пигментов в листьях растений
С одержание хлорофиллов А, В и каротиноидов можно определить в исходной вытяжке пигментов, без предварительного их разделения, по оптической плотности. Для извлечения пигментов из растительных тканей и их разделение обычно используют неполярные растворители (спирт или ацетон).
Цель работы: Определить содержание хлорофиллов А и В, и каротиноидов в исследуемом материале. Рассчитать соотношение хлорофилла А к хлорофиллу В.
Материалы и оборудование: листьярастений разных световых экотипов; спектрофотометр, ступки с пестиком, воронки, штатив с пробирками, весы, ножницы, фильтровальная бумага, 100% ацетон.
Ход работы: Навеску растительного материала (100 – 200 мг) измельчают ножницами, помещают в фарфоровую ступку и растирают с добавлением 2 мл 100% ацетона. Затем добавляют еще 4 -5 мл растворителя. Полученную вытяжку фильтруют в пробирку через воронку с фильтровальной бумагой. Ступку ополаскивают новыми порциями растворителя, которой количественно без потерь сливают каждый раз в воронку. Общий объем использованной для одной пробы растворителя должен быть 10 мл. Фильтрат содержит смесь зеленых и желтых пигментов. Концентрацию хлорофиллов а, в и суммы каротиноидов определяют в одной вытяжке. Концентрацию пигментов рассчитывают по уравнениям, составленным на основании экспериментально полученных удельных коэффициентов поглощения.
Для 100% ацетона – определение концентрации:
|
|
|
СхлА = 9,784*Е662 – 0,99Е664
СхлВ = 21,426*Е644 – 4,659Е622
Се хл А+хлВ = 5,134*Е662 – 20,430*Е644
Скар = 4,695*Е440.5 – 0.268 * (Се хл А+хлВ)
где СхлА, СхлВ, Скар – концентрации хлорофиллов а, в и каротиноидов - мг/л;
Е – экстинкция, экспериментально полученные величины оптической плотности, при соответствующих длинах волн (для 100% ацетона – 662, 644, 440,5 нм).
Рассчитав концентрацию в вытяжке, определяют концентрацию пигмента в исходном материале с учетом объема вытяжки и навески:
А = V*C / 1000*P
Где А - содержание пигмента (мг/г) в сухом или сыром весе;
С – концентрация пигмента в мг/л;
V – объем в мл,
P - навеска материала сухого или сырого вида в мг.
Задание: Рассчитать содержание хлорофиллов, каротиноидов, соотношение хлорофилла А к хлорофиллу В и суммы хлорофиллов к каротиноидам. Заполнить таблицу. Сравнить полученные показатели у разных видов растений. По полученным данным сделать выводы о принадлежности растений к светолюбивым или тенелюбивым видам.
Работа 4. Оптические свойства пигментов.
Флюоресценция хлорофилла – это испускание возбужденной молекулой хлорофилла света с длинной волны большей, чем длина волны света, возбудившего флюоресценцию. Флюоресценция обнаруживается по красному цвету раствора хлорофилла, рассматриваемого в отраженном свете на темном фоне. Независимо от длины волны возбуждающего света, хлорофилл флюоресцирует только красный цветом.
|
|
|
Цель работы: Наблюдать флюоресценцию хлорофилла.
Объект исследования: зеленые листья любых растений.
Материалы и оборудование: электрическая лампа, пробирка, ступка, пестик, этанол.
Ход работы: Получаем спиртовую вытяжку листьев. Фильтруем ее. Рассматриваем раствор пигментов в пробирке или колбе в отраженном свете настольной лампы. Отмечаем красную флюоресценцию спиртовой вытяжки листа, которая содержит все пигменты. Рассматриваем спиртовую вытяжку листа в проходящем свете. Отмечаем ее зеленую окраску, обусловленную присутствием хлорофиллов. В проходящем свете красная флюоресценция не видна, так как интенсивный проходящий свет маскирует ее.
Задание: сделать вывод о наличии флюоресценции у хлорофилла и зарисовать опыт.
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 25; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!