ТЕМА 5. бактериологический метод: изучение биохимических свойств бактерий (окончание). действие внешних факторов на микроорганизмы
Микроорганизмы, находящиеся во внешней среде, подвергаются воздействию разнообразных физических, химических и биологических факторов. Каждый вид имеет свои наследственные, закрепленные зоны влияния отдельных факторов. Среди физических показателей особое значение в жизни микробов имеет температура. В зависимости от температурных параметров выделяют три группы микроорганизмов – термофилы, психрофилы и мезофилы. Для термофилов зона оптимального роста равна 50–60 0С, верхняя зона задержки роста 75 0С, нижняя 45 0С. Психрофилы имеют зону оптимального роста в пределах 10–15 0С, максимальную зону задержки роста
25–30 0С, минимальную 0–5 0С. Некоторые виды холодолюбивых бактерий, размножаясь в пищевых продуктах при температуре бытового холодильника, вызывают заболевания у человека. Патогенные бактерии и большинство микробов – сапрофитов являются мезофиллами. Оптимальная температура их роста колеблется в пределах 30–37 0С, максимальная 43–45 0С, минимальная 15–20 0С.
Губительное действие на микроорганизмы оказывают высушивание, ионизирующая радиация, УФ-лучи, ультразвук, а также химические вещества, обладающие противомикробным действием (галогены, окислители, кислоты, щелочи, соли тяжелых металлов и т.д.).
Микробные ассоциации зависят не только от факторов внешней среды, но и от сложных взаимоотношений микроорганизмов, которые могут носить характер симбиоза или антагонизма. Антагонистические свойства микробов могут быть обусловлены разными механизмами. Один из них – образование антибиотических веществ. Среди микроорганизмов продуцентами антибиотиков являются актиномицеты, грибы и бактерии.
ЗАДАНИЕ
1. Просмотреть посевы на средах «пёстрого ряда» и в мясо-пептонном бульоне. Зарегистрировать результаты. Образование индола, сероводорода, аммиака обозначается «+», отсутствие – « – ». Ферментация углевода с образованием кислоты (изменение окраски среды) отмечается «К», с образованием кислоты и газа (наличие пузырьков в столбике среды) – «КГ», отсутствие ферментации углеводов – « – ».
2. Заполнить протокол исследования чистой культуры бактерий (табл. 2).
3. Испытать действие света на бактерии (опыт Бухнера). На поверхность агара в чашке Петри налить 1 мл бульонной культуры, равномерно распределить по поверхности, остаток удалить пипеткой. Кружочки стерильной бумаги поместить на поверхность агара и осветить открытую чашку прямыми солнечными лучами в течение 1–2 часов, после чего чашку закрыть крышкой и поставить в термостат.
Таблица 2
Протокол исследования чистой культуры бактерий
| Свойство | Результат |
| Морфология бактерий | |
| Окраска по Граму | |
| Подвижность | |
| Характеристика колоний: | |
| размеры | |
| форма | |
| поверхность | |
| край колонии | |
| прозрачность | |
| консистенция | |
| характер пигмента | |
| Образование индола | |
| сероводорода | |
| аммиака | |
| Ферментация глюкозы | |
| лактозы | |
| маннита | |
| сахарозы | |
| Наличие каталазы | |
| Реакция с метилрот | |
| Фогес – Проскауэра |
Контрольные вопросы
1. Какое действие оказывают физические факторы на микроорганизмы?
2. Как подразделяются микробы по отношению к температуре?
3. Какое действие оказывают химические факторы на микроорганизмы?
4. В чём состоит сущность опыта Бухнера?
ТЕМА 6. бактериологический метод: антибиотики
Антибиотики – химиотерапевтические вещества биологического, полусинтетического или синтетического происхождения, которые в малых концентрациях вызывают торможение размножения или гибель чувствительных к ним микробов и опухолевых клеток во внутренней среде животного организма.
По направленности действия все антибиотики делят на следующие группы: противобактериальные, противовирусные, противогрибковые, противопротозойные, противоопухолевые. Они могут обладать узким (например, бензилпенициллин), умеренным (например, ампициллин) или широким (например, аминогликозиды, тетрациклины) спектром действия.
