ГЛАВА 2. ТАКТИКА МЕДИЦИНСКОГО ЛАБОРАТОРНОГО ТЕХНИКА В ДИАГНОСТИКЕ ГЕЛЬМИНТОЗОВ
Лабораторная диагностика гельминтозов
Для диагностики гельминтозов существуют:
1. Макроскопические методы.
2. Микроскопические методы.
Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом, либо с помощью ручной лупы и стереоскопа.
На поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц, иногда выделяются с калом аскариды, у больных дифиллоботриозом могут выделять обрывки стробилы лентеца (в виде «лапши»), а у инвазированных тенииадами (свиной или обычный цепень) с калом часто отходят членики гельминтов.
Подготовка к исследованию.
1. Извлекать пинцетом или препаровальной иглой все подозрительные частицы и крупные образования на отдельное предметное стекло или чашку Петри.
2. Образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривают под микроскопом или под лупой между двумя предметными стеклами.
3. Мелких гельминтов рассматриваем в капле глицерина или физиологического раствора под микроскопом при увеличении: окуляр × 7, × 10, объектив × 8, × 10.
4. Членики ленточных гельминтов поместить на предметное стекло, подсушить, закрыть другим предметным стеклом, слегка сдавить и рассмотреть строение матки.
5. Микроскопия всех визуально обнаруженных в кале паразитов или фрагментов обязательна для уточнения морфологических особенностей и идентификации паразита [10].
|
|
|
Микроскопические методы.
· Для выявления гельминтозов нами был проведен метод толстого мазка под целлофаном по Като (см. Приложение 3).
Толстый мазок представляет собой тонкий слой пробы кала на предметном стекле под гигроскопическим целлофаном, пропитанным смесью глицерина, фенола и малахитового зеленого.
Приступаем к проведению анализа:
1. Полоски помещаем в рабочий раствор Като не менее, чем на 24 часа до проведения анализа. В 200 мл рабочего раствора можно обрабатывать до 5 тысяч новых целлофановых полосок.
2. На предметное стекло наносим пробу кала размером с горошину. Весь объем кала растираем индивидуальной стеклянной палочкой по стеклу.
3. Мазок кала накрываем целлофановой полоской, обработанной в растворе.
4. Целлофан сверху притираем резиновой пробкой или специальным валиком, ширина которого соответствует ширине предметного стекла, до получения тонкого, равномерного, прозрачного слоя.
5. Препарат просветляется при комнатной температуре в течении 20 – 30 минут.
6. Микроскопируем при увеличении: объектив × 8, окуляр × 7 или × 10 (для уточнения морфологического строения яиц гельминтов – объектив × 40).
При прохождении мною преддипломной практики в ГБУЗ ЛО «Волховской межрайонной больнице» было просмотрено 120 препаратов, выполненных по данной методике, из них было обнаружено только 1яйцо аскариды и 1 яйцо широкого лентеца.
|
|
|
Эффективность данного метода:
1. Метод позволяет просмотреть в 20 -30 раз больше препаратов кала, чем в нативном мазке без применения гигроскопических целлофановых полосок.
2. Выявляет яйца гельминтов желудочно - кишечного тракта (далее - ЖКТ) при высокой и средней интенсивности инвазии.
Применение метода: рекомендуется при массовых обследованиях населения на кишечные гельминтозы [18].
· Модификация метода седиментации с применением одноразовых концентраторов «PARASEP».
Перед взятием пробы добавляем в пробирку 0,9 мл раствора этилацетата (флакон с реактивом прилагается в упаковке с модулями «Parasep»).
Пробу кала массой 1,0 г лопаткой - фильтром опускаем в полученный раствор.
Камеру с образцом присоединяем к пробирке, закрыв замок (нужно закрутить до щелчка). Тщательно встряхиваем систему в течение 30 секунд для получения однородной взвеси. В таком состоянии образец может храниться в течении 24 часов при комнатной температуре (18 - 24°С) и до 30 суток в холодильнике (4°С).
