Поверхностный способ культивирования микроорганизмов в промышленных условиях
Поверхностное культивирование заключается в выращивании аэробных микроорганизмов на поверхности жидких и сыпучих питательных сред. При этом микроорганизмы получают кислород непосредственно из воздуха. При поверхностном культивировании на жидких средах микроорганизмы растут в виде пленок. Осуществляется поверхностное культивирование в специальных ваннах – кюветах. Поверхностное культивирование может быть только периодическим, в то время как глубинное культивирование может осуществляться и периодическим, и непрерывным способом.
Культивирование вирусов в организме животных.
Выбор экспериментальных животных определяется целью работы и видовой чувствительностью к изучаемому вирусу. Для заражения используют обезьян, кроликов, морских свинок, хомячков, белых крыс и мышей. Лабораторных животных заражают различными способами в зависимости от тропизма вируса к определенным тканям. Так, например, для культивирования нейротропных вирусов заражение производят преимущественно в мозг (вирусы бешенства, клещевого энцефалита и др.), культивирование респираторных вирусов осуществляется при интраназальном инфицировании животных (вирусы гриппа), дерматотропных (вирус оспы) - путем накожного и внутрикожного заражения. Наиболее часто используются накожное, внутрикожное, внутримышечное, внутрибрюшинное и внутримозговое заражение. При первичном заражении животные могут не заболеть, поэтому через 5-7 дней внешне здоровых животных выводят из эксперимента, а из их органов готовят суспензии, которыми заражают следующие партии животных. Эти последовательные заражения называются «пассажами». Индикацию, т.е. обнаружение факта репликации вируса, устанавливают на основании развития типичных признаков заболевания, патоморфологических изменений органов и тканей животных или положительной реакции гемагглютинации (РГА). РГА основана на способности некоторых вирусов вызывать агглютинацию (склеивание) эритроцитов различных видов животных, птиц и человека за счет поверхностного вирусного белка - гемагглютинина. В настоящее время использование животных для культивирования вирусов ограничено, в соответствии с Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных научных целях.
|
|
|
Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах.
Большинство известных вирусов обладают способностью реплицироваться в курином эмбрионе. Используют эмбрионы в возрасте от 8 до 14 дней в зависимости от вида вируса, способа заражения и задач исследования. Вирусы гриппа культивируются в 9-10, осповакцины - в 12, паротита - в 7-дневных куриных эмбрионах. Репродукция вируса в куриных эмбрионах происходит в разных частях зародыша, что связано с особенностями тропизма вируса. Методику выращивания вируса в курином эмбрионе широко используют при промышленном культивировании.
|
|
|
Культивирование вирусов в культуре клеток.
Культура клеток– это клетки многоклеточных организмов (человека, животных), живущие и размножающиеся invitro. Подразделяются на: первичные (неперевиваемые); полуперевиваемые; перевиваемые. Первичные (неперевиваемые) культуры клеток – клетки, полученные непосредственно из органов и тканей организма (почек, легких, кожи, тимуса, тестикул эмбриона человека или молодых животных). Этапы приготовления первичных культур клеток: выделение органа/ткани; измельчение и гомогенизация ткани до частиц размером 2-4 мм разъединение клеток путем трипсинизации; внесение в пробирку с питательной средой; инкубирование в термостате – клетки начинают делиться до покрытия поверхности стекла в один слой и прекращают размножаться. Первичные культуры клеток живут ≈ 7-21 день, при пересевах меняют форму и гибнут. Перевиваемые культуры клеток – это клетки, способные к размножению вне организма неопределенно длительное время. Полуперевиваемые культуры клеток – диплоидные клетки человека, выдерживающие до 50-100 пассажей (после перевивания в новую пробирку со свежей питательной средой вновь начинают размножаться до образования монослоя). Перевиваемые культуры клеток – это клетки, способные к размножению вне организма неопределенно длительное время. Достоинства – получение максимальной концентрации вируса. Недостатки – не все вирусы культивируются в культуре клеток.
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 650; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!