По химическому составу антибиотики подразделяют на несколько групп:
1. Бета-лактамные антибиотики, включающие природные пенициллины, несколько поколений полусинтетических пенициллинов, несколько поколений цефалоспоринов, нетрадиционные бета-лактамы.
2. Стрептомицины и стрептомициноподобные антибиотики.
3. Макролиды – эритромицин, олеандомицин, карбомицин.
4. Аминогликозиды – гентамицин, неомицин, канамицин.
5. Тетрациклин и его полусинтетические производные.
6. Гликопептиды – ристомицин, линкомицин, ванкомицин.
7. Левомицетин–синтетическое вещество, идентичное природному антибиотику, хлорамфениколу.
8. Производные параамино-салициловой кислоты (препараты ПАСК – противотуберкулёзные антибиотики), производные изоникотиновой кислоты, а также рифампицины и др.
9. Фосфомицины – антибиотики из группы фосфоновой кислоты.
10. Фторхинолоны – неприродные соединения (ципрофлоксацин, ципробан и др.).
11. Полиеновые антибиотики – нистатин, леворин, амфотерицин В.
По механизму антимикробного действия антибиотики отличаются друг от друга. Мишенью для их ингибирующего действия служит одна или несколько биохимических реакций, необходимых для синтеза и функционирования определенных структур микробной клетки (табл. 3).
Таблица 3
Механизмы ингибирующего действия некоторых групп
антибиотиков на микробную клетку
| Антибиотики | Мишени действия антибиотиков |
| Пенициллины, цефалоспорины, циклосерин, фосфомицин, ристомицин | Ингибирование синтеза клеточной стенки |
| Полиеновые антибиотики, полимиксины | Нарушение функций цитоплазматической мембраны |
| Аминогликозиды, тетрациклины, левомицетин, макролиды | Ингибирование синтеза белков на рибосомах |
| Рифампицины, актиномицеты, оливомицин, антрациклины | Ингибирование ДНК-зависимой РНК-полимеразы |
| Эритромицин | Блокирует реакцию транслокации |
| Фторхинолоны | Ингибирование ДНК-гиразы или специфических участков ДНК, созданных ДНК-гиразой |
ЗАДАНИЕ
1. Учесть результаты опыта Бухнера: отметить более обильный рост бактерий в местах, которые были закрыты бумагой.
2. Произвести определение чувствительности бактерий к антибиотикам двумя методами.
Метод дисков
На поверхность агара в чашке Петри вылить 1 мл взвеси бактерий и распределить её по поверхности. Остаток культуры убрать пипеткой. После высыхания поверхности чашки на её сектора нанести пинцетом диски с антибиотиками. Выдержать чашки в течение 30 минут, после чего поместить в термостат.
Метод разведений
Взять два ряда пробирок: 1 ряд –7 пробирок по 1 мл физиологического раствора; 2 ряд –8 пробирок по 2 мл бульона. В первую пробирку первого ряда внести 1 мл пенициллина, содержащий 160 единиц. Содержимое пробирки перемешать и 1 мл перенести во вторую пробирку. Из второй пробирки 1 мл перенести в третью и т.д. Таким образом, в пробирках будет 80, 40, 20, 10, 5 единиц и т. д. пенициллина в 1 мл физ. р-ра.
В каждую пробирку второго ряда (кроме восьмой) внести по 0,2 мл разведения пенициллина из соответствующей пробирки первого ряда. Получаем разведения пенициллина – 8, 4, 2, 1 и т.д. в 1 мл бульона. В каждую пробирку засеять одну петлю суточной бульонной культуры испытуемого микроба.
Результат учитывается через сутки пребывания пробирок в термостате. Отметить наименьшую концентрацию антибиотика (наибольшее его разведение), при которой отсутствует рост микроба (бактерицидная концентрация), а также ту концентрацию при которой лишь наблюдается задержка роста культуры (бактериостатическая концентрация) по сравнению с контрольной восьмой пробиркой.
Контрольные вопросы
1. По каким признакам классифицируют антибиотики?
2. Каков механизм действия антибиотиков?
3. Какими методами определяется чувствительность бактерий к антибиотикам?
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 368; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!