I. Определение микробиологической чистоты воздуха

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха

В лечебно-профилактических организациях (ЛПО).

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха при текущем санитарном надзоре проводят в операционных блоках, перевязочных, послеоперационных палатах, отделениях и палатах реанимации и интенсивной терапии, в родильных комнатах, в палатах для недоношенных и травмированных детей, в детских палатах и других помещениях, требующих асептических условий (класса чистоты воздуха А и Б).

Помещения, не требующие асептических условий, относят к помещениям класса чистоты воздуха В и Г.

При текущем надзоре определяют:

1. Общее содержание микроорганизмов в 1 м³воздуха

2. Содержание золотистого стафилококка (S.aureus) в 1 м³воздуха

При исследовании воздуха по эпидемиологическим показаниям определяют также и патогенные микроорганизмы. Для количественного микробиологического исследования воздуха применяют аспирационный и седиментационный (в исключительных случаях) методы.

2.1.1. Определение общего содержания микроорганизмов в 1 м³

Аспирационный метод. Забор воздуха осуществляют аспирационным методом с помощью приборов (ПУ-1Б, «Флора», аппарат Кротова). Приборы устроены таким образом, что воздух с заданной скоростью засасывается через отверстия в крышке, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися в них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входным отверстием. Для определения общего количества микроорганизмов засевают по 100 дм³ воздуха на 2 чашки Петри с 2% питательным агаром. После инкубации посевов при 37 ^оС в течение 48 часов проводят подсчет колоний, выросших на чашках. Производят перерасчет на 1м³воздуха. Показатель выражают в КОЕ/м³.

Седиментационный метод (обычно применяют для исследования воздуха в боксах во время работы). Для контроля стерильности воздуха в боксах 2 чашки Петри с 2% мясо-пептонным агаром оставляют открытыми в течение 15 минут, после чего посевы инкубируют при 37 ºС 48 часов. Результаты оценивают по суммарному числу колоний, выросших на обеих чашках.

Норматив: допустимо присутствие не более 3 КОЕ неспорообразующих сапрофитов на чашках.

2.1.2. Определение содержания S.aureus в 1 м³. При проведении исследований 250 дм³ воздуха засевают на чашки с желточно-солевым агаром (ЖСА) или молочно-желточно-солевым агаром (МЖСА). Посевы инкубируют при 37 ºС 48 часов. Отбирают подозрительные колонии (круглые, блестящие, выпуклые, пигментированные, с положительной и отрицательной лецитовителлазной реакцией). Подозрительные колонии (не менее 2-х) микроскопируют и пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром. Инкубируют посевы при 37 ºС в течение 24 часов. Идентификацию проводят по морфологическим, тинкториальным свойствам и плазмокоагулирующей активности. Стафилококки окрашиваются по Граму положительно (фиолетово-синие кокки, располагающиеся гроздьями). Плазмокоагулирующую активность выявляют в реакции коагуляции плазмы (РКП). При выявлении только плазмокоагулирующей или только лецитовителлазной активности выделенной культуры, определяют ферментацию маннита и мальтозы в анаэробных условиях, гемолитическую активность, хлопьеобразование, образование ацетоина. При необходимости проводят фаготипирование выделенных культур, определяют чувствительность бактерий к антибиотикам, бактериофагам и дезинфектантам. Результаты выражают в КОЕ/м3.

Нормативы: в воздухе помещений класса чистоты А и Б общее количество микроорганизмов должно находится в допустимых пределах, золотистого стафилококка не должно быть. Санитарное состояние воздуха помещений классов чистоты В и Г не нормируется.

Таблица 1. Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздушной среды в больничных помещениях

Место отбора проб:	Класс чистотыпомеще-ний	Общее количество микроорганизмов в 1м³ воздуха (КОЕ/ м³)		Наличие S.aureus в 1м³воздуха
Место отбора проб:	Класс чистотыпомеще-ний	До начала работы	Во время работы	Наличие S.aureus в 1м³воздуха
Операционные, послеопера-ционные и реанимационные залы, в том числе для ожоговых больных, палаты интенсивной терапии, родовые залы, манипуляцион-но-туалетные для новорож-денных	А	Не более 200	Не более 500	Не должно быть
Послеродовые палаты, палаты для ожоговых больных, палаты для лечения пациентов в асептических условиях, в том числе для недоношенных с нарушениями иммунного статуса	Б	Не более 500	Не более 750	Не должно быть
Послеродовые палаты с совместным пребыванием ребенка, палаты для недоношенных, грудных, травмированных новорожденных	Б	Не более 500	Не более 750	Не должно быть
Палаты для взрослых больных, помещения для матерей детских отделений	В	Не нормируется	Не нормируется	Не нормируется
Диспетчерские, комнаты персонала, комнаты отдыха пациентов после процедур	Г	Не нормируется	Не нормируется	Не нормируется

II. Исследование микробной обсеменённости объектов больничной среды предусматривает выявление микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, S.аureus, Ps.аeruginosa, дрожжей, дрожжеподобных, плесневых грибков с предметов и изделий медицинского назначения (приборы и аппараты медицинские, оборудование санитарно-гигиеническое, средства перемещения и перевозки, установки стоматологические, оборудование стоматологическое, зубопротезное, оториноларингологическое и т.д.).

Отбор проб с поверхности различных объектов осуществляется методом смывов.

