Запишите алгоритм культивирования микроорганизмов
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ
Тема: «Культивирование бактерий»
Студент должен знать:
-методику культивирования
-физиологию бактерий (дыхание, питание, рост, размножение, ферментообразование)
Студент должен уметь:
-приготавливать, разливать питательные среды по чашкам Петри
-осуществлять посев на питательные среды
-описывать культуральные свойства
Алгоритм работы:
Изучите вопросы самостоятельной работы.
Отработайте манипуляции.
Продемонстрируйте манипуляции преподавателю.
Оценивание: за работу на занятии выставляется общая оценка – за устный ответ фронтального обсуждения, манипуляцию, тестовую работу (если она предусматривается).
Вопросы для фронтального обсуждения:
1.Дайте понятие культивированию.
2.Назовите цель культивирования микроорганизмов.
3.Назовите этапы культурального (бактериологического) метода исследования.
Отработайте манипуляции:
1.Продемонстрируйте умение по приготовлению питательной среды.
2.Продемонстрируйте умение по посеву микробиологического материала на плотную питательную среду.
3.Опишите культуральные свойства кишечной палочки на среде Эндо, и золотистого стафилококка на желточно-солевом агаре.
! Внимание. При отработке практических манипуляций следуйте алгоритму.
Самостоятельная аудиторная работа студентов:
1.Составьте схему бактериологического метода исследования по следующему образцу:
|
|
|
| Бактериологический метод |
| Этапы |
| 3. |
| 4. |
| 2. |
| 1. |
Составьте алгоритм приготовления питательной среды.
Краткие теоретические положения
Краткая характеристика питательной среды
Для культивирования микробов в лабораторных условиях готовят питательные среды с учетом потребности в питательных веществах каждого вида в отдельности. Питательная среда в своем составе должна содержать углерод, водород, кислород, азот, фосфор, серу, магний, железо, микроэлементы и биостимуляторы роста.
Различают питательные среды естественные(молоко, яйца, картофель и т. п.),искусственные,приготовленные из продуктов животного или растительного происхождения, исинтетические(среды Чапека, Сабуро). По консистенции среды могут быть жидкими, полужидкими и плотными.
Для приготовления плотных сред в жидкие среды добавляют агар-агар или желатин. Агар-агар представляет собой продукт переработки высушенных морских водорослей рода анфельция, состоящий в основном из полисахаридов. В холодной воде агар-агар набухает и размягчается, в горячей (90—100° С) расплавляется, образуя клееобразную массу. Застывает агар-агар при 40° С, образуя студень. Как питательное вещество агар-агар микробами не используется.
|
|
|
Желатин получают путем вываривания кожи, костей и сухожилий животных. При нагревании с водой желатин образует коллоидный раствор, застывающий при 18—20° С в однородный коллоидный студень и расплавляющийся при 25—27° С.
В бактериологической практике обычно применяют среды из продуктов животного и растительного происхождения, содержащие пептоны, экстрактивные вещества мяса, кровь, сыворотку, сусло, углеводы и т. п.
Необходимые питательные вещества должны содержаться в среде в доступной форме и в определенных соотношениях.
Питательные среды должны быть стерильными (должно быть обеспечено получение чистых культур микроорганизмов), прозрачными (выросшие на них микроорганизмы должны быть хорошо видны и иметь определенную величину рН).
Хранят готовые среды в прохладном месте, в плотно закрывающихся шкафах или ящиках, что предохраняет их от быстрого высыхания. Надолго хранившихся средах микробы развиваются слабо или совсем не растут.
Питательные среды принято делить на три группы:
1) стандартные (универсальные) — предназначаются для культивирования большинства микробов;
|
|
|
2) специальные элективные, избирательные — предназначаются для выращивания только определенного вида микробов, рост других микроорганизмов на этих средах подавляется;
3) дифференциально-диагностические — предназначаются для изучения биохимических свойств микробов с целью дифференцирования различных видов микроорганизмов.
Техника приготовления
Этапы приготовления сред: 1) варка; 2) установление оптимальной величины рН; 3) осветление; 4) фильтрация; 5) разлив; 6) стерилизация; 7) контроль.
Варят среды на открытом огне, водяной бане, в автоклаве или варочных котлах.
3.Зарисуйте в тетрадь технику посева на плотные питательные среды.
При посеве на поверхность плотной питательной среды в чашки Петри чашку держат в левой руке. Дно ее с одной стороны придерживают 1 и II пальцами, а с другой —IV и V пальцами. Крышку, приоткрытую настолько, чтобы в образовавшуюся щель свободно проходили петля или шпатель, фиксируют 1 и III или 1 и II пальцами (рис.). Небольшое количество исследуемого материала втирают бактериальной петлей в поверхность питательной среды у края чашки. Затем петлю прожигают, чтобы уничтожить избыток находящегося на ней материала. Линию посева начинают с того места, в котором находится материал. Бактериальную петлю кладут плашмя на питательную среду, чтобы не поцарапать ее поверхности, и проводят штрихи по всей среде или по секторам, разграфив предварительно дно чашки (при условии, что среда прозрачна) на несколько равных частей. Нужно стараться, чтобы штрихи, наносимые петлей, располагались как можно ближе друг к другу, так как это удлиняет общую линию посева и дает возможность Для равномерного распределения засеваемого материала по поверхности плотной питательной среды можно пользоваться вместо петли тампоном или шпателем.
|
|
|
При обилии в засеваемом материале микробов они растут в виде пленки, покрывающей всю поверхность питательной среды. Такой характер микробного роста получил название сплошного, или газонного.
Посев газоном производят, когда нужно получить большие количества микробной культуры одного вида.
Из материала, подлежащего посеву в толщу плотной питательной среды, готовят взвесь в стерильной водопроводной воде или в изотоническом растворе. Набирают 0,1—1 мл взвеси в пипетку (в зависимости от степени предполагаемого микробного загрязнения) и выливают в пустую стерильную чашку Петри. Вслед за этим чашку заливают 15 - 20 мл мясопептонного агара, расплавленного и остуженного до температуры 40 - 45 °С (при такой температуре пробирка со средой, приложенная к щеке, не должна вызывать ощущения ожога). Для равномерного распределения исследуемого материала в питательной среде закрытую чашку с содержимым слегка вращают по поверхности стола.
Посев уколом в столбикпитательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробирку берут в левую руку, как обычно, и в центре столбика до дна пробирки вкалывают петлю с находящимся на ней материалом.
Запишите алгоритм культивирования микроорганизмов.
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 911; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!