ОПЛОДОТВОРЕНИЕ ЯЙЦЕКЛЕТОК ВНЕ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНОГО

⇐ ПредыдущаяСтр 18 из 33Следующая ⇒

Разработка системы оплодотворения и обеспечения ранних стадий развития эмбрионов млекопитающих вне организма животного (invitro) имеет огромное значение в решении ряда научных задач и практических вопросов, направленных на повышение эффективности разведения животных.

Система оплодотворения invitro может быть использована прежде всего как ценный аналитический инструмент для изучения биохимических и физиологических факторов, включающихся в процесс оплодотворения, соединения мужской и женской гамет. Только с освоением техники оплодотворения вне организма появилась реальная возможность для широкого развертывания исследований по генной и клеточной инженерии и особенно сельскохозяйственных животных. Для этих целей необходимы эмбрионы на ранних стадиях развития, которые можно извлечь только хирургическими методами из яйцеводов, что является трудоемким и не дает достаточного числа зародышей для проведения этой работы. К тому же существующие методы гормональной регуляции воспроизводительной функции у сельскохозяйственных животных не позволяют достичь высокой точности контроля времени овуляции и вследствие этого получить достаточное число эмбрионов на желаемой стадии развития. Методы клеточной и генной инженерии на животных предусматривают также проведение длительных манипуляций с гаметами и эмбрионами вне организма. Все эти проблемы могут быть решены в значительной степени с использованием системы оплодотворения яйцеклеток млекопитающих вне организма.

Разработка системы оплодотворения invitro открывает возможность получения значительно большего числа эмбрионов от животных с высоким генетическим потенциалом для трансплантации эмбрионов путем извлечения ооцитов из яичников после

8-177225

убоя животных, а в последнее время и путем многократного прижизненного получения ооцитов с дальнейшим их дозреванием и оплодотворением в лабораторных условиях. На основе системы оплодотворения вне организма с использованием метода клонирования эмбрионов можно получать сколько угодно однояйцевых близнецов, максимально повышать эффективность использования семени от высокоценных быков, так как для оплодотворения вне организма животного требуется ничтожно мало спермы по сравнению с осеменением традиционным методом. Оплодотворение яйцеклеток млекопитающих invitro включает следующие основные этапы: созревание ооцитов, капаци-, тация сперматозоидов, оплодотворение и обеспечение ранних стадий развития.

Созревание ооцитов invitro . Большое число половых клеток в яичниках млекопитающих, в частности у крупного рогатого скота, овец и свиней с высоким генетическим потенциалом, представляет источник огромного потенциала воспроизводительной способности этих животных в ускорении генетического прогресса по сравнению с использованием возможностей нормальной овуляции. У этих видов животных, как и у других млекопитающих, число ооцитов, овулирующих спонтанно во время охоты, составляет только незначительную часть от тысяч ооцитов, находящихся в яичнике при рождении животного. Остальные ооциты регенерируют внутри яичника, или, как говорят обычно, подвергаются атрезий. Естественно возникал вопрос, нельзя ли выделить ооциты из яичников путем соответствующей обработки и провести их дальнейшее оплодотворение вне организма животного. В настоящее время не разработаны методы использования всего запаса ооцитов в яичниках животных, но значительное число ооцитов может быть получено, из полостных фолликулов для дальнейшего их созревания и оплодотворения вне организма. Эти ооциты должны иметь размер, соответствующий овулировавшей яйцеклетке, и в основном законченный процесс созревания цитоплазмы.

Явление спонтанного возобновления мейоза ооцитов, выделенных из фолликулов кролика и помещенных в культуральную среду, было впервые открыто Г. Пинкусом и Н. Энзманом (1935).

