Гормональные методы исследования на беременность

⇐ ПредыдущаяСтр 4 из 6Следующая ⇒

При беременности в значительной мере изменяется гормональное зеркало организма животных. В большей степени эти изменения происходят у кобыл и приматов. Так, по исследованиям Цондека и Ашгейма в крови и моче беременных обезьян обнаружено много половых гормонов. Это дало повод использовать изменения в гормональном статусе у человека для диагностики беременности.

Гормональная диагностика беременности в ветеринарии разработана только у лошадей по пролану и фолликулостерону. К 45-му дню со дня оплодотворения количество пролана доходит до 26 000 МЕ, а к 90 дню — до 100.000 — 200.000 МЕ. Фолликулина накапливается в моче к 3 - 4 месяцам беременности от 28.000 до 1.000.000 МЕ.

У беременных коров и свиней, по данным одних исследователей, гонадотропины отсутствуют как в крови, так и в моче,а по данным других, наоборот, гонадотропины в крови беременных бывают в большом количестве. Фолликулостерону этих животных обнаруживается в весьма ограниченных количествах. Так, у коров фолликулостерона в первую половину беременности бывает всего 7-8 МЕ, а во вторую — 400 – 800 МЕ.

У супоросных свиней фолликулостерон обнаруживается в промежутке между 7—8 днями и 20—22 днями в количестве 300—500 МЕ. С 22-го по 35-й день — в пределах 1.000— 3.000 МЕ. С 35-го по 75-й день он не обнаруживается, появляется так называемый фолликулостероновый провал. Со второй половины и до конца беременности количество фолликулостерона постепенно увеличивается до 1.000 МЕ в 1 л мочи.

Количество или доза натуральных гормонов определяется мышиными, крысиными или кроличьими единицами; доза синтетических гормонов определяется в миллиграммах.

Под мышиной единицей понимают минимальное количество фолликулостймулирующего или эстрогенного гормонов, которое способно вызывать сдвиги в половой функции, т. е. обусловить половой цикл у 50% инфантильных мышей. Дозы, вызывающие такие же изменения у крысы и крольчихи, называются крысиной или кроличьей единицами.

Реакция Холла и Харта. Реакция основана на выявлении пролана в крови жеребых кобыл в промежутках между 45 и 120 днями жеребости.

Методика. Сыворотку инъецируют инфантильным (и возрасте 20—28 дней и весом 6—8 г) мышам: первой 0,5 мл, второй — 0,3 и третьей — 0,1 мл два раза в сутки в течение 3 дней. Всего 6 инъекций. Спустя 4—5 дней берут платиновой петлей слизь со слизистой оболочки влагалища (но не преддверия) и делают мазки. При жеребости в мазках обнаруживаются в большом количестве безъядерные, эпителиальные клетки («чешуйки»). Отсутствие «чешуек» — отрицательная реакция. При неясной картине производят убой мышки.

Положительной реакцией считается увеличение рогов матки у исследуемых мышей по сравнению с контрольными, наличие зрелых и заполненных кровью фолликулов или желтых тел.

Убой подопытных животных осуществляется через 100 часов.

Реакция Фридмана и Шнейдера.Тестообъектом служит половозрелая крольчиха, весом 900—1200 г. Ей инъецируют в ушную вену 10 мл сыворотки крови исследуемой кобылы. Учет реакции производится через 36-48 часов. Для чтения реакции крольчихе производят лапаротомию. При осмотре яичников крольчихи обнаруживают кровоизлияния на месте лопнувших фолликулов или кровоизлияния в полость фолликулов. После чтения реакции брюшная полость зашивается, а через 2-3 недели крольчиха пригодна для повторной пробы.

Реакция Цондека и Ашгейма.Реакция основана на выявлении в моче фолликулостерона, начиная с 3 месяцев беременности. Перед, инъекцией под кожу инфантильным или кастрированным мышам мочи ее фильтруют через бумажный фильтр и подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции (по лакмусовой бумажке).

Для повышения действия фолликулостерона и понижения токсичности мочу желательно дополнительно обработать эфиром. К моче добавляют равное количество эфира и тщательно взбалтывают. После того как эфир слили, мочу оставляют открытой до исчезновения эфирного запаха. Для реакции берут 4-6 кастрированных мышек не раньше чем через 2 недели после операции. Подопытным мышкам вводят в течение 3 дней по 2 раза в сутки мочу исследуемого животного в следующих дозах:

Кастрированным: Инфантильным:

1-й 0,3 мл цельной мочи 1-й 0,2 мл цельной мочи

2-й 0,2 » » » 2-й 0,1 » » »

3-й 0,1 » » » 3-й 0,1 » » »

4-й 0,1 » мочи, разбав- 4-й 0,1 » мочи, разбав-

ленной водой в 2 раза ленной водой в 2 раза

Через 80—100 часов по 3 раза в день платиновой петлей получают из влагалища слизь и этой же петлей делают мазок на стекле. После высушивания на воздухе, мазки фиксируют спиртом и окрашивают по Гимза. Большое количество чешуек указывает на течку у мышки, а следовательно, на беременность у лошади. Отсутствие или ограниченное количество чешуек — отрицательная реакция. В сомнительных случаях производят забой и вскрытие мышек. Увеличение рогов матки в 2 раза и больше считается положительной реакцией.

