Для посева материала на стерильность используют:

1. Тиогликолевую среду (для выявления аэробов и анаэробов)

2. бульон Хотингера

3. бульон Сабуро.

Посев производят одновременно на все перечисленные среды (обязательно необходимо, чтобы все изделие было погружено). Посевы инкубируют на тиогликолевой среде и бульоне Хотингера при 37 градусах – 48 часов, на

бульоне Сабуро при 20 –22 градусах – 14 суток.

Учёт результатов: материал стерилен при отсутствии роста во всех посевах.

Микробиологические показатели безопасности материалов и изделий медицинского назначения¹⁾

Микробиологические показатели	Допустимые значения
Общее количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий (МАФАнМ), КОЕ²⁾ в 1 г (см³) продукции	не более 10²
Дрожжи, дрожжеподобные, плесневые грибки, КОЕ²⁾ в 1 г (см³) продукции	Отсутствие
Бактерии семейства Enterobacteriaceae в 1 г (см³) продукции	Отсутствие
Патогенные стафилококки в 1 г (см³) продукции	Отсутствие
Psedomonas aeruginosa	Отсутствие

Примечания.

1) Требования распространяются на нестерильные изделия.

2) КОЕ - колониеобразующих единиц в 1 г или 1 см³ продукции

1.2. Выявление Legionella pneumophila в объектах окружающей среды

В настоящее время род Legionella включает около 50 видов бактерий, обитающих в пресноводных водоемах в ассоциациях с сине-зелеными водорослями и в организмах свободноживущих простейших. Большинство видов не представляет опасности для человека.

В воде легионеллы размножаются, что происходит в диапазоне температур, равных 25-45 ^оС. Условия для размножения легионелл в искусственных водных системах (системы охлаждения и кондиционирования, градирни, компрессорные устройства, джакузи, медицинское оборудование и др.) более благоприятны, чем естественные, что и приводит к накоплению высоких концентраций бактерий. Основной фактор передачи – водный мелкодисперсный аэрозоль, образуемый системами водных коммуникаций.

Болезнь легионеров (острая пневмония с токсическим синдромом) вызывает L. pneumophila. Поражения респираторного тракта также спорадически вызывают L. micdadei и L. bozemanii. Оппортунистические заболевания могут вызывать L.micdadei, L.longbeachae, L.dumoffii и L.bozemanii, особенно при нарушениях клеточного иммунитета. Остальные виды не патогенны для человека.

Санитарно-микробиологическому исследованию на обнаружение возбудителя болезни легионеров (L. pneumophila) подлежат в порядке надзора:

1. Системы кондиционирования и вентиляции, водонагревательные и охладительные системы

2. Медицинское оборудование и инструментарий

3. Бассейны

4. Аквапарки

5. Джакузи

6. Фонтаны

Выявление L. pneumophila проводят также в ходе проведения противоэпидемических мероприятий и при эпидемиологическом расследовании вспышек болезни легионеров.

Отбор проб.Пробы воды объемом 0,5-1,0 дм³ отбирают в стерильные емкости. Для дехлорирования воды используют кристаллы гипосульфита натрия.

Поверхностные и глубинные пробы отбирают специальными батометрами.

Смывы с объектов (оборудования для кондиционирования и вентиляции, водонагревательных и охладительных систем, медицинского инструментария) забирают тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором и помещают в ту же пробирку.

Поскольку легионеллы способны к образованию биопленок на синтетической и резиновой поверхности водопроводного, промышленного, лабораторного и иного оборудования, связанного с циркуляцией и хранением воды, биопленки также забирают для исследования. Соскобы влажных биопленок с поверхности, находящейся под водой или на границе воды и воздуха, берут сухими тампонами и помещают во флакон или в пробирку. С высохшей поверхности биопленки забирают тампонами, увлажненными стерильным физиологическим раствором и помещают в пробирку со стерильным физиологическим раствором. Доставку проб осуществляют при температуре 6-24 ^оС.

Подготовка проб к исследованию.В случае сильной загрязненности образцы воды фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр с помощью стеклянной воронки. Затем воду пропускают через мембранный фильтр, который переносят после фильтрации в стерильный флакон с 10 см³ физиологического раствора. Содержимое флакон 1-2 мин перемешивают на встряхивателе или 10 мин на качалке и затем центрифугируют 30 мин при 6000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют. К осадку добавляют 1 см³ стерильного физиологического раствора и переносят в стерильную пробирку.

Для снижения уровня загрязненности сконцентрированной пробы посторонней микрофлорой одну её часть прогревают 30 мин при 50 ^оС, а другую обрабатывают кислотным буфером КСl-HCl (рН 2,2) в течение 4 мин.

Образцы биопленок, смывы с поверхностей концентрируют с помощью центрифугирования, кислотной и термической обработок.

Проведение анализа.Концентрированные, обработанные кислотным буфером и прогретые образцы засевают по 0,1 см³на чашки с буферным угольно-дрожжевым агаром (БУДРАГ) с ростовой и селективной добавкой. Помещают в термостат при 37 ^оС до 10 дней во влажной атмосфере в присутствии СО₂. Исследование посевов начинают с 2 суток. Колонии легионелл на селективной среде имеют вросший центр, зернистую или блестящую поверхность; окрашены в серовато-голубоватый или зеленоватый цвет. Идентифицируют легионеллы по морфологическим, тинкториальным (грамотрицательные палочки), антигенным свойствам (реакция латекс-агглютинации с моновалентными и групповыми сыворотками, иммунофлуоресцентная микроскопия с мечеными антителами), а также идентификацией ДНК бактерий в полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Определение количества легионелл в исследуемом материале.Для определения количества легионелл проводят посев исследуемой концентрированной пробы без тепловой и кислотной обработки. Подсчитывают число колоний легионелл, выросших на чашке. Количество легионелл определяют по формуле

Х = _c^{а х}^b_sх 1000см³

где

Х — количество легионелл на литр в исследуемой пробе

a — количество колоний легионелл, выросших на чашке

b — объем концентрата пробы (по завершении этапов фильтрации и центрифугирования) в см³

c — объем, высеянный на чашку, в см³мл

s — объем исходной пробы в дм³

Рекомендуемые значения для оценки уровня контаминации Legionella pneumophila объектов окружающей среды.

1. ПрисутствиеL. pneumophila в воде различных объектов окружающей среды, воде бассейнов, аквапарков, джакуззи, систем кондиционирования воздуха и др. в концентрации менее 1 х 10² микробных клеток на дм³ является допустимым и не требует проведения профилактических мероприятий.

2. Концентрация легионелл в диапазоне от 1 х 10² до 9 х 10³ микробных клеток на дм³ не представляет эпидемической опасности, но требует ежемесячного микробиологического контроля и проведения профилактических мероприятий.

3. При обнаружении легионелл в концентрации 1 х 10⁴ микробных клеток на дм³ и выше делают вывод о колонизации данного объекта легионеллами в концентрации, представляющей эпидемическую опасность и требующей дезинфекционных и профилактических мероприятий.

Дата добавления: 2018-08-06; просмотров: 678; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 1 23

Мы поможем в написании ваших работ!