Препараты. Митотическая хромосома. Кариотип.
Ø Митоз в клетках корешка лука.
Ø Митоз в клетках культуры СПЭВ.
Ø Митоз в клетках кожи аксолотля.
Ø Кариотип человека. GTG-окрашивание.
Понятие кариотипа ввел в 1924г. Г.А.Левитский.
Получение препарата. Метод раскапывания ( splash - techniqe ).
Часто для получения хромосомных препаратов используют кровь. Для этого несколько миллилитров крови помещают во флакон с гепарином (чтобы уменьшить свертываемость крови; процедура должна быть стерильной). После этого кровь центрифугируют (или отстаивают при +37°С 1-2ч.). В результате кровь расслаивается на эритроциты и плазму, содержащую лимфоциты. Плазму крови перемещают в другой флакон, добавляют необходимую среду, сыворотку, а также фитогемагглютинин.
Фитогемагглютинин относится к лектинам. Лектины представляют собой белки, обладающие свойством избирательно связывать углеводы. Фитогемагглютинин, благодаря специфическому взаимодействию с рецепторами лимфоцитов и митогенной активности, увеличивает пролиферацию этих клеток.
Через некоторое время в культуру добавляют колхицин. Колхицин - алкалоид, содержащийся в безвременнике (обычно его выделяют из Безвременника осеннего - Colchicum autumnale) и других растениях семейства лилейных. Колхицин - яд нервно-паралитического действия; обладает свойством останавливать деление растительных и животных клеток. Колхицин применяется для получения полиплоидных форм растений. Колхицин деполимеризует нестабильные микротрубочки. Точнее говоря, молекулы этих веществ присоединяются к мономерам тубулина и блокируют рост микротрубочек. При этом их распад продолжается, и через короткое время все микротрубочки исчезают. В частности, у таких клеток в митозе исчезает митотическое веретено и хромосомы не могут разойтись к полюсам, поэтому деление клеток не завершается.
|
|
|
Далее клетки «снимают» со стекла и помещают в гипотоническую среду (для этого, как правило, используют цитрат натрия, либо хлорид калия): в результате этого клеточная мембрана лопается. После этого проводят фиксацию; для такой фиксации хорошо использовать смесь метанола и уксусной кислоты (3:1); при использовании других фиксаторов не будет «распластывания» хромосом. Заключительным этапом в получении хромосомного препарата является процесс раскапывания. С некоторого расстояния раскапывается на предметное стекло (по 2-3 капли), далее стекло высушивается и окрашивается (см. далее).
Электронные и световые микрофотографии.
Митотическая хромосома.
Ø Кариотип человека. Дифференциальная окраска по G-методу (гипотония и окраска по Гимза). СМФ.
|
|
|
Ø Дифференциальная окраска по G-методу (гипотония и окраска по Гимза). Типы хромосом. Схема.
Ø Ультраструктура клеток культуры СПЭВ на стадии анафазы. ЭМФ.
Уровни компактизации ДНК.
Ø Фибриллы ДНК. 10нм. Нуклеосома. Метод напыления.
Ø Фибриллы ДНК. 10нм. Метод негативного контрастирования.
Ø Фибриллы ДНК. 30 нм. Метод напыления.
Ø Фибриллы ДНК.30нм. Метод негативного контрастирования.
Ø Хромосомы in situ. Хромонема. ЭМФ.
Ø Деконденсированные хросомомы. Хромонема. ЭМФ.
Ø Выделенная хромосома из клетки китайского хомячка. ЭМФ.
Общая информация.
Коэффициент седиментации.