Известно, что после выделения ооцита из фолликула, как и после выброса эндогенного ЛГ в организме животного перед овуляцией, ооцйт освобождается из состояния мейотического торможения, что сопровождается так называемым разрывом зародышевого пузырька. В организме крупного рогатого скота

226

разрыв зародышевого пузырька происходит примерно через 5 ч после выброса ЛГ, ооцит достигает метафазы I через 12 ч и метафазы II — через 24—25 ч. Вне организма ядерная мембрана зародышевого пузырька крупного рогатого скота также исчезает через 5—6 ч, через 12 ч хромосомы достигают метафазы I и через 20-24 ч — метафазы II.

Видовые различия в проявлении мейотического созревания ооцитов у коров, овец и свиней показаны в табл. 4.3.

Таблица 4.3. Временные параметры реакции (мейоза) ядра ооцитов разных видов животных на предовуляторный выброс гонадотропинов

( Хантер, 1980)

Вид живот ного	Латентный период после стиму ляции, ч	Стадии мейотического созревания, ч
Вид живот ного	Латентный период после стиму ляции, ч	метафаза 1	анафаза	телофаза	метафаза 11
Корова Овца Свинья	10—12 10—11 17—18	14—21 12—20 26—34	22 21 35	23 22 36	24 24 37

Хотя большинство ооцитов, извлеченных из фолликулов яичников, возобновляют мейоз и достигают метафазы II, оплодотворение их часто не обеспечивает полноценного развития зародышей. Предполагают, что основной причиной этого является неполноценное созревание ооцитов. Одной из причин может быть то, что при созревании ооцита invitro в цитоплазме не вырабатывается в достаточной мере фактор, контролирующиий формирование и развитие мужского пронуклеуса. Считают, что для появления в цитоплазме ооцита фактора, вызывающего созревание мужского пронуклеуса, необходимо обеспечить индуктивное влияние нормального окружения ооцита в фолликуле в течение не менее 6 ч после начала мейотического созревания.

Это было подтверждено в опытах по оплодотворению invitro ооцитов свиней, извлеченных из фолликулов на разных стадиях мейоза. С прогрессированием стадии развития в момент извлечения ооцита из фолликула повышался процент нормально оплодотворенных зародышей: нормальное оплодотворение имело место у 31,7; 51,6 и 78,2% культивируемых ооцитов со стадии зародышевого пузырька, диакинеза и метафазы I соответственно.

Установлено, что стероидные гормоны не требуются для запуска мейоза у млекопитающих, но необходимы для полного физиологического созревания ооцита.

227

В связи с тем, что стероидные гормоны и другие факторы, вырабатываемые фолликулярными клетками, оказывают влияние на созревание ооцитов, было сделано предположение, что культивирование ооцитов с фолликулярными клетками может повысить их способность к нормальному оплодотворению и последующему эмбриональному развитию. Многие явления внутри фолликула, включая биосинтез стероидов и синтез белков, регулируют гонадотропные гормоны. Поэтому при культивировании ооцитов внутри фолликулов или с фолликулярными клетками гонадотропины должны быть обязательной составной частью среды.

Эффективное использование всего названного комплекса в составе культуральной среды, включая фолликулярные клетки, гонадотропины и острогены, было продемонстрировано при созревании ооцитов овец invitro- (Р.Б. Стайгмиллер, P.M. Мур, 1984).

Чтобы выяснить роль фолликулярных клеток в созревании ооцитов авторы культивировали ооциты с фолликулярными клетками (без кумулюса, с кумулюсом или с кумулюсом и фолликулярными клетками, табл. 4.4). Культивирование проводили в среде М199 с 10%-ной инактивированной фетальной сывороткой, гонадотропинами (10 мкг ЛГ/мл, 10 мкг ФСГ/мл и 10 мкг пролактина/мл) и эстрадиолом-17р (1 мкг/мл). Ооциты культивировали 24 ч при 37° С в среде при медленном покачивании в воздухе с 5% С0₂. После культивирования ооциты пересаживали в яйцевод осемененной овцы в охоте. Свежую сперму (0,01—0,02 мл) вводили перед пересадкой ооцитов в оба рога матки. Эмбрионы извлекали из матки через 10—12 дней и классифицировали по категориям: одноклеточные, задержка дробления (2—16 клеток), задержка морулы (от 16 клеток до неполной бластоцисты) и вылупившаяся бластоциста.