После получения взвеси систему переворачиваем и конической стороной помещаем в центрифугу и центрифугируем при скорости 2500 - 3000 оборотов в минуту в течении 1 - 3 минут, при скорости 1500 оборотов в минуту - 5 минут.
|
|
|
В конической части пробирки остается жидкая часть пробы с выделившимся в нее яйцами гельминтов, цистами простейших.
Далее отсоединяем модуль с фильтром (держать строго вертикально), избегая перемешивания жидкости с осадком. Фильтровальный модуль утилизируется после обеззараживания (кипячением, автоклавированием). Коническая часть пробирки оставляем для микроскопирования. При образовании «пробки» из этилацетата и жировых частиц необходимо удалить, обведя стеклянной палочкой.
Осадок суспендировать, т.е. одну каплю осадка помещаем на предметное стекло, а во вторую каплю наносим 2% - й раствор Люголя. Препараты накрываем покровными стеклами. После этого приступаем к микроскопированию (окуляр × 10, объективы × 10, ×40).
Метод модификации облегчает визуализацию искомых патогенов, обеспечивает их качественное и количественное определение в субстрате. Исключает необходимость приобретения дополнительных реактивов [17].
· Метод исследования кала с применением флотационных растворов.
|
|
|
В основе этого метода лежит разность удельного веса флотационного раствора и яиц гельминтов, удельный вес флотационного раствора выше, в результате яйца гельминтов всплывают на поверхность жидкости и обнаруживаются в поверхностной пленке.
Далее переходим к подготовке к исследованию (см. Приложение 4).
Проведение метода:
1. В химический стаканчик объемом 30 - 50 мл наливаем небольшое количество одного из двух флотационных растворов.
2. Помещаем в стаканчик 2,5 г кала.
3. Тщательно размешиваем индивидуальной палочкой.
4. После размешивания всплывшие крупные частицы сразу же удаляем палочкой.
5. Постепенно добавляем солевой раствор до образования выпуклого мениска.
6. Стаканчик накрываем обезжиренным предметным стеклом. Взвесь оставляем на 30 минут при использовании растворов N 1 и 2. Затем микроскопируем при увеличении: объектив × 8, × 10, окуляр × 7, × 10, уточнение морфологического строения - окуляр × 40.
Если мы не можем микроскопировать, то сразу необходимо добавить несколько капель глицерина и накрыть покровным стеклом.
· Методы исследования перианального отпечатка с применением липкой ленты по Грэхэму.
Применяются для выявления яиц остриц и онкосферы тениид при индивидуальных и массовых обследованиях.
Кроме микроскопа, необходимое оборудование зависит от способа получения отпечатка: предметные стекла, полоски прозрачной липкой ленты (скотч), глазные палочки со специальными клеевым слоем.
При массовых обследованиях населения (в основном детского) заранее подготовить предметные стекла с липкой лентой, флаконы или специальные штативы с глазными палочками, покрытыми клеевым слоем. Промаркировать предметные стекла, флаконы маркировать во время забора материала у обследуемых согласно номеру по списку.
Ход исследования зависит от способа отбора материала.
Подготовка к исследованию.
1. Подготовить отрезок липкой ленты длиной 8 - 10 см, предварительно наклеить его на предметное стекло.
2. Перед взятием анализа отклеить полоску липкой ленты от предметного стекла, держа полоску за концы, плотно прижать всей липкой поверхностью к перианальным складкам, стараясь пальцами рук не касаться перианальной области.
3. Отклеить полоску липкой ленты от кожи перианальной области и липким слоем вниз ленту перенести на предметное стекло, приклеить к стеклу равномерно для предотвращения образования воздушных пузырей, мешающих микроскопии.
4. Концы ленты, выходящие за края стекла, отрезать.
5. Микроскопировать при увеличении: объектива × 8 или 10, окуляр × 7 или 10.
При исследовании 156 препаратов соскоба с перианальных складок, выполненных по данной методике, было обнаружено 4 яйца острицы.
Дата добавления: 2018-05-13; просмотров: 605; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!