Сведберг (Svedberg) Теодор (30.8.1884, Вальбо, - 26.2.1971, Коппарберг), шведский физико-химик, член Шведской АН. В 1907 окончил Упсальский университет и работал там же. С 1949 директор института ядерной химии (Институт Г. Вернера). Основные труды посвящены коллоидной химии, определению размеров и формы молекул, электрофорезу. Экспериментально подтвердил (1906) разработанную А. Эйнштейном и М. Смолуховским теорию броуновского движения. Создал метод ультрацентрифугирования для выделения коллоидных частиц из раствора, построил первые ультрацентрифуги. Внёс большой вклад в развитие физико-химии белков. Нобелевская премия (1926).
|
|
|
Седиментация (от лат. sedimentum — оседание), оседание или всплывание частиц дисперсной фазы (твёрдых крупинок, капелек жидкости, пузырьков газа) в жидкой или газообразной дисперсионной среде в гравитационном поле или поле центробежных сил. С. происходит, если направленное движение частиц под действием силы тяжести или центробежной силы преобладает над хаотическим тепловым движением частиц. Скорость седиментации зависит от массы, размера и формы частиц, вязкости и плотности среды, а также ускорения, возникающего при действии на частицы сил поля. Для мелких не взаимодействующих между собой сферических частиц скорость седиментации определяется по Стокса формуле. Седиментация в дисперсных системах (особенно с газовой дисперсионной средой) часто сопровождается укрупнением седиментирующих частиц вследствие коагуляции или коалесценции.
Седиментация в природе приводит к образованию осадочных горных пород, осветлению воды в водоёмах, освобождению атмосферы от находящихся в ней капельножидких и твёрдых частиц.
Седиментационный анализ - совокупность методов определения размеров частиц в дисперсных системах по установившейся скорости седиментации и параметрам седиментационно-диффузионного, или седиментационного, равновесия. С. а. позволяет определять как усреднённые характеристики дисперсности, так и распределение частиц дисперсной фазы по размерам или массам. Основные методы С. а. - методы установившейся скорости седиментации и седиментационно-диффузионного, или седиментационного, равновесия; применяют также методы приближения к седиментационному равновесию и седиментации в градиенте плотности. С. а. в гравитационном поле применяют для грубодисперсных систем (суспензий, эмульсий, пылей) с размером частиц 10-2-10-4 см . Обычно используют метод установившейся скорости седиментации, причём искомые величины находят по изменению скорости накопления осадка (сливок), плотности столба суспензии (эмульсии), концентрации частиц на определённом уровне и т. д. Приборы для осуществления этого метода, работающие на принципах взвешивания (например, осадка) или измерения гидростатического давления, называются седиментометрами. С. а. для высокодисперсных систем с размером частиц менее 10-4 см (которые в обычных условиях седиментационно устойчивы) проводят в поле центробежных сил. Использование центрифуги для седиментирования таких систем было предложено А. В. Думанским в 1912. Детальная разработка методов С. а. в поле центробежных сил проведена изобретателем ультрацентрифуги Т. http://encycl.yandex.ru/redir?dtype=encyc&url=www.rubricon.com/partner.asp%3Faid%3D%7b13E3F084-632F-4678-8CC4-0A86BDF0EE70%7d%26ext%3D0Сведбергомhttp://encycl.yandex.ru/redir?dtype=encyc&url=www.rubricon.com/partner.asp%3Faid%3D%7b13E3F084-632F-4678-8CC4-0A86BDF0EE70%7d%26ext%3D0. Создаваемые в ультрацентрифуге центробежные ускорения в десятки и сотни тысяч раз превосходят ускорение земного тяготения, что обеспечивает седиментацию не только мельчайших коллоидных частиц, но и молекул высокомолекулярных соединений. При С. а. в ультрацентрифуге характеристикой частиц дисперсной фазы или молекул растворённого полимера может служить константа седиментации - отношение скорости седиментации к ускорению поля центробежных сил. За единицу измерения константы седиментации принят 1 сведберг = 10-13 сек. Эта константа зависит от массы и формы частицы (макромолекулы) и для белков изменяется в пределах от 1 до 200 сведбергов. Скорость седиментации или установление седиментационного равновесия в ультрацентрифуге, константы седиментации, массы и размеры коллоидных частиц или макромолекул, а также полидисперсность анализируемой системы вычисляют на основе оптических измерений - по изменению показателей преломления или светопропускания раствора или коллоидной системы.
|
|
|
Дата добавления: 2018-09-22; просмотров: 130; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!