Реакция агглютинации по Видалю с целью серодиагностики брюшного тифа
Для постановки реакции берут:
1) сыворотку исследуемого больного для определения в ней
антител;
2) О - и Н-диагноста кумы бактерий брюшного тифа, паратифа А и паратифа В;
3) физиологический раствор.
Кровь для получения сыворотки берут в количестве—15—20 капель путем укола мякоти пальца или 2 —3 мл при помощи венепункции.
Дают крови свернуться в термостате в течение 30—60 минут, затем простерилизованной петлей обводят сгусток, отделяя его от стенки пробирки, и дают отстояться сыворотке на холоду до образования над сгустком прозрачного слоя. Сыворотку помещают пипеткой в отдельную пробирку. Первое разведение (1:50) делают при помощи пипетки—0,1 мл сыворотки + 4,9 мл физиологического раствора. Дальнейшие разведения (1:100— 1:200 — 1 : 400—1:800) готовят по обычной схеме.
Берут 6 рядов пробирок по 6 пробирок в каждом. По 1 мл сыворотки разведения 1: 100 наливают в первую пробирку каждого ряда, 1: 200 — во вторую, 1 : 400 — в третью и т. д.; в шестую, контрольную, пробирку наливают 1 мл физиологического раствора.
Во все пробирки первого ряда добавляют по 1—2 капли брюшнотифозного Н-диагностикума; в пробирки второго ряда — брюшнотифозный 0-диагностикум; в пробирки третьего я четвертого ряда добавляют А-паратифозный, Н - и 0-диагностикумы, а в 5-й и 6-й ряд— В-паратифозный H - и 0-диагностикум. Пробирки ставят в термостат на 2 часа, отмечают результат реакции, затем оставляют при комнатной температуре на сутки; после этого срока дают заключение об окончательном результате реакции.
|
|
Возбудителем заболевания считается тот микроб, который агглютинируется сывороткой больного. Реакция считается положителыной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1: 100; обычно она наступает в больших разведениях. Если происходит групповая агглютинация с двумя или с тремя антигенами, то за возбудителя болезни принимается тот микроб, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.
5. РСК с целью серодиагностики сыпного тифа
Тип реакции - реакция связывания комплемента.
Исследуемый материал - парные сыворотки крови больного (сыворотки одного и того же больного, взятые у него с временным промежутком не менее 5-7 дней).
Диагностический препарат - сыпнотифозный антиген для РСК.
Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).
Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.
Диагностическим критерием является нарастание титра антител не менее, чем в 4 раза (во второй сыворотке по сравнению с первой).
Обычно реакцию применяют для ретроспективной диагностике.
|
|
В данном случае... (результат и вывод).
Реакции Вассермана (серодиагностика сифилиса)
Тип реакции: РСК.
Исследуемый материал: сыворотка обследуемого.
Диагностические препараты:
1. Неспецифический кардиолипиновый АГ (антиген) для реакции Вассермана - спиртовая липидная вытяжка из миокарда быка, обогащенная холестерином.
2. Специфический ультраозвученный трепонемный АГ – содержит АГ культуральных трепонем, разрушенных ультразвуком.
Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).
Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.
Качественный метод - сыворотку обследуемого вносят в 2 лунки, добавляют соответственно АГ 1 и АГ 2, а затем в обе лунки - дополнительные ингредиенты реакции. Применение: отбор лиц для постановки количественной реакции Вассермана.
В данном случае обследованы пациенты ... (результат, вывод).
Количественный метод - диагностика сифилиса, контроль эффективности терапии. Готовят разведения положительной сыворотки (по качественной реакции). К каждому разведению добавляют трепонемный ультраозвученный АГ (АГ2) и дополнительные ингредиенты реакции. Положительный результат - ЗГ (задержка гемолиза), отрицательный - Г (гемолиз).
|
|
Результат интерпретируют, основываясь на количестве антител.
В данном случае...(результат и вывод).
7. РСК с целью раздельного определения IgM и IgG
Тип реакции - реакция связывания комплемента.
Исследуемый материал - сыворотка крови больного (нативная и обработанная меркаптоэтанолом).
