Трансгенные растения, полученные бомбардировкой различных растительных клеток микрочастицами

⇐ ПредыдущаяСтр 5 из 5

Растение	Источник клеток
Кукуруза	Суспензия зародышевых клеток, незрелые зиготоческие зародыши
Рис	Незрелые зиготоческие зародыши, зародышевый каллус
Ячмень	Суспензия клеток, незрелые зиготоческие зародыши
Пшеница	Незрелые зиготоческие зародыши
Бобы, хлопок	Зиготоческие зародыши
Рожь	Меристема
Банан, виноград	Суспензия зародышевых клеток
Тополь	Каллус
Ель европейская и канадская	Соматические зародыши
Огурец, люцерна, земляной орех	Зародышевый каллус

Таблица 13

Методы введения ДНК в клетки растений

Метод	Комментарий
Использование Ti-плазмид	Высокоэффективная система, но 1 применимане для всех видов растений
Бомбардировка микрочастицами	Используется для широкого круга растений и тканей; простой и дешевый метод
Использование векторов на основе вирусов	Неэффективный способ доставки ДНК в растительные клетки
Прямое введение генов	Может использоваться для введения генов только в протопласты растительных клеток, из которых могут быть регенерированы жизнеспособные растения
Слияние липосом
Микроинъекции	Имеют ограниченное применение, поскольку единовременно инъекцию можно сделать только в одну клетку

Для получения трансгенных животных используется следующая стратегия:

• Клонированный ген вводят в ядро оплодотворенной яйцеклетки.

• Инокулированные оплодотворенные яйцеклетки имплантируют в реципиентную женскую особь

• Отбирают потомков, развившихся из имплантированных яйцеклеток, которые содержат клонированный ген во всех клетках.

• Скрещивают животных, которые несут клонированный ген в клетках зародышевой линии, и получают новую генетическую линию.

Таблица 14

Методы введения чужеродной ДНК животным

Метод	Комментарий
1. С помощью ретровирусных векторов, инфицирующих клетки эмбриона на ранних стадиях развития перед имплантацией эмбриона в самку-реципиента	Ретровирусы могут реплицироваться в организме трансгенного животного (ТЖ). Редко используются для ТЖ, имеющих коммерческую ценность
2. Микроинъекция в увеличенное ядро спермия (мужской пронуклеус) оплодотворенной яйцеклетки	Наиболее используемый метод
3. Введение генетически модифицированных эмбриональных стволовых клеток в предимплантированный эмбрионна ранних стадиях развития.	ES-клетки, аналогичные клеткам мышей не обнаружены у крупного рогатого скота, овец, свиней и цыплят
4. Перенос генов с помощью искусственных дрожжевых хромосом	Дрожжевые хромосомы (YAC) вмещают фрагменты геномной ДНК длиной от 100 до 1000 т.п.к.

3. Микробиологический синтез пантотеновой кислоты (витамин В₂). Среды и пути интенсификации биосинтеза.

Рибофлавин, или витамин В₂ — содержится в клетках различных микроорганизмов, будучи коферментом в составе флавопротеинов (прежде всего — соответствующих ферментов из класса оксидоредуктаз — ФМН, ФАД|. Поэтому в качестве продуцентов рибофлавина (флавопротеинов) могут быть бактерии, дрожжи и нитчатые грибы. Однако наиболее заманчивыми являются те штаммы, которые образуют на жидких средах 0,5 г и более рибофлавина в 1 л среды. К подобным организмам относятся Ashbyii gossypii, Eremothecium ashbyii и Candida guilliermondii. Учитывая изменчивость активных продуцентов названных видов по способности синтезировать витамин В₂, необходим систематический поддерживающий отбор культур в процессе их эксплуатации на производстве. Обычно активные продуценты первых двух видов формируют ярко-оранжевые колонии на агаризованных средах. Методами генной инженерии удалось получить штамм сенной палочки, образующий около 6 г рибофлавина в 1 л среды, включающей мелассу, белково-витаминный концентрат и его гидролизат.

Высокий выход рибофлавина у E.ashbyii коррелирует с азотом пуринов и другими азотистыми источниками, содержание которых должно быть достаточным. В качестве источников углерода применяют глюкозу или сахарозу, практикуют использование дрожжевого и кукурузного экстрактов, соевой муки, масла (жира). Жидкие питательные среды для получения инокулюма и для основной ферментации могут несколько различаться между собой. Например, для получения посевного материала известна среда, содержащая сахарозу, пептон, кукурузный экстракт, калия дигидрофосфат, магния сульфат, подсолнечное масло, время выращивания продуцента на этой среде — 2 суток при 27—30°С (в зависимости от штамма), ферментационная среда обычно включает кукурузную и соевую муку, сахарозу, кукурузный экстракт, калия дигидрофосфат, кальция карбонат, натрия хлорид и ненасыщенный жир.

Обычно ферментацию проводят в течение 5 суток при рН 5,5— 7,7. После использования сахарозы (примерно через 30 часов) начинает заметно накапливаться витамин В₂ вначале — в мицелии, а затем — в культуральной жидкости. Всю биомассу можно подвергнуть высушиванию и полученный сухой продукт с остаточной влажностью 8%, содержащий 1,5—2,5% рибофлавина, 20% белка, тиамин, никотиновую кислоту, пиридоксин, цианкобаламин, микроэлементы и другие вещества, рекомендуют для кормления животных.

В случае высоких выходных показателей по рибофлавину, витамин можно выделять в индивидуальном состоянии и, народу с синтетическим рибофлавином, использовать в медицине.

Для Candida guilliermondii важно регулировать содержание железа в питательной среде; оптимальные концентрации колеблются, в среднем, от 0,005 до 0,05 мкг/мл. При этом определенные штаммы дрожжей могут образовывать за 5—7 дней до 0,5 г/л и более витамина. Однако для целей промышленного производства рибофлавина предпочитают использовать более продуктивные виды и штаммы грибов — E.ashbyii и Ashbyii gossypii.

Дата добавления: 2018-04-04; просмотров: 1221; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 1 2 3 45

Мы поможем в написании ваших работ!