Бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон
6.2.1 Состав:
| ферментативный перевар казеина | 10 г; | |||
лактоза (С  Н  О  ·Н  О)
| 10 г; |
| ||
| желчь | 20 г; |
| ||
| бриллиантовый зеленый | 0,0133 г, |
| ||
(или 2,66 см  раствора, приготовленного по 6.2.3, в случае приготовления среды из отдельных компонентов);
|
| |||
| вода | 1000 см .
|
| ||
6.2.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную готовую среду в воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (7,2±0,2) при температуре 25 °С. Разливают и стерилизуют среду по 6.1.2.
6.2.3 Раствор бриллиантового зеленого
6.2.3.1 Состав:
| бриллиантовый зеленый | 0,5 г; | |||
| вода | 100 см  .
|
| ||
6.2.3.2 Приготовление
Бриллиантовый зеленый переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см 
и доводят водой до метки.
6.3 Селективная обогатительная среда (бульон Мак-Конки)
6.3.1 Состав бульона Мак-Конки приведен в таблице 2.
Таблица 2
| Состав среды | а) Среда двойной концентрации | б) Среда нормальной концентрации |
| Пептон, г | 40 | 20 |
Лактоза (С  Н  О  ·Н  О), г
| 20 | 10 |
| Желчь, г | 10 | 5 |
| Раствор бромкрезолового пурпурового, см
| 2 | 1 |
| Натрий хлористый, г | 10 | 5 |
| Вода, см
| 1000 | 1000 |
6.3.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты в воде. Нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят объем до 1 дм 
, охлаждают до 45 °С - 55 °С и устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С (7,2±0,1). Разливают и стерилизуют среду по 6.1.2.
6.3.3 Раствор бромкрезолового пурпурового
6.3.3.1 Состав:
| бромкрезоловый пурпуровый | 1 г; | |||
раствор гидроокиси натрия  (NaOH)=0,1 моль/дм
| 19 см ;
|
| ||
| вода | 80 см .
|
| ||
6.3.3.2 Приготовление
Бромкрезоловый пурпуровый переносят в фарфоровую ступку с 19 см раствора гидроокиси натрия c(NaOH)=0,1 моль/дм и после растворения добавляют воду.
6.4 Селективная обогатительная среда (среда Кесслера)
6.4.1 Состав среды Кесслера приведен в таблице 3.
Таблица 3
| Состав среды | а) Среда двойной концентрации | б) Среда нормальной концентрации |
| Пептон, г | 20 | 10 |
| Лактоза (С Н О ·Н О), г
| 5 | 2,5 |
| Желчь, г | 10 | 5 |
| Раствор кристаллического фиолетового, см
| 4 | 2 |
| Вода, см
| 1000 | 1000 |
6.4.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты в воде. Нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят объем до 1 дм , охлаждают до 45 °С - 55 °С и устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С (7,2±0,1).
Разливают среду по 6.1.2 и стерилизуют в автоклаве при температуре (115±1) °С в течение 20 мин.
6.4.3 Раствор кристаллического фиолетового
6.4.3.1 Состав:
| кристаллический фиолетовый | 1 г; | |||
| вода | 100 см .
|
| ||
6.4.3.2 Приготовление
Кристаллический фиолетовый переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят водой до метки.
6.5 Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар (VRBL-агар)
6.5.1 Состав:
| ферментативный перевар животных тканей | 7 г; | |||
| дрожжевой экстракт | 3 г; |
| ||
лактоза (С  Н  О  ·Н  О)
| 10 г; |
| ||
| хлористый натрий | 5 г; |
| ||
| желчные соли | 1,5 г; |
| ||
| нейтральный красный | 0,03 г |
| ||
(или 1 см  раствора, приготовленного по 6.5.3, в случае приготовления среды из отдельных компонентов);
|
| |||
| кристаллический фиолетовый | 0,002 г |
| ||
(или 0,2 см  раствора, приготовленного по 6.4.3, в случае приготовления среды из отдельных компонентов);
|
| |||
| агар | 12-18 г |
| ||
| (зависит от желирующей способности агара); |
| |||
| вода | 1000 см .
|
| ||
6.5.2 Приготовление
Основная цель правильного приготовления среды - получение необходимой селективной способности и специфичности среды.
Тщательно размешивают компоненты или дегидратированную готовую среду в воде и оставляют на несколько минут. Устанавливают рН так, чтобы после кипения он составлял (7,4±0,2) при температуре 25 °С. Нагревают до кипения, помешивая время от времени. После 2 мин кипения немедленно охлаждают в водяной бане при температуре 44 °С - 47 °С. Избегают перегрева среды, не применяя вторичного нагревания. Среду не стерилизуют в автоклаве. Контролируют стерильность среды во время использования. Используют среду в течение 4 час после приготовления.
6.5.3 Раствор нейтрального красного
6.5.3.1 Состав:
| нейтральный красный | 3 г; | |||
| вода | 100 см .
|
| ||
6.5.3.2 Приготовление
Нейтральный красный переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят водой до метки.
Дата добавления: 2020-12-12; просмотров: 127; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!