Метод НВЧ - определение количества колиформных бактерий
ГОСТ Р 52816-2007 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
ГОСТ Р 52816-2007
Группа Н09
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
Food products. Methods for detection and quantity determination of coliformes
ОКС 07.100.30
ОКСТУ 9109
Дата введения 2009-01-01
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 года N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности" (ГНУ ВНИИКОП) на основе аутентичных переводов стандартов, указанных в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки фруктов, овощей и грибов"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 декабря 2007 г. N 443-ст
4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международным стандартам*:
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам можно получить, перейдя по ссылке - Примечание изготовителя базы данных.
- ИСО 4831:2006 "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод для выявления и подсчета количества колиформ. Метод наиболее вероятного числа" (ISO 4831:2006 "Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal mеthod for the detection and enumeration of coliforms - Most probable number technique", MOD);
- ИСО 4832:2006 "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета колиформ. Метод подсчета колоний" (ISO 4832:2006 "Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal mеthod for the enumeration of coliforms - Colony-count technique", MOD) в части пищевых продуктов.
При этом дополнительные положения и требования, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены в тексте стандарта курсивом*.
_______________
* В бумажном оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в разделе "Предисловие" и таблице В.1 приложения В приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.
Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой указанных международных стандартов приведено в дополнительном приложении Б.
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2004* (подраздел 3.5).
________________
* На территории Российской Федерации в части разд.8 и приложений Ж, И, К действует ГОСТ Р 1.7-2008.
|
|
|
|
|
|
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок, указанные в приложении В
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
6 ИЗДАНИЕ (апрель 2010 г.) с Поправкой (ИУС 8-2009)
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
|
|
|
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, кроме молока и молочных продуктов, и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта колиформных бактерий и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды.
Метод определения НВЧ колиформных бактерий предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см 
жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 или в 1 см 
жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц (КОЕ) колиформных бактерий.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см 
жидкого продукта более 150 КОЕ колиформных бактерий.
Допускается использование хромогенных сред для предварительного выявления количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) в масложировой продукции.
(Поправка).
|
|
|
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 7218-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования*
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
ГОСТ 29184-91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
ГОСТ 30425-97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 колиформные бактерии: Бактерии, которые при температуре 37 °С ферментируют лактозу с образованием газа по методам, приведенным в настоящем стандарте.
3.2 выявление колиформных бактерий: Определение присутствия или отсутствия колиформных бактерий в определенной массе или объеме продукта в соответствии с настоящим стандартом.
3.3 определение количества колиформных бактерий:
3.3.1 Количество бактерий, содержащееся в 1 см 
или 1 г продукта, определенное путем посева продукта и (или) его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду, подсчете после инкубирования при температуре 37 °С типичных и атипичных колоний и определении возможности бактерий из этих колоний ферментировать лактозу с образованием газа по методам, приведенным в настоящем стандарте.
При необходимости, подтверждают по биохимическим признакам принадлежность выделенных колоний к колиформным бактериям.
3.3.2 Количество бактерий, содержащееся в 1 см 
или 1 г продукта, определенное по методу НВЧ, указанному в настоящем стандарте.
4 Метод выявления колиформных бактерий и определение количества по методу НВЧ
Сущность методов
Методы выявления и определения НВЧ колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете положительных пробирок, пересеве культуральной жидкости в жидкую селективную среду для учета газообразования или пересева, при необходимости, культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды для подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.
4.1 Метод выявления колиформных бактерий
4.1.1 Пробирку с селективной обогатительной средой инокулируют продуктом или разведением навески продукта и инкубируют при температуре 37 °С 24 или 48 ч.
4.1.2 Пробирку с подтверждающей средой инокулируют из пробирки, полученной по 4.1.1, где отмечено образование газа и/или помутнение и инкубируют при температуре 37 °С 24 или 48 ч.
4.1.3 Присутствие колиформных бактерий считается подтвержденным, в случае если отмечено помутнение и образование газа после осмотра пробирки, полученной по 4.1.2.
Метод НВЧ - определение количества колиформных бактерий
4.2.1 Три пробирки с жидкой селективной обогатительной средой двойной концентрации инокулируют определенным количеством продукта, если исходный продукт жидкий, или определенным количеством исходной суспензии в случае другого продукта.
4.2.2 Три пробирки с жидкой селективной обогатительной средой нормальной концентрации инокулируют определенным количеством продукта и/или разведением продукта, если исходный продукт жидкий, или определенным количеством исходной суспензии и/или разведением в случае другого продукта.
4.2.3 Посевы в пробирках, содержащие обогатительную среду двойной концентрации, инкубируют при температуре 37 °С 24 ч. Посевы в пробирках со средой нормальной концентрации, инкубируют 24 или 48 ч, после этого в этих пробирках отмечают наличие газа и/или помутнения, мешающего выявлению образования газа.
4.2.4 Пробирки с подтверждающей средой инокулируют культурами из пробирок с обогатительной селективной средой двойной концентрации и культурами из пробирок с обогатительной селективной средой нормальной концентрации, в которых отмечено образование газа и/или помутнение.
Посевы в пробирках с подтверждающей средой инкубируют при температуре 37 °С 24 или 48 ч, после этого в пробирках отмечают образование газа.
4.2.5 Наиболее вероятное число колиформных бактерий в 1 см 
или 1 г пробы продукта (НВЧ) рассчитывают исходя из числа пробирок с подтверждающей средой (4.2.4), показавших образование газа. Для определения наиболее вероятного числа пользуются таблицей ГОСТ 26670.
5 Методы определения количества колиформных бактерий - подсчет колоний
Сущность методов
Методы определения количества колиформных бактерий посевом в или на агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве определенного количества продукта и/или его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду с лактозой, инкубировании посевов, подсчете типичных и атипичных колоний, пересеве типичных и атипичных колоний в жидкую селективную среду с лактозой для определения газообразования, подтверждения, при необходимости, по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.
5.1 Метод посева в агаризованную селективно-диагностическую среду
5.1.1 Для определения количества колиформных бактерий по 1 см 
продукта, если продукт жидкий, