Реагент для количественного определения общего белка
ДИАХИМ - Набор для клинического анализа спинномозговой жидкости.
Набор реагентов для анализа спинномозговой жидкости (СМЖ).
Инструкция по применению
Набор реагентов предназначен для определения цитоза, качественного и количественного определения общего белка и качественного определения глобулинов в спинномозговой жидкости в клинико-диагностических лабораториях.
Набор рассчитан на анализ 200 проб спинномозговой жидкости.
Клеточный состав (цитоз)
Реактив Самсона предотвращает цитолиз клеток в смесителе в течение нескольких часов. Уксусная кислота, которая содержится в реактиве, растворяет эритроциты, фуксин окрашивает ядра клеток в интенсивный красный цвет, что облегчает счет клеток и их дифференцирование.
Белок общий
Качественная реакция Панди
Белок с раствором фенола дает помутнение, интенсивность которого зависит от содержания белка.
Количественное определение общего белка в реакции с сульфосалициловой кислотой и натрием сернокислым
Белок с сульфосалициловой кислотой и натрием сернокислым дает помутнение, интенсивность которого пропорциональна содержанию белка и определяется фотометрически при длине волны 410 (400-480) нм.
Глобулины
Качественная реакция Нонне – Апельта
При взаимодействии глобулинов с насыщенным раствором сернокислого аммония появляется помутнение, интенсивность которого зависит от содержания глобулинов (осаждаются такие белковые фракции, которые остаются не осаждёнными в реакции Панди).
|
|
|
Состав набора
Реагент 1 - Реактив Самсона – 1 флакон (10 мл).
Реагент 2 - Фенол – 1 флакон (2,5 г).
Реагент 3 - Кислота сульфосалициловая 2-водная – 1 флакон (50 мл).
Реагент 4 - Натрий сернокислый или натрий сернокислый 10-водный – п/э пакет (70 г или 160 г).
Реагент 5 - Калибровочный раствор общего белка,10 г/л – 1 флакон (5,0 мл).
Реагент 6 - Аммоний сернокислый – п/э пакет (85 г).
Аналитические и диагностические характеристики набора
Клеточный состав (цитоз)
Повышенный цитоз наблюдают при воспалительных поражениях мозговых оболочек и органических поражениях вещества мозга.
Белок общий
Линейная область определения – в диапазоне от 0,1 г/л до 1,5 г/л, отклонение – не более 10 %.
Чувствительность – не более 0,05 г/л.
Коэффициент вариации результатов определения – не более 10 %.
Повышение содержание белка отмечают при нарушении гемодинамики, воспалительных процессах, органических поражениях ЦНС и оболочек мозга..
Пониженное содержание белка наблюдается при гидроцефалии и гиперсекреции СМЖ.
|
|
|
Глобулины
Минимальная определяемая концентрация глобулинов – 0,05 г/л (0,3 г/л общего белка).
Увеличение глобулиновой фракции наблюдается при кровоизлияниях в мозг, опухолях, менингитах, прогрессивного паралича, рассеянного склероза. Примесь крови всегда дает положительные глобулиновые реакции.
Нормальные значения:
Цитоз - Норма в люмбальном ликворе у взрослых – 2-4х10 6/л; у детей до 3 мес – 20-25х10 6/л; 3 мес. - 1 год – 14-20х10 6/л; 1-2 года – 11 -14х10 6/л; 2-5 лет - – 10 - 12х10 6/л; старше 10 лет – 2-6х10 6/л; большая цистерна – 0-1х10 6/л; в вентикулярном ликворе – 0-1х10 6/л; в субокципитальном – 2-3х10 6/л;
Концентрации белка: - при люмбальной пункции - 0,22-0,33 г/л; при вентрикулярной пункции - 0,12-0,20 г/л; при цистернальной пункции - 0,10-0,22 г/л; -у новорожденных - 0,6-0,9 г/л.
Меры предосторожности при работе с набором
Потенциальный риск применения набора – класс 2а.
В состав набора входят кислота сульфосалициловая 2-водная, токсичное вещество фенол, реагент 1 содержит уксусную кислоту. При работе с ним следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
|
|
|
Оборудование, материалы и реагенты:
спектрофотометр или фотоэлектроколориметр, длина волны 410 (400-480) нм, кювета с длиной оптического пути 1,0 см;
термостат, поддерживающий температуру (37 ±1)оС;
таймер;
рН-метр;
смеситель для лейкоцитов или часовое стекло;
камера Фукса-Розенталя или Горяева;
микроскоп;
цилиндр мерный 25 мл и 100 мл;
колба мерная вместимостью 500 мл;
колба коническая вместимостью 200 мл;
пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,2 до 1,0 мл и 5,0 мл;
пробирки стеклянные вместимостью 10 мл;
стекло предметное;
вода дистиллированная;
раствор аммиака, 10 %;
раствор натрия хлористого (9 г/л NаСI);
перчатки резиновые или пластиковые.
Анализируемые пробы
Спинномозговая жидкость, полученная при люмбальной пункции или пункции желудочков мозга. Стабильна при комнатной температуре не более 1 часа.
Проведение анализа
Приготовление рабочих растворов реагентов
Реактив Самсона
Готов к применению.
Реагент 1 можно хранить при температуре (2-8) оС в плотно закрытом флаконе в течение года.
Реактив Панди
К содержимому флакона с реагентом 2 добавить 25 мл воды дистиллированной, перемешать и поместить в термостат при 37 оС на сутки. В течение этого времени жидкость необходимо несколько раз перемешать. Далее реактив оставить на 1 сутки при комнатной температуре (18-25) оС. Прозрачная надосадочная жидкость и является реактивом Панди.
|
|
|
Раствор сульфосалициловой кислоты, 0,24 моль/л (6 %)
Содержимое флакона с реагентом 3 перенести в мерную колбу вместимостью 500 мл и довести объем раствора до метки дистиллированной водой.
Раствор реагента 3 можно хранить при комнатной температуре в течение года.
Раствор натрия сернокислого, 0,98 моль/л (14 %)
Содержимое пакета с реагентом 4 количественно перенести в мерную колбу вместимостью 500 мл растворить в 400 мл дистиллированной воды и довести объем раствора до метки дистиллированной водой.
Раствор реагента 4 можно хранить при комнатной температуре в течение года.
Реагент для количественного определения общего белка
Смешать раствор сульфосалициловой кислоты, 6 % и раствор натрия сернокислого, 14 % в соотношении 1:1.
Готовят непосредственно перед применением, его можно хранить при комнатной температуре не более 8 часов.
Реагент 5 - Калибровочный раствор общего белка, 10 г/л
Готов к применению.
После вскрытия флакона калибровочный раствор можно хранить при температуре (2-8) оС в плотно закрытом флаконе не более 6 мес.
Дата добавления: 2018-06-01; просмотров: 479; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!