Реакция №4 «Осаждение концентрированными минеральными кислотами»
Принцип: концентрированные кислоты (серная, хлористоводородная, азотная и др.) вызывают денатурацию белка за счет удаления факторов устойчивости белка в растворе (заряда и гидратной оболочки). Однако при избытке хлористоводородной и серной кислот выпавший осадок денатурированного белка вновь растворяется. По-видимому, это происходит в результате перезарядки молекул белка и частичного гидролиза. При добавлении избытка азотной кислоты растворение осадка не происходит (точный механизм этого явления не установлен). Вот почему для определения малых количеств белка в моче в клинических лабораториях пользуются азотной кислотой.
Реактивы: 1) яичный белок, 1% раствор; 2) концентрированная серная кислота; 3) концентрированная хлористоводородная кислота; 4) концентрированная азотная кислота.
Ход определения: в 3 пронумерованные пробирки наливают по 10 капель концентрированных кислот: в 1-ю пробирку серную кислоту, во 2-ю пробирку хлористоводородную, в 3-ю пробирку азотную. Затем, наклонив пробирку под углом 450С, осторожно по стенке пробирки (так, чтобы жидкости не смешивались) наслаивают 1 каплю раствора яичного белка. На границе двух слоев появляется осадок белка в виде белого кольца. Осторожно встряхивают пробирки, и добавляют избыток кислот, после чего наблюдают растворение белка в пробирках с серной и хлористоводородной кислотами, а в пробирке с азотной кислотой растворения белка не происходит.
|
|
|
Реакция №5 «Осаждение органическими кислотами»
Принцип: трихлоруксусная кислота осаждает только белки, а сульфосалициловая осаждает не только белки, но и высокомолекулярные полипептиды. Сульфосалициловой кислотой (как самой чувствительной) широко пользуются для обнаружения белка в моче.
Реактивы: 1) яичный белок, 1% раствор; 2) трихлоруксусная кислота, 10% раствор; 3) сульфосалициловая кислота, 20% раствор.
Ход определения: в 2 пронумерованные пробирки приливают по 5 капель раствора яичного белка. Затем в 1-ю пробирку добавляют 2 капли сульфосалициловой кислоты, а во 2-ю пробирку добавляют 2 капли трихлоруксусной кислоты. В пробирках выпадает осадок белка.
Дата добавления: 2018-05-12; просмотров: 337; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!