Методики определения групп крови по системе АВО
I . Метод с использованием известных стандартных гемагглютинирующих сывороток.
II .Метод с использованием известных стандартных эритроцитов.
I.По известным сывороткам. На пластинку в три точки под обозначением анти-А, анти -В, атни-АВ помещают по две капли (0,1 мл) реагента -гемагглютинирующую сыворотки или взвесь цоликлонов и рядом по одной капле исследуемой крови (0,01-0,02 мл при использовании гемагглютинирующих сывороток; 0,02-0,03мл при использовании цоликлонов). Пластинку постоянно покачивают, наблюдая за ходом реакции в течение 3 мин при использовании цоликлонов; 5 минут при использовании гемагглютинирующих сывороток. По истечении 5 минут в реагирующую смесь добавляют 1-2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов.
Интерпретацию результатов производят по таблице.
| Агглютинация эритроцитов с реагентом | Кровь принадлежит к группе | ||
| Антика | Антикв | Анти-АВ | |
| - | - | - | О(I) |
| + | - | + | A(II) |
| - | + | + | B(III) |
| + | + | + | AB(IV) |
При наличии агглютинации со всеми тремя реагентами необходимо провести исследование с сывороткой группы АВ(IV). Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в сыворотке АВ(IV).
2. По известным эритроцитам. Стандартные эритроциты приготавливают из крови доноров с заранее известной группой крови, хранят при t° 4-8°С. Срок годности 2-3 дня.
|
|
|
Исследуемую кровь центрифугируют для получения сыворотки. Затем в три ряда с 10 каплями исследуемой сыворотки помещают по 1-2 капли взвеси известных стандартных эритроцитов, смешивают и наблюдают в течение 5 минут.
Интерпретацию результатов производят по таблице.
| Агглютинация реагентов с эритроцитами | Кровь принадлежит к группе | |||
| O(I) | A(II) | B(IV) |
| |
| - | + | + | О(I) | |
| - | - | + | A(II) | |
| - | + | - | B(III) | |
| - | - | + | AB(IV) | |
В серологических лабораториях чаще используют метод перекрестного определения группы крови, т.е. одновременное использование обоих способов.
Определение резус-принадлежности.
Для определения резус-принадлежности используют антирезусную стандартную сыворотку, содержащую антитела к резус белку.
Антирезусную сыворотку приготавливают из крови женщины, у которой в анамнезе при беременности имелся факт резус-конфликта.
Наносят большую каплю (около 0,1 мл) антирезусной сыворотки на пластинку, рядом маленькую (в пять раз меньшую) каплю исследуемой крови, смешивают и покачивают пластинку. Не смотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 сек., результаты реакции учитывают через 3 мин после смешения. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии - как резус отрицательная.
|
|
|
Причины ошибок при определении групп крови и резус-принадлежности.
1. Технические ошибки:
а) Ошибочный порядок расположения реагентов. Каждый раз при определении групп крови и резус-принадлежности следует проверять расположение реагентов, а также визуально оценить их качество, исключить использование помутневших, частично высохших реагентов, реагентов с истекшим сроком годности.
б) Температурные условия. Определение групп крови производят при t° не ниже 15°С и не выше 25°С.
в) Соотношения реагентов и исследуемых эритроцитов. Оптимальные соотношения эритроцитов к сывороткам - 1:10., при использовании цоликлонов и сывороток -2:10.
г) Продолжительность наблюдения. Агглютинация эритроцитов появляется в течение первых 10 сек, однако наблюдение за ходом реакции следует проводить не мене 5 минут.
2. Трудноопределяемые группы крови.
а) Подгруппы крови. Антиген А может быть представлен двумя вариантами - А1 и А2, что может привести к ошибочной интерпретации результатов исследования. Антиген В таких различий не имеет.
б) Кровяные химеры. Кровяными химерами называют одновременное пребывание в кровяном русле двух популяций эритроцитов, отличающихся по группе крои и другим антигенам. Установление группы крови при кровяных химерах затруднено, поскольку в некоторых случаях половина эритроцитов, циркулирующих в кровяном русле, имеют одну группу крови, а другая половина - другую.
|
|
|
в) Неспецифическая агглютинация эритроцитов. О ней судят на основании способности эритроцитов агглютинироваться сыворотками всех групп, включая АВ (IV). Наблюдается при аутоиммунной гемолитической анемии и других аутоиммунных заболеваниях.
г) Другие особенности. Определение групп крои может быть затруднено у больных с изменениями свойств эритроцитов при различных патологических состояниях: это может выразиться в повышенной агглютинабельности эритроцитов у больных циррозом печени, при ожогах, сепсисе.
У некоторых новорожденных антигены А и В на эритроцитах выражены слабо, а соответствующие агглютинины сыворотки крови отсутствуют.
Дата добавления: 2018-09-20; просмотров: 181; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!