Бумажной хроматографии
Хроматографический метод разделения пигментов, впервые предложенный русским ученым М.С. Цветом, имеет в настоящее время большое число вариантов. Широко используется для разделения пигментов и метод бумажной хроматографии. Он заключается в том, что раствор содержащий смесь пигментов пропускается через слой адсорбента. Разные пигменты, обладая неодинаковой растворимостью в данном растворителе, передвигаются с различной скоростью и располагаются на адсорбенте в разных местах. Чем больше растворимость пигмента в растворителе и чем хуже он адсорбируется данным адсорбентом, тем быстрее он будет передвигаться, и тем дальше будет располагаться зона этого пигмента.
Цель работы: провести разделение пигментов методом бумажной хроматографии.
Материалы и оборудование: 1) свежие листья, 2) ацетон, 3) СаСО3, 4) петролейный эфир или бензин, 5) кварцевый песок, 6) полоска хроматографической бумаги (1,5х2х20 см), 7) фарфоровая ступка, 8) колба Бунзена со стеклянным фильтром, 9) бюксы или баночки с притертыми пробками (2 щт.), 10) цилиндр, закрытый пробкой с крючком, 11) насос Камовского.
Ход работы: Свежие листья растереть в ступке, добавляя кварцевый песок и СаСО3. Экстрагировать пигменты 100%-м ацетоном и профильтровать вытяжку в колбу Бунзена через стеклянный фильтр. Вытяжку (раствор пигментов) слить в емкость с притертой пробкой (на 2 – 3 г материала около 25 мл ацетона). Эта операция проделывается одной бригадой, которая готовит вытяжку на всю подгруппу.
|
|
|
Полоску хроматографической бумаги опускают на несколько секунд в приготовленную вытяжку, при этом раствор пигментов поднимается на 1,5–2 см. Бумагу высушивают в токе воздуха (вентилятор) и снова опускают в вытяжку, повторяя операцию 5 – 7 раз, пока у верхней границы пигмента не образуется желто-зеленая полоса. Теперь нижний конец полоски погружают на несколько секунд в чистый ацетон, чтобы все пигменты поднялись на бумаге на 1 – 1,5 см. В результате на бумаге образуется стартовая полоса, в которой находится смесь пигментов. Полоску высушивают в токе воздуха до исчезновения запаха ацетона и помещают, прикрепив к пробке, вертикально в цилиндр на дне которого находится слой петролейного эфира и бензина. Полоска должна так контактировать с жидкостью, чтобы растворитель не касался зоны пигментов.
Спустя 10 – 15 мин растворитель поднимается по бумаге на 10 – 12 см, при этом произойдет распределение пигментов.
Задание. Отметить на полосе границы зон, зарисовать хроматограмму, обозначив на ней пигменты. Внизу будет расположен хлорофилл В, над ним – хлорофилл А, затем ксантофилл, а выше всех – каротин. Сделать вывод о причинах разделения пигментов на бумаге и указать степень адсорбции разных пигментов. Рассчитать Rf для каждого пигмента.
|
|
|
Работа 3. Спектрофотометрический метод определения содержания
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 27; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!