Диагностический препарат - известный антиген для РСК.
Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).
Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.
Принцип метода: при обработке сыворотки меркаптоэтанолом разрушаются IgM.
Следовательно, с обработаной сывороткой реакция идет только за счет IgG.
Постановка реакции: готовят разведения нативной и обработанной сывороток, добавляют диагностический препарат и дополнительные ингредиенты реакции.
Трактовка результатов: если с обработанной сывороткой реакция идет практически таком же титре, как с необработанной, значит она содержит преимущественно IgG Если в обработанной сыворотке титр антител резко снизился по сравнению с необработанной, значит она содержит преимущественно IgM.
|
|
В данном случае...(результат и вывод).
8. РНГА с Vi-эритроцитарным диагиостикумом
Тип реакции - реакция непрямой гемагглютинации.
Исследуемый материал - сыворотка крови обследуемого.
Диагностический препарат - Vi-эритроцитарный диагностикум (взвесь в физиологическом растворе эритроцитов барана с нагруженными на них Vi - антигенами S.typhi ).
Принцип реакции: к разведениям сыворотки обследуемого добавляют Vi-эритроцитарный диагностикум.
Положительный результат – гемагглютинат ("зонтик"); отрицательный результат - плотный осадок эритроцитов на дне лунки ("пуговка").
Диагностический тигр реакции 1/ 40.
Применение: отбор лиц, имеющих титр антител к Vi – антигенам S.typhi выше диагностического.
Трактовка результатов: лица с положительной реакцией в титре выше, чем 1/40 считаются подозрительными на бактерионосительство S.typhi и подлежат бактериологическому обследованию на наличие S.typhi в кале, моче и желчи.
В данном случае...(результат и вывод).
Реакция флоккуляции
Тип реакции: частный случай реакции преципитации (нейтрализации).
Исследуемый материал: антитоксическая сыворотка.
Диагностический препарат: токсин или анатоксин в строго определенном количестве.
Принцип метода: к серийным разведениям антитоксической сыворотки добавляют одинаковое количество антигенных единиц токсина или анатоксина.
Положительный результат - образование хлопьев преципитата (флоккулята); отрицательный результат - прозрачная жидкость.
Применение: определение активности антитоксической сыворотки (количества ME - международных единиц в 1 мл сыворотки).
Трактовка результатов: первичная (инициальная) флоккуляция наступает в пробирке, где АГ (антиген) и АТ (антитело), находятся в эквивалентных количествах. Зная количества ингредиентов в пробирке, где произошла инициальная флоккуляция, можно рассчитать активности антитоксической сыворотки. Например, инициальная флоккуляция наступила в пробирке, где находится 0,02 мл сыворотки и 4 АЕ (антигенных единиц) токсина или анатоксина. Составляем пропорцию: 0,02 мл сыворотки эквивалентно 4 АЕ токсина или анатоксина.
Одна АЕ - это такое количество токсина или анатоксина, которое связывается одной ME антитоксической сыворотки, следовательно, 0,02 мл данной сыворотки содержит 4 ME.
Титр антитоксической сыворотки - это количество ME в 1 мл этой сыворотки.
В данном случае, составив пропорцию, можно определить титр:
0,02 мл - 4 ME
1 мл - ХМЕ
Х = (1x4): 0,02 = 200 ME
В данном случае...(результат и расчет).
Титрование комплемента
Тип реакции - реакция иммунного гемолиза.
Исследуемый материал - свежая сыворотка крови.
Дополнительные ингредиенты реакции: гемолитическая система (гемолитическая сыворотка в рабочей дозе и 3% взвесь эритроцитов барана).
Положительная реакция - гемолиз; отрицательная - задержка гемолиза.
Титр комплемента - наибольшее разведение комплемента, в котором наблюдается гемолиз.
Применение: для определения титра комплемента. Если речь идет о титровании комплемента перед постановкой РСК, то титр определяют для дальнейшего расчета рабочей дозы. Используется разведение на 25% концентрированнее, чем титр.
В данном случае...(результат).
Дата добавления: 2018-09-22; просмотров: 797; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!