Как видно из табл. 4.4, культивируемые invitro ооциты без кумулюса не способны к дальнейшему развитию. Из полученных в первой группе одна задержавшаяся морула и одна бластоциста принадлежат, вероятно, реципиентам. Добавление фолликулярных клеток в среду для культивирования ооцитов без кумулюса не улучшило способность ооцитов к дальнейшему развитию — 83% ооцитов остались одноклеточными. Полученные в этой группе шесть бластоцист в одном опыте, по мнению авторов, возможно, являются результатом неполного удаления кумулюса. Ооциты с кумулюсом (группа 3) подобно ооцитам без кумулюса (группа 2) в 87% случаев остались на одноклеточной стадии. Добавление фолликулярных клеток к ооцитам с

228

Таблица4.4. Культивирование ооцитов, выделенных из фолликуло созревших в присутствии различного числа фолликулярных клеток

Груп па	Ооциты	Число ооцитов		Развитие зародышей на 12-й день
		переса женных	извлеченных	одноклеточные	задержавшие дробление	вылупившиеся бластоцисты
1 2 3 4	Без кумулюса Без кумулюса с дополнительными фолликулярными клетками (5* 10^е клеток в 1 мл) С кумулюсом (10 клеток в 1 мл) С кумулюсом и фолликулярными клетками (5 • 10^Ь клеток в 1 мл)	69 78 83 86	57 60 60 78	49 50 52 34	7 4 7 15	1(1,9) 6 (10,0) 1 (1,8) 29 (37,2)

Примечание. В скобках приведены значения в процентах.

кумулюсом позволило достичь развития эмбрионов до вылупившейся бластоцисты у 37,2% ооцитов.

В другом опыте культивирование ооцитов с кумулюсом и слоем гранулезных клеток как целостного комплекса обеспечило дальнейшее развитие до бластоцисты 42,6% клеток. Добавление фолликулярных клеток к этому комплексу существенно не повлияло на эффективность их дальнейшего развития. В результате пересадки этих бластоцист эмбриональная выживаемость составила 63%.

Необходимость прямого контакта между соматическими (фолликулярными) клетками и половыми клетками обусловлена целым рядом причин. Фолликулярные клетки играют важную роль в питании ооцита. Они обеспечивают энергетический субстрат ооциту, участвуют в переносе некоторых предшественников аминокислот, нуклеотидов и фосфолипидов в ооцит; генерируют инструктивные сигналы, которые влияют на ядро и прямой синтез определенных структурных белков. Инструктивные сигналы, требуемые для созревания ооцитов, как было показано выше, наиболее важны в первые 6—8 ч после инициации.

В настоящее время применение на практике пока нашло созревание invitro только ооцитов крупного рогатого скота. Ооциты получают из яичников коров после убоя животных и

229

путем прижизненного извлечения, 1—2 раза в неделю. В первом случае яичники берут от животных после убоя, доставляют в лабораторию в термостатированном контейнере в течение 1,5—2,0 ч. В лаборатории яичники дважды промывают свежим фосфатным буфером. Ооциты извлекают из фолликулов, диаметр которых 2—6 мм, путем отсасывания или разрезания яичника на пластинки. Ооциты собирают в среду ТСМ199 с добавлением 10% сыворотки крови от коровы в охоте, затем дважды промывают и отбирают для дальнейшего созревания invitroтолько ооциты с компактным кумулюсом и однородной цитоплазмой.

В последнее время разработан способ прижизненного извлечения ооцитов из яичников коров с помощью ультразвукового прибора или лапароскопа. При этом ооциты отсасывают из фолликулов, диаметр которых не менее 2 мм, 1—2 раза в неделю от одного и того же животного. В среднем получают однократно 5—6 ооцитов на животное. Менее 50% ооцитов пригодны для созревания invitro.

