Выделение чистой культуры аэробных бактерий
Выделение микроорганизмов из различных материалов и получение их культур широко используется в лабораторной практике для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.
Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида, полученная в изолированном состоянии (например, на питательной среде).
Выделение чистой культуры аэробных бактерий достигается механическим разобщением исследуемого материала при посеве на питательные среды в присутствии кислорода.
Луи Пастер предложил для этой цели последовательное разведение исследуемого материала в жидкой питательной среде, однако выделить чистую культуру этим методом очень сложно, т.к. при этом требуется очень большое количество разведений.
Проблему выделения чистых культур решил Роберт Кох. Он предложил исследуемый материал разводить в пробирках с расплавленным и остуженным до температуры 45-50 °С МПА (количество разведений зависит от исходной обсемененности материала.). Затем содержимое каждой пробирки выливают в стерильную чашку Петри, которые помещают в термостат. На следующий день посевы изучают. Отбирают подозрительные колонии, изучают их макроскопически и микроскопически в окрашенных препаратах. Далее производят пересев колонии в пробирку со скошенным МПА. На следующий день проверяют чистоту выделенной культуры визуально и микроскопически. В настоящее время метод Коха применяется, в основном, для подсчета количества микробов в исследуемом материале.
|
|
|
В практических лабораториях обычно для выделения чистых культур используется метод Дригальского – поверхностный последовательный рассев исследуемого материала петлей или шпателем на три чашки (три сектора) с МПА. Процесс выделения чистой культуры можно разделить на несколько этапов.
Материал направляют в бактериологическую лабораторию с направлением, в котором указан предполагаемый диагноз.
Первый этап. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму или другим методом (в зависимости от предполагаемого диагноза) и микроскопируют.
Далее производят посев материала на три чашки Петри с питательной средой последовательно. Материал забирают бактериальной петлёй и наносят на поверхность питательной среды в первой чашке Петри, затем на поверхность среды во второй чашке,и в третьей. Только после посева на третью чашку петлю прожигают в пламени спиртовки. Чашки подписывают на донышке и ставят вверх дном в термостат при температуре 37 °С на 18-24 часа.
Второй этап. На следующий день посевы просматривают и отбирают «подозрительные» колонии. «Подозрительными» являются колонии предполагаемого возбудителя. Изучают морфологию бактерий исследуемых колоний путем приготовления мазка, окрашенного по методу Грама. При обнаружении в мазке бактерий, имеющих морфологические и тинкториальные свойства предполагаемого возбудителя, производят пересев колонии в пробирку со скошенным МПА для выделения и накопления чистой культуры. Пробирки подписывают и помещают в термостат при температуре 37 °С на 18-24 часа.
|
|
|
Третий этап. На следующий день отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Проводят макроскопическое (визуальное) исследование посевов. Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом (колонии должны быть однотипными). Далее проводят микроскопическое изучение культуры. При обнаружении в мазке морфологически и тинкториально однородных клеток, делают вывод о получении чистой культуры и продолжают исследование. Изучают биохимические, антигенные и патогенные свойства бактерий для идентификации выделенной культуры, то есть определения вида, а иногда и биовара, серовара, фаговара.
Кроме упомянутых методов, в бактериологической практике иногда применяют и другие, например, для выделения протея, обладающего «ползучим» ростом, используют метод Шукевича. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного МПА. Бактерии, обладающие ползучим ростом, из конденсационной воды вползают на поверхность агара. На следующий день проверяют чистоту выделенной культуры. Из верхнего края налета делают мазок, окрашивают по Грамму и микроскопируют.
|
|
|
Для выделения чистой культуры микробов с трудом культивируемых на питательных средах (например, пневмококков), используют биологический метод – заражение наиболее восприимчивых к данному виду возбудителя животных. После гибели или появления признаков заболевания животных забивают и производят посев крови и органов на питательные среды и микроскопическое исследование мазков-отпечатков из органов. Далее исследование проводят как в методе Дригальского.
Чистую культуру аэробных бактерий можно также получить, если на исследуемый материал воздействовать каким-либо физическим или химическим фактором, оказывающим избирательное антибактериальное действие. Например: для выделения чистых культур спорообразующих бактерий, исследуемый материал прогревают при температуре 80 °С в течение 20 минут или кратковременно кипятят для уничтожения вегетативных форм. Споры при этом сохраняются и при посеве материала на питательную среду прорастают. Далее чистую культуру получают обычным путем.
|
|
|
Для выделения чистой культуры возбудителя чумы посевы инкубируют при температуре 25 °С. Данный температурный режим подавляет рост сопутствующей микрофлоры.
Для получения чистой культуры кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза) исследуемый материал (мокроту) обрабатывают 2% серной кислотой, уничтожающей сопутствующую флору, нейтрализуют щелочью, после чего производят посев на питательную среду.
Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 2795; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!