Самостоятельная работа
Произвести учет литического действия бактериофага на культуру бактерий качественной пробой Отто и пробой Фишера - метод “дорожки”. Определить фаготип культуры в иллюстрационном посеве.
2.В демонстрационных наборах определить титр бактериофага по методам Аппельмана и Грациа.
Разобрать сущность РНТФ в демонстрационном наборе чашек.
Изучить демонстрационный набор фагов
Ознакомиться с изменчивостью микроорганизмов (форма колоний, потеря пигмента, подвижности и др.) в демонстрационных посевах
Изучить схему проведения ПЦР, реагенты, аппаратура
Произвести учет результатов опытов по трансдукции, конъюгации, трансформации в готовых посевах.
- Опыт конъюгации подготовлен следующим образом:
а) донор – чувствителен к стрептомицину, но способен расти на минимальной питательной среде;
б) реципиент – устойчив к стрептомицину, но не способен расти на минимальной питательной среде (ауксотроф).
- В стерильной пробирке смешивают по 1 мл культуры донора и реципиента, помещают на 30 минут в термостат, после чего высевают смесь, а также культуры донора и реципиента на секторы минимальной среды со стрептомицином в чашки Петри. Минимальная среда содержит углеводы и не содержит аминокислот, но в ней есть стрептомицин в концентрации, задерживающей рост культуры донора. Чашки помещают в термостат. Результат подлежит учету через сутки.
- Опыт трансформации. Для постановки опыта берут в качестве реципиента культуру стафилококка, чувствительную к стрептомицину. К 1 мл бульонной культуры реципиента приливается 1 мл раствора ДНК стрептомицинорезистентного стафилококка; после чего пробирка помещают в термостат на 30 минут. Затем делается высев петлей, как из опытной пробирки, так и культуры реципиента на агар со стрептомицином. Чашки помещают в термостат. Учет результатов — через сутки.
- Опыт трансдукции. Для постановки опыта необходим фаг, размноженный на культуре кишечной палочки, разлагающей лактозу. Реципиентом является культура кишечной палочки не разлагающей лактозу. К 1 мл бульонной культуры реципиента добавляют 0,5 мл фага, смесь помещают на 3 минут в термостат. Затем делают высев на среду Эндо из смеси, а также бульонной культуры реципиента. Чашки помещают в термостат. Учет результатов - через сутки.
ПРАКТИЧЕСКИЕ НАВЫКИ:
|
|
|
1. Научиться определять фаготип бактерий для эпидемиологических, лечебных и профилактических целей.
2. Научиться определять титр бактериофагов методами Аппельмана и Грациа.
3. Научиться регистрировать признаки фенотипической и генотипической изменчивости у микроорганизмов.
УИРС:
- Решение ситуационных задач.
- Освоение методов титрования бактериофагов.
- З. Освоение диагностических проб с бактериофагом: проба Отто, РНТФ
- Подготовка реферативных докладов.
- Изучение фенотипической изменчивости микробов.
- Постановка опытов трансформации, конъюгации и трансдукции микроорганизмов.
- Оформление протоколов.
ПРОТОКОЛ ЗАНЯТИЯ:
|
|
|
1. Титр фага по Грациа:
2. Титр фага по Аппельману:
3. Учет реакции нарастания фага по Гольдфарбу и Тимакову:
4. Фаготип культуры:
5. Результат опыта по конъюгации:
6. Результат опыта по трансдукции:
7. Результат опыта по трансформации:
Преподаватель: Дата:
ЗАКРЕПИТЕ ЗНАНИЯ:
В чем сущность специфичности бактериофагов?
Где обитают фаги?
Перечислите основные сферы применения бактериофагов в медицине.
Каков вклад генетики микроорганизмов в развитие медицины и экономики.
Чем отличаются геномы прокариотов и эукариотов?
Какое значение в патологии человека имеют механизмы изменчивости бактерий и вирусов?
В чем различия между мутациями и рекомбинациями?
Какие генотипические методы применяют для идентификации бактерий?
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 33; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!