Несмотря на низкий выход ооцитов, при каждом извлечении возможность многократного использования животного, с учетом информации о происхождении полученных ооцитов, открывает новые перспективы использования метода оплодотворения invitro в практических целях.

Отобранные ооциты с компактным кумулюсом созревают в течение 24 ч в среде ТСМ 199 с добавлением 20%-ной обработанной теплом сыворотки крови от коровы в охоте, гранулезных клеток (3—5*10⁶ клеток в 1 мл) и небольшого количества антибиотиков (50 и. е. пенициллина, 50 мкг стрептомицина на 1 мл). Гранулезные клетки собирают из среды, в которой ооциты отделяют от фолликулов и центрифугируют дважды по 5 мин при 500 g . Осадок гранулезных клеток суспендируется в среде для созревания. Сокультивирование ооцитов и гранулезных клеток проводят при 38,5° С в атмосфере 5 % С0₂ в чашках Петри в 2 мл среды.

Капацитация сперматозоидов. Важным этапом в разработке метода оплодотворения у млекопитающих было открытие явления капацитации спермиев. В 1951 г. М.К. Чанг и одновременно с ним Г.Р. Аустин установили, что оплодотворение у млекопитающих наступает только в том случае, если спермин в течение нескольких часов до овуляции находятся в яйцеводе животного. Основываясь на наблюдениях по изучению проникновения спермиев в яйцеклетки крысы в различные сроки после спаривания, Аустин ввел термин капацитация. Он

230

означает, что в спермин должны произойти некоторые физиологические изменения до того, как он приобретет способность к оплодотворению.

В последующих исследованиях в лаборатории М.К. Чанга были не только определены оптимальные условия капацитации спермиев в половом тракте самки, но и продемонстрирована возможность декапацитации спермиев кролика, извлеченных из матки, обработанной семенной плазмой кролика, человека и быка, рекапацитации этих спермиев при внесении их в яйцеводы и, наконец, удаления декапацитирующего фактора из семенной плазмы центрифугированием.

Капацитация включает начальное изменение мембраны спермия, что позволяет ему пройти вторую фазу (акросомную реакцию), а также слияние плазменной и внешней акросомной мембран. В настоящее время первую фазу обозначают как саму капацитацию, а вторую—как акросомную реакцию.

Показано, что у спермиев крупного рогатого скота происходит акросомная реакция исключительно в ампуле яйцевода, расположенной ипсилатерально к стороне яичника с овуляцией, и только во время или непосредственно после овуляции. Эти наблюдения дают основание предполагать, что капацитация происходит преимущественно в яйцеводе, расположенном на той же стороне, что и яичник с овулирующим фолликулом. Установлено также, что содержимое, извлеченное из яйцевода во время эструса, но не в лютеиновую фазу полового цикла у овец, вызывает капацитацию и акросомную реакцию спермиевбыка.

Глюкозоаминоглюканы invitro вызывают акросомную реакцию или капацитацию бычьих эпидидимальных спермиев. При анализе глюкозоаминоглюканов в смывах яйцеводов крупного рогатого скота выявлена высокая концентрация гепариноподобного материала.

В опытах invitro установлено, что гепарин — наиболее потенциальный глюкозоаминоглюкан по способности вызывать акросомную реакцию у эпидидимальных спермиев быка и капацитацию эякулированных спермиев.

В организме коровы все спермин, прикрепленные к прозрачной оболочке, были с акросомной реакцией. Кроме того, с помощью электронной микроскопии обнаружено, что спермин быка, найденные в окружении и непосредственно в кумулюсной массе, в яйцеводе сохранили акросомы в полном объеме и только спермин, прикрепленные к прозрачной оболочке, имели акросомную реакцию. Эти данные свидетельствуют о том, что

231

спермин быка капацитируются в яйцеводе, а оплодотворяющий спермий завершает акросомную реакцию около или в прозрачной оболочке.