Взятие смывов производят стерильными ватными тампонами на палочках. Тампоны монтируют в пробирки. Для увлажнения тампонов в пробирки с тампонами наливают по 5 мл 1% пептонной воды, или по 2 мл стерильного физиологического раствора. Тампоны увлажняют непосредственно перед использованием, берут смыв с объекта и погружают в раствор в той же пробирке. Можно брать смывы марлевыми салфетками размером 5x5 см, простерилизованными в бумажных пакетах или чашках Петри. При использовании салфеток стерильный физиологический раствор разливают в стерильные пробирки по 2 мл. Салфетки захватывают стерильным пинцетом, увлажняют физиологическим раствором из пробирки и после протирания исследуемого объекта помещают в ту же пробирку.

При контроле мелких предметов смывы проводят с поверхности всего предмета. При контроле предметов с большой поверхностью смывы производят в нескольких местах исследуемого предмета с площади не менее 100-200 cм².

Смывы с мелких предметов (игла, шовный материал) можно получить, погрузив их непосредственно в колбу со стерильной жидкостью.

Для выделения S. аureus из каждой отобранной пробы производят посев непосредственно ватным тампоном на чашку с МСА или ЖСА. В качестве среды накопления используют МПБ с 6,5 % NaCl, в который засевают по 0,5 мл смывной жидкости. Засеянные пробирки инкубируют при 37 ^оС в течение 20-24 часов, после чего производят посев на питательный агар или молочный агар.

Чашки с посевами выдерживают в термостате при 37 ^оС в течение 2 суток или одни сутки в термостате и дополнительно 24 часа при комнатной температуре. и далее проводят идентификацию микробов, как и при исследовании воздуха.

Для выявления энтеробактерий и синегнойной палочки производят посев на среду обогащения. Для чего тампоны (марлевую салфетку) погружают в 10-20% желчный бульон, или среду Кесслера или другую среду накопления. Через сутки инкубации при 37 градусах делают посев на среду Эндо. Посевы на среде Эндо колоний характерных для условно-патогенных энтеробактерий – красных с металлическим блеском или без него, розовых с тёмным центром, розовых, слизистых, бледно-розовых готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. Лактозаположительные колонии подвергаются дальнейшему изучению для установления их возможной принадлежности к патогенным энтеробактериям и Ps. aerugenosa.

Синегнойная палочка на среде Эндо образует колонии с ровными, слегка волнистыми краями, гладкой блестящей поверхностью с характерным запахом и пигментом. Идентификацию производят по следующим свойствам: Гр – положительные, подвижные, оксидазаположительные, образующие пиоцианин, нитратазу на среде Кинг А, дающие рост при 42 градусах.

Идентификацию энтеробактерий проводят в соответствии с «Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний», вызываемых энтеробактериями МЗ СССР, № 04 – 723/3 от 17.12.84 года.

Исследования грудного молока, подвергнутого пастеризации, масла расторов для питья новорожденных лекарственных форм проводят с целью установления общей бактериальной обсеменённости, титра БГКП, Staph. aureus.

Для определения титра БГКП в грудном молоке его засевают на среды Кесслер в следующих объёмах 10 мм, 1 мл из разведения 10^-1 и 1 мл из 10 . Посевы инкубируют при 37 градусах в течение 24 часов, пересевают подозрительные пробы на среду Эндо. При росте характерных для БГКП колоний осуществляют постановку второй бродильной пробы на глюкозу с поплавком. При выявлении БГКП проводят идентификацию выделенной культуры. Для определения ОМЧ засевают параллельно на 2 чашки по 1 мл из разведения 1:10. Посев производят глубинным методом. В грудном молоке КОЕ – не более 5-10 г/мл, Коли-титр не менее 11,1.

Исследование масла проводят на наличие S. aureus и БКГП. Посев производят в 5 мл 6,5% солевого бульона в количестве 0,5 мл для определения S. aureus

При исследовании воды, инъекционных растворов, глазных капель определяют МАФАМ, ОМЧ, титр БГКП, наличие плесневых грибов, пирогенность.

Учет результатов МАФАМ не более 10-15, коли-индекс не более 3, плесневых грибов не должно быть, не должно содержать пироген.

III. При бактериальном контроле эффективности обработки рук медицинского персонала – смывы производят увлажнённой в растворе нейтрализатора или физ. раствора марлевой салфеткой: тщательно протирая ладони, околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук, начиная с менее загрязнённых участков. Марлевую салфетку помещают в широкогорлые пробирки или колбы с раствором нейтрализатора или стеклянными бусами, встряхивают в течение 10 минут, производят, отмыв марлевой салфетки. Отмытую жидкость засевают глубинным способом по 0,5 мл на чашки Петри с МПА, на пробирки с 5 мл тиогликолевой среды, а марлевую салфетку в 0,5 % сахарный бульон и тиогликолевую среду. Посевы инкубируют при 37 градусах в течение 48 часов.

Учет результатов. Руки считаются стерильными при отсутствии роста микрорганизмов как на твёрдой так и на жидкой средах. Кожа рук считается стерильной, если в отобранных смывах не регистрируется рост S. aureus, энтеробактерии.

IV. При исследовании проб на стерильность отбор проб производят: с шовного, перевязочного материалов, хирургического инструмента, производят в специально подготовленных боксах непосредственно перед посевом.

Дата добавления: 2018-08-06; просмотров: 1131; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 123 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!