Модификация окраски Грамма по А.И. Синеву
Заготавливают полоски фильтровальной бумаги, пропитанной карболовым раствором генцианфиолета и высушенной. На препарат накладывают полоски такой бумаги (немного меньше предметного стекла) и наливают 2-3 капли дистиллированной воды. Окрашивают в течении 2-х минут. Снимают бумажку пинцетом и наливают раствор Люголя на 1 минуту. Обесцвечивают спиртом и далее продолжают окраску по Граму.
Для дифференциации нейссерий используется окраска по Граму в модификации Калины (окраска грамнеопределенных микроорганизмов).
Красители:
1. 0,5% спиртовой раствор бриллиантового зелёного, (0,05г бриллиантового зеленого + 10,0 мл спирта этилового 960).
2. Основной реактив состоит из:
0,5% спиртового раствора калия йодида – 96мл.
5% спиртового раствора основного фуксина – 2 мл.
5% спиртового раствора йода – 2 мл.
0,5% спиртового раствора калия йодида готовят при подогревании в водяной бане. После полного растворения навески калия йодида в спирте раствор соединяют с 5% спиртовым раствором фуксина и 5% спиртовым раствором йода.
3. Раствор спирта:
Спирта этилового 960 - 30 мл.
Дистиллированной воды – 70 мл.
4. Водный раствор фуксина
основной фуксин Циля – 1мл.
Дистиллированной воды - 9 мл.
Окраска по методу Калины
В капле воды на предметном стекле суспенсировать культуру микроорганизмов и туда же внести петлей каплю 0,5% спиртового раствора бриллиантовой зелени. После высыхания препарат зафиксировать над пламенем спиртовки. Затем на препарат налить основной реактив на 1,5 – 2 мин., после чего промыть водой. Далее препарат в наклонном положении промыть в спирте (рецепт №3) до отхождения облачков краски и немедленно отмыть водой. Затем произвести докрашивание препарата водным раствором фуксина в течение 2 минут, окончательно промыть водой и подсушить. При микроскопировании грамотрицательные бактерии выглядят ярко-розовыми, грамположительные зеленовато-черными или тёмно-фиолетовыми.
|
|
|
Тест Грегерсена (тяжа)
При не четкой окраске микроорганизмов по Граму (Гр +) применяют тестГрегерсена (тяжа). Грамположительные бактерии по сравнению с грамотрицательными бактериями резистентны к действию щелочи, т.к. грамположительные бактерии имеют более толстую клеточную стенку и при действии щелочи клетка не разрушается.
ПОСТАНОВКА ТЕСТА:
1. На предметное стекло наносят стерильной петлей каплю 3% раствора КОН.
2. В каплю щелочи вносят изучаемую культуру и размешивают, периодически поднимая петлю (наблюдение вести в течение 15 секунд).
|
|
|
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:
У грамотрицательных микроорганизмов образуется тяж, т.к. стенка клетки разрушается, содержимое клетки цепляется за петлю (тест - положительный)
 |
У грамположительных микроорганизмов тяж не образуется (тест - отрицательный)
Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 731; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!