Разработано несколько методов капацитации эякулированных спермиев домашних животных. Для удаления белков с поверхности спермиев, которые, по-видимому, тормозят капацитацию спермиев, была использована среда с высокой ионной силой.

Однако наибольшее признание получил способ капацитации сперматозоидов с использованием гепарина (Дж. Парриш и др., 1985). Пайеты с замороженным семенем быка оттаивают в водяной бане при 39° С в течение 30—40 с. Примерно 250 мкл оттаянного семени подслаивают под 1 мл среды для капацитации. Среда для капацитации состоит из модифицированной среды Тиройда, без ионов кальция. После инкубации в течение одного часа верхний слой среды объемом 0,5—0,8 мл, содержащий большинство подвижных сперматозоидов, удаляют из пробирки и промывают дважды центрифугированием при 500 gв течение 7—10 мин. После 15 мин инкубации с гепарином (200 мкг/мл) суспензию разбавляют до концентрации 50 миллионов сперматозоидов в мл.

В Биотехцентре (Н.М. Сураева) было показано, что концентрация спермиев при всплывании стабилизируется уже в первые 5 мин и не меняется в течение последующего часа (табл. 4.5).

Таблица4.5. Эффективность всплывании спермиев в зависимости от продолжительности инкубации

Продолжительность инкубации, мин	Число опытов	Число спермиев в 1 мл
5 15 30 45 60	5 6 5 5 6	(3,3±0,46)-10⁶(3,8±0,53)-10⁶(1±0,75)-10⁶(2,8±0,72)-10⁶ (3,0±0,41)-10⁶

Таким образом, согласно данным табл. 4.5, можно значительно сократить продолжительность всплывания с 45—60 до 5—15 мин, что, в свою очередь, ускоряет, а значит, и облегчает оплодотворение. Поскольку желточный растворитель, содержащийся в сперме, оказывает токсическое действие на яйцеклетки и снижает эффективность оплодотворения, то чем меньше будет контакт с разбавителем, тем меньше его растворится в среде со всплывшими спермиями. Мы предлагаем уменьшить время ин-

232

кубации до 5—15 мин. Однако может встать вопрос о том, что сокращение продолжительности всплывания, а значит, и капацитации спермы может негативно повлиять на оплодотворяющую способность спермиев. Были проведены опыты по оплодотворению вне организма яйцеклеток крупного рогатого скота спермой, подвергшейся процедуре всплывания в течение 15 и 60 мин. Эксперименты с использованием двух интервалов инкубации показали, что продолжительность инкубации не влияет на эффективность дробления оплодотворенных вне организма яйцеклеток крупного рогатого скота (табл. 4.6).

Таблица 4.6. Оплодотворяющая способность спермы быка в зависимости от продолжительности всплывания спермиев

Продолжительность инкубации, мин	Число ооцитов	Число дробящихся зародышей	Число морул и бластоцист
15 60	253 184	164 (65,0)* 96 (52,1)*	34 (21,0) 23 (24,0)

Примечание.В скобках приведены значения в процентах.

Полученные результаты открыли перспективы повышения выхода живых спермиев из одной дозы размороженной спермы, так как появилась возможность проведения процедуры всплывания спермиев с одним и тем же осадком несколько раз без потери их жизнеспособности. Действительно, при пятикратной смене среды над осадком спермы с разбавителем удается получить такую же концентрацию живых спермиев, как и при первом ее добавлении (табл. 4.7). Причем их оплодотворяющая способность при последующих сменах сред хотя и понижается (число дробящихся эмбрионов при трехкратной смене среды составляет 47% против 65% в начальной среде), но остается полноценной (табл. 4.8).

