Моноклональные антитела в медицинской диагностике. Тестирование гормонов, аллергенов, антибиотиков. Лекарственный мониторинг
Ранняя диагностика онкологических заболеваний. Диагностические наборы на международном рынке.
Проблема биохимического анализа заключается в способности надежно определять
нужное вещество в сложных многокомпонентных системах (средах). В решении этой
проблемы применяется ИФА как наиболее специфичные, основанные на реакции
связывания антител с антигеном в прочные комплексы. Высокая специфичность
антител к широкому кругу различных веществ в сочетании с чувствительными
методами регистрации, образующихся комплексов, обуславливает интенсивное
развитие ИФА в различных областях медицины, ветеринарии, экологии.
Известно, что главным компонентом иммунохимической реакции являются
антитела (или иммуноглобулины), представляющие белки сыворотки крови,
которые синтезируются в организме человека как проявление защитной
реакции- иммунитета при попадании в него чужеродного вещества
(ксенобиотика) – антигена.
Что касается структуры антител, то основным
элементом ее является четырехцепочечная молекула из двух пар идентичных
полипептидных цепей: легких (L) и тяжелых (Н) с молекулярной массой 22000 и
50000-70000 грамм моль соответственно. Все цепи соединены дисульфидными
связями. К обеим тяжелым цепям ковалентно присоединены олигосахаридные
фрагменты (см. рис.) Схематическая структура молекул иммуноглобулина
представлена на рисунке. Различают 5 классов иммуноглобулина человека это IgG,
|
|
|
IgM, IgА, IgE, IgD, полипептидные цепи которых образуют глобулярные
домены из 110 – 115 остатков. Концевые домены и определяют биологические
свойства иммуноглобулинов. Вариабельные домены легких и тяжелых цепей
образуют активный центр антител соответствующей специфичности.
Во взаимодействии с антигеном принимает участие большое количество
аминокислотных остатков молекулы антигена.
Антитела образуются не против всей молекулы белка или бактериальной клетки, а
только к небольшим участкам на их поверхности, которые получили название
антигенных детерминант. Антигенные детерминанты представляют собой
выпуклые части молекулы, которые могут входить внутрь активного центра
антител. В случае бактериальных клеток в качестве антигенных детерминант
выступают короткие цепочки из 3-5 остатков сахаров, образующие стенку бактерий.
Низкомолекулярные соединения, например_, некоторые лекарственные средства,
сами не могут вызывать образование антител. Их называют гаптенами. Однако,
после присоединения гаптенов к поверхности макромолекулы, организм начинает
вырабатывать на них антитела.
Получение антител. Отвечая на этот вопрос, надо знать что такое иммунный ответ.
|
|
|
Иммунный ответ это сложный процесс межклеточного взаимодействия различных
типов лимфоидных клеток с участием специальных гормонов, в результате чего так
называемые В-клетки активно синтезируют специфические антитела против данного
антигена.
Для получения антител берут животных – это могут быть мыши, морские свинки,
кролики, куры, овцы, козы, куры, лошади и делают им инъекции антигена. В
присутствии стимуляторов иммунного ответа, в сыворотке крови накапливаются
специфические антитела. Обычно антитела выделяют из сыворотки в виде
гаммаглобулиновой фракции, осаждая сыворотку крови сульфатом аммония, спиртом
или полиэтиленгликолем. Эти антитела имеют иного примесей белков.
Высокоочищенные антитела выделяют с помощью ионообменной хроматографии,
аффинной хроматографии на иммуносорбентах.
Антитела, однородные по структуре и специфичности, производимые в
неограниченных количествах называются моноклональными антителами.
Способ получения моноклональных антител. Такой способ был предложен в 1975
году учеными Г.Келером и К. Мильштейном. Они вводили антиген в организм мыши
и получали активно продуцирующие антитела β- клетки. Эти клетки могут жить
|
|
|
только в организме хозяина, но если соединить иммунную клетку с клеткой
опухолевой (эти клетки называют миеломные лимфоциты), то образуются
гибридные клетки со свойствами своих предшественников, так как они способны
долго жить в искусственных условиях и одновременно синтезировать антитела.
Такие клетки называются гибридомами. Существуют методы отбора отдельных
клеток, синтезирующих только один тип антител. Такие клетки помещают в
культуральную жидкость, где они растут, образуя много родственных «клонов»,
синтезирующих большое количество антител под названием моноклональных.
Отсюда возникает название монаклональные антитела.
Дата добавления: 2018-04-04; просмотров: 1008; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!