Реакция Бабичева.Реакция основана на определении фол-ликулостерона в моче кобыл, начиная с 3-месячной беременности.

Методика. К 15 мл мочи добавляют 1 мл серной кислоты. Колбу с мочой кипятят 15 минут на водяной бане. После охлаждения на мочу наслаивают 3-4 мл бензола так, чтобы он не смешивался с ней, и осторожно вращают колбу 70 раз. Затем пипеткой бензол сливают в пробирку и добавляют в нее 1 мл концентрированной серной кислоты. Пробирку ставят на 2 минуты в водяную баню. После охлаждения смотрят на окраску слоя серной кислоты в отраженных лучах на темном фоне. Зеленоватая флюоресценция указывает на наличие фолликулостерона, а следовательно, и беременность. Коричневое окрашивание — отрицательная реакция. Реакция простая и точная.

Лабораторная диагностика беременности у коров практически не разработана в таких масштабах, чтобы ее можно было использовать в производстве.

Методы диагностики, основанные на феномене кристаллизации, удельном весе шеечной слизи и обнаружении Сахаров при кипячении слизи с растворам едкого калия и с дистиллированной водой, дают большие ошибки.

Электрометрический метод Ф. И. Осташко и биологический метод на лягушках (самцах) М. Н. Тростянецкой еще не апробированы широкой практикой.

Беременность сопровождается рядом изменений в половой, эндокринной, иммунной и других системах организма; эти изменения можно обнаружить лабораторными тестами. Наибольшую известность получили гормональные методы. К ним относятся:

1. Определение уровня прогестерона в крови или молоке коров на21 – 24-е сутки, свиней – на 18-20-е, овец – на 18-е сутки после осеменения. Метод основан на том, что при отсутствии беременности к указанному сроку содержание прогестерона снижается в связи с рассасыванием желтых тел, тогда как' у беременных остается относительно высоким.

Содержание прогестерона можно определить быстрым методом, для чего используют тестовые трубочки. В нее вносят 3 капли молока; при высоком уровне прогестерона получают яркое голубое окрашивание.

В условиях специализированной лаборатории уровень гормона определяют радиоизотопным методом. Положительный диагноз ставят при содержании прогестерона 11 ng/мл, отрицательный — 2 ng/мл и ниже. Точность отрицательных диагнозов составляет 96-97%, положительных — 75-82%. Диагностические ошибки возникают из-за увеличения продолжительности или выпадения половых циклов, персистенции желтого тела, резорбции зародыша.

2. Индукция течки у коров инъекцией малых доз эстрогенов (3 – 5 мг стильбестрола или комбинации стильбестрола с тестостероном) на 17-24-е или 38-42-е сутки после осеменения. При отсутствии стельности в течение 5 суток после инъекции препарата проявляется стадия возбуждения полового цикла, тогда как стельные коровы на такую дозу препарата не реагируют.

3. В ФРГ для диагностики супоросности был предложен препарат, содержащий в дозе 400 ИЕ сывороточного гонадотропина и 200 ИЕ хорионгонадотропина. У несупоросных свиноматок на 4-7-е сутки после инъекции препарата наступает полноценная стадия возбуждения полового цикла и ее можно повторно осеменять. При наличии супоросности он не оказывает вредного действия на свиноматку и плоды.

4. Обнаружение в крови сывороточных гонадотропинов биологическим путем. Метод пригоден лишь для диагностики жеребости.

Иммунологические методы.К настоящему времени определилось два подхода: 1-определение наличия эмбриоантител в организме самки реакциейглютинации; 2-обнаружение иммунодепрессоров которые циркулируют в крови беременной самки; от образуются в зародыше и подавляют материнский иммунный ответ. Иммунодепрессорный фактор (ранний фактор беременности) обнаруживается в материнской крови с 15-х по 38-е сутки после осеменения.

Иммунологические методы не получили широкого практического применения в животноводство ввиду их сложности либо низкой достоверности результатов.

Гистовагинальный метод.Предназначен диагностики беременности у овец и свиней. Метод основан на том, что во время полового цикла слизистая

оболочка передней части влагалища покрыта рядным плоским эпителием (10-12 слоев). В поверхностных слоях эпителий чешуйчатый, в полигональный. С наступлением беременности ходит прогрессирующее уменьшение числа слоев (до 2-3); эпителий в этот период представлен кубически и цилиндрическими клетками с четко выраженным хроматином.

Материал для гистологического исследования берут посредством биопсии из передней части влагалища. Метод обеспечивает почти 100% - ное совпадение результатов с фактическими опоросами (окотами). Однако в условиях производства он не может найти широкое применение из-за чрезмерно больших затрат труда при взятии биопсийного материала и проведении гистологических исследований.

Назовите диагностические критерии клинической и биологической смерти.

Составил преподаватель: _____________ Кувачева Г.А.

«09» января 2017 г. (подпись)

Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 335; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 1 2 345 6 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!