Таблица 4.7. Число всплывших спермиев после добавления свежейпорции среды

Кратность смены среды	Число опытов	Число спермиев в 1 мл
1 2 3 4 6	5 6 6 5 6	(2,1 ±0,21)·10⁶ (1,8±0,20)·10⁶ (1,1±,28)·10⁶ (2,1±0,42)·10⁶ (2,0±0,34)·10⁶

* Р<0,005.

233

Таблица 4.8. Влияние смены среды на оплодотворяющую способностьспермы

Кратность смены среды	Число ооцитов	Чило дробящихся зародышей	Число морул и бластоцист
1 3	253 220	164 (65,0)* 103 (47,0)*	34(21,0) 21 (20,3)

Примечание.В скобках приведены значения в процентах.

Таким образом, используя прием многократных смен среды, можно в несколько раз (в наших опытах в пять раз) увеличить эффективность использования одной порции эякулята, что особенно важно, когда применяют сперму от высокоценных быков-производителей.

Оплодотворение invitro и обеспечение ранних стадий развития эмбрионов. Оплодотворение яйцеклеток у млекопитающих осуществляется в яйцеводах. Это затрудняет доступ исследователя к изучению условий среды, где происходит процесс оплодотворения. Поэтому система оплодотворения invitro была бы ценным аналитическим инструментом для изучения биохимических и физиологических факторов, включающихся в процесс успешного соединения гамет. Более того, предполагалось, что эта система найдет применение в технологии разведения животных.

Основным критерием для установления оплодотворения является образование первого и второго полярного тельца, мужского и женского пронуклеусов и обнаружение некоторых частей сперматозоида.

Крупныйрогатыйскот.Первый теленок с использованием метода оплодотворения invitro был получен Б.Г. Бра-кетт и др. в 1982 г. Авторы использовали ооциты из предовуля-торных фолликулов или яйцеводов сразу после овуляции. Капа-цитацию сперматозоидов проводили в среде с высокой ионной силой. Другие группы ученых (Л.К. Эрнст и др., 1983; М.И. Прокофьев и др., 1987) в последующие годы получили телят оплодотворением invitro ооцитов, созревших вне организма.

Было установлено, что эмбрионы крупного рогатого скота и овец, культивируемые invitro с 1—4-клеточной стадии, редко развивались дальше 8—16 клеток, тогда как эмбрионы, культивируемые с 8—16-клеточной стадии, успешно развивались до

* Р<0,05. **Р>0,05.

234

стадии бластоцисты. Эти наблюдения позволяют предположить существование блокировки развития на 8—16-клеточной стадии для эмбрионов крупного рогатого скота.

Можно предполагать, что яйцевод, а не культуральная среда обеспечивает условия, ведущие к развитию ранних эмбрионов, что определенные процессы развития, происходящие между одно- и 16-клеточной стадиями, требуют специфических условий, обычно обеспечиваемых яйцеводом.

Начало разработке адекватной системы культивирования эмбрионов invitro положено сокультивированием эмбрионов на слое эпителиальных клеток яйцеводов. Для сокультивирования с ранними эмбрионами используются также кумулюсные клетки и трофобласты.

Применяют следующую схему оплодотворения invitro и культивирования ранних эмбрионов крупного рогатого скота. Оплодотворение invitro проводят в капле модифицированной среды Тироида. После созревания invitro ооциты частично очищаются от окружающих экспандированных кумулюсных клеток и переносятся в микрокапле по 5 ооцитов в каждой. Суспензия сперматозоидов объемом 2—5 мкл добавляется к среде с ооцитами, чтобы достичь концентрации сперматозоидов в каплях 1 — 1,5 млн/мл. Через 44—48 ч после осеменения определяют наличие дробления ооцитов. Затем эмбрионы помещают на монослой эпителиальных клеток для дальнейшего развития в течение 5 дней.

Овцы. Оплодотворение у овец исследовали двумя путями: invitro и введением фолликулярных ооцитов в яйцевод осемененной овцы. Как и у крупного рогатого скота, число оплодотворенных яйцеклеток было больше в том случае, когда фолликулярные и овулировавшие ооциты помещали в яйцевод со спермиями. При использовании системы оплодотворения invitro таких клеток было меньше.

