Реактивы для окраски по Граму
РАЗДЕЛ 1: общая микробиология
ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:
обучающие:
· познакомить с механизмом окраски по Граму, дать понятие о классификации
бактерий на основе строения их клеточной стенки и отношения к окраске по Граму;
· обучить методике окраски по Граму и модификациям метода;
· закрепить умения по технике микроскопирования окрашенного препарата
развивающие:
· способствовать формированию клинического мышления учащихся; познавательных способностей
воспитательные:
· воспитание у учащихся аккуратности и точности; умение определять и решать профессиональные вопросы;
· сформировать ответственность за качество проведения и конечный результат исследования
ЗАДАНИЯ.
- Подготовить предметное стекло для препарата.
- Подготовить бактериологическую петлю.
- Приготовить препарат для микроскопирования из культуры на плотной питательной среде.
- Приготовить раствор Люголя
- Приготовить раствор карболовый раствор генциана фиолетового.
- Приготовить фуксин Циля.
- Окрасить препарат по Граму.
- Произвести микроскопию препарата. Результат микроскопии отразить на рисунке.
- Поставить тест Грегерсена «тяжа» и оценить результат.
- Ответить на контрольные вопросы.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ.
- Что такое тинкториальные свойства бактериальной клетки?
- Назовите основные компоненты клеточной стенки бактерий?
- В чем состоит основной принцип окраски бактерий по Граму?
- Назовите красители, применяемые при окраске по Граму?
- Как окрашиваются по Граму бактерии с толстой клеточной стенкой?
- Как окрашиваются по Граму бактерии с тонкой клеточной стенкой?
- Раствор Люголя и его значение в окраске препарата?
- Особенности модификации окраски Грама по А.И. Синеву
РАЗДЕЛ 1: общая микробиология
|
|
|
ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:
обучающие:
· познакомить с механизмом окраски по Граму, дать понятие о классификации
бактерий на основе строения их клеточной стенки и отношения к окраске по Граму;
· обучить методике окраски по Граму и модификациям метода;
· закрепить умения по технике микроскопирования окрашенного препарата
ЗАДАНИЯ.
- Подготовить предметное стекло для препарата.
- Подготовить бактериологическую петлю.
- Приготовить препарат для микроскопирования из культуры на плотной питательной среде.
- Приготовить раствор Люголя
- Приготовить карболовый раствор генциана фиолетового.
- Приготовить фуксин Циля.
- Окрасить препарат по Граму.
- Произвести микроскопию препарата. Результат микроскопии отразить на рисунке.
- Поставить тест Грегерсена «тяжа» и оценить результат.
- Ответить на контрольные вопросы.
|
|
|
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ.
1. Что такое тинкториальные свойства бактериальной клетки?
2. Назовите основные компоненты клеточной стенки бактерий?
3. В чем состоит основной принцип окраски бактерий по Граму?
4. Назовите красители применяемые при окраске по Граму?
5. Как окрашиваются по Граму бактерии с толстой клеточной стенкой?
6. Как окрашиваются по Граму бактерии с тонкой клеточной стенкой?
7. Раствор Люголя и его значение в окраске препарата?
8. Особенности модификации окраски Грама по А.И. Синеву
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЕ
Окраска по Граму
Метод окраски введен впервые в 1884 году датским физиком Христианом Грамом. Метод окраски по Граму является самым универсальным из сложных способов окраски. Он позволяет не только определить морфологию микроорганизмов, но и дифференцировать их на уровне строения клеточной стенки. Отношение к окраске по Граму является важным опознавательным признаком бактерий.
Все бактерии по своему отношению к окраске по Граму разделяются на 2 группы: грамположительные (фиолетовые) и грамотрицательные (красные).
Механизм окраски объясняется тем, что у грамположительных микроорганизмов по сравнению с грамотрицательными структура клеточной стенки напоминает губчатое вещество. Она представлена многослойным «муреиновым каркасом» (до 10 слоёв пептидогликана, что составляет 90% массы клеточной стенки) и тейхоновыми кислотами поэтому грамположительные микроорганизмы образуют более прочное соединение с основными красителями (генцианфиолетом и раствором Люголя), которое не разрушается при обесцвечивании 960 спиртом.
|
|
|
У грамотрицательных микроорганизмов структура клетки имеет слоистое строение. В клеточной стенке содержится 2-3 слоя пептидогликана и отсутствуют тейхонове кислоты, поэтому образуется нестойкое соединение с основными красителями, которое разрушается при обесцвечивании 960 спиртом, в результате грамотрицательные микроорганизмы докрашиваются фуксином Пфейферра в красный цвет.
Реактивы для окраски по Граму
1. Карболовый раствор генциана фиолетового: 1 г генциана фиолетового, 10 мл ректификованного этилового спирта, 5 г фенола растирают в ступке, добавляя 100 мл дистиллированной воды. В ступке растереть краситель с карболовой кислотой до получения кашицеобразной массы, прибавить небольшими порциями спирт и развести водой. Слить раствор в бутыль, поместить в термостат до растворения, профильтровать.
|
|
|
2.Раствор Люголя: 1 г йода кристаллического, 2 г йодистого калия растворяют в 300 мл дистиллированной воды. Смесь поместить в бутыль матового стекла, хорошо закупорить и поставить на сутки в термостат, после чего добавить 300мл дистиллированной воды. Хранить во флаконе из темного стекла.
3. Фуксин Циля : К 10 мл. насыщенного спиртового раствора основного фуксина прилить 90 мл 5% раствора карболовой кислоты. ВНИМАНИЕ! Карболовую кислоту влить в краситель, а не наоборот. Каждый краситель фильтруют не менее 2-х раз.
4. Водный раствор фуксина Пфейффера: Фуксин Циля – 1 мл и воды дистиллиро-
ванной– 9 мл. Фуксин Пфейффера готовят ежедневно.
Техника окраски по Граму
1. На препарат наливают карболовый раствор генциана фиолетового. Окрашивают 1-2 минуты.
2. Не промывая дистиллированной водой наносят раствор Люголя до почернения (1минута), затем краситель сливают
3. Не промывая дистиллированной водой наносят 960этиловый спирт (30-60с) до отхождения синих струек красителя.
4. Промывают дистиллированной водой.
5. Докрашивают фуксином Пфейффера 3 минуты. Промывают водой и высушивают. Микроскопируют с помощью иммерсионной системы.
Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 3377; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!