
· Изучение морфологических свойств колоний в средах и их микроскопия. Исследуются чашки и отмечаются свойства микроорганизмов, показатели их количества, темпы роста, а также отмечается наиболее подходящая питательная среда. Для изучения лучше всего выбрать колонии, располагающиеся ближе к центру, и если образуется несколько типов чистых культур, то изучить каждую в отдельности. Для изучения морфотипной чистоты культуры используют мазок колонии, его окрашивают (обычно используется метод по Граму или же любой другой) и тщательно микроскопируют.
|
|
|
· Накопление чистой культуры. Для этого колонии всех морфотипов рассаживают в отдельные пробирки с питательной средой и содержат в термостате при определённой температуре (для большинства микроорганизмов подходящей является температура 37о, но в некоторых случаях может быть иной). Питательной средой для накопления часто служит среда Клиглера. Она имеет «скошенный» вид в пробирках, где 2/3 её части в виде столбика, а 1/3 – скошенная поверхность, окрашена в светло-красный цвет.
Этап
· Уровень роста и чистоты культуры. В общем порядке, выведенная чистая культура имеет однородный рост и при микроскопическом рассмотрении клетки имеют одинаковое морфологическое и тинкториальное строение. Но встречаются некоторые виды бактерий с ярковыраженным плеофоризмом, при этом, встречаются клетки, имеющие различное морфологическое строение.
|
|
|
Биохимические свойства бактерий. Методы изучения
Биохимические свойства - способность микроорганизмов к ферментации и ассимиляции тех или иных химических веществ. У бактерий различают три основные группы ферментов:
· Конститутивные - постоянно синтезирующиеся в микробных клетках.
· Индуцибельные - синтез которых индуцируется соответствующим субстратом.
· Репрессибельные - синтез которых подавляется в результате избыточного накопления продукта реакции, катализируемой данным ферментом. Для идентификации микроорганизмов - возбудителей инфекционных болезней, кроме морфологических и культурных свойств, необходимо изучение биохимических признаков.
Биохимические признаки
· гликолитические свойства бактерий (бактерии характеризуются неодинаковой способностью использовать различные углеводы. Утилизация углеводов бактериями приводит к образованию органических кислот, либо кислот и газов. Определение сахаролитических ферментов проводится на средах пестрого ряда, средах Гисса. Пестрые ряды, среды Гисса-состав: питательная основа-пептонная вода, любой сахар, индикатор рН
В пробирку с глюкозой помещают "поплавок" для определения продукции газа (изначально все желтое, а потом окрашивается в розовый) Для определения протеолитических ферментов - коллагеназ производят посев уколом исследуемой культуры в столбик мясо-пептонной желатины (МПЖ). Продолжительность культивирования 7-10 суток при комнатной температуре. При положительном результате наблюдается разжижение желатины. Например: возбудитель сибирской язвы образует кратерообразное разжижение МПЖ. В настоящее время для изучения биохимических свойств бактерий используется система индикаторная бумажная (СИБ) СИБ - набор бумажных дисков, пропитанных различными субстратами и индикаторами, которые помещают в пробирки с взвесью изучаемой культуры. Диски фильтровальной бумаги пропитывают индикаторными (дифференциальными) средами. В высушенном состоянии диски можно длительно хранить. Перед использованием диски раскладывают пинцетом в стерильные пробирки и добавляют суспензию идентифицируемой культуры в физрастворе)
· протеолитические свойства бактерий (расщепление желатина, если разжижает-есть активность м.о. Или мясо-пептонный бульон, любая простая среда)
Для определения протеолитических ферментов - коллагеназ производят посев уколом исследуемой культуры в столбик мясо-пептонной желатины (МПЖ). Продолжительность культивирования 7-10 суток при комнатной температуре. При положительном результате наблюдается разжижение желатины. Например: возбудитель сибирской язвы образует кратерообразное разжижение МПЖ. В настоящее время для изучения биохимических свойств бактерий используется система индикаторная бумажная (СИБ) СИБ - набор бумажных дисков, пропитанных различными субстратами и индикаторами, которые помещают в пробирки с взвесью изучаемой культуры. Диски фильтровальной бумаги пропитывают индикаторными (дифференциальными) средами. В высушенном состоянии диски можно длительно хранить. Перед использованием диски раскладывают пинцетом в стерильные пробирки и добавляют суспензию идентифицируемой культуры в физрастворе
·липолитические свойства (желточно-солевой агар, расщепление лецитина)
· токсинообразование
Дата добавления: 2018-10-27; просмотров: 5133; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!