А. Троунсон и P.M. Мур (1977) культивировали ооциты внутри фолликулов, а затем помещали их в яйцевод осемененного реципиента. В результате от 26 до 50% ооцитов развивались до стадии бластоцисты. После пересадки полученных бластоцист другому реципиенту приживаемость составила 52%.

Р.Г. Стайгмиллер и P.M. Мур (1984) в своих опытах использовали ту же систему оплодотворения ооцитов в яйцеводе овцы, но созревание ооцитов проводилось invitro вне фолликулов. Ооциты культивировали в среде ТСМ 199 с 10%-ной инактиви-рованной фетальной сывороткой с добавлением гонадотропинов (ЛГ и ФСГ) и эстадиола — 17_βВ. Эмбрионы извлекали из матки овцы через 10—12 дней. В результате до 37,2% ооцитов разви-

235

вались до стадии бластоцисты. Пересадка другому реципиенту сопровождалась развитием эмбрионов до рождения нормального потомства.

Развитие эмбрионов овец с 8-клеточной стадии до вылупившейся бластоцисты впервые получено в среде Виттена с добавкой БСА (Р.Ф. Питере и др., 1977).

В опытах Н. Грозета и др. (1987) овулировавшие ооциты (п-87) и ооциты из яичника (л-99), которые созревали invitro, оплодотворяли invitro эякулированными спермиями, капацити-рованными в течение 8 ч в модифицированной среде ДМ с добавлением ЮмМ буфера Хепеса. Получена высокая оплодотво-ряемость — 75,8% овулировавших ооцитов и 62,6% ооцитов из яичника. Хирургическим путем переносили 2—4-клеточные эмбрионы в яйцеводы ложнобеременным кроликам. Через 3 дня 42 овулировавших ооцита и 15 ооцитов из яичника извлекали из яйцевода кролика. Из них соответственно 26 и 10 эмбрионов дробились не меньше одного раза. После инкубации invitro 20 овулировавших ооцитов и 9 извлеченных из яичника были пересажены хирургическим путем в матку, соответственно 7 и 4 овцам-реципиентам. Суягность наступила у 4 и 2 овец, из которых у 3 и 1 сохранилась меньше 3 мес. Первый ягненок родился от оплодотворения invitro овулировавших ооцитов. Шесть эмбрионов, полученных из овулировавших ооцитов, и 10 из яичников перенесены прямо в яйцеводы соответственно 2 и 3 овец. Развивалось две суягности из яичниковых ооцитов.

Свиньи. К настоящему времени не известны какие-либо данные об оплодотворении invitro ооцитов свиней. Вместе с тем некоторые исследователи наблюдали проникновение спер-миев в ооциты свиней после созревания их invitro и пересадки осемененной эстральной свиньи, но ни один ооцит не продолжал развитие и у многих из них проявилась полиспермия.

Другие авторы сообщили о нормальном оплодотворении и развитии в аналогичной системе ооцитов, полученных из яичников свиней, обработанных ХГ за 12 ч до ожидаемой овуляции. Можно полагать, что только после полного созревания ооцита в организме животного происходит блокирование полиспермии, нормальное оплодотворение и дальнейшее развитие эмбрионов этого вида.

Более успешные результаты достигнуты при культивировании ранних эмбрионов свиней invitro. Так, после 48 ч культивирования 1—4-клеточных эмбрионов свиней и последующей их хирургической пересадки были получены беременности у 2 из 13 свиней. После культивирования 8-клеточных эмбрионов в течение 48 ч до стадии бластоцисты и затем пересадки 19 свинь-

236

ям-реципиентам 10 животных были беременны во время убоя через 21 день, но только 51 из 229 эмбрионов были представлены живыми плодами.

Дата добавления: 2021-01-20; просмотров: 416; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 13 14 15 16 171819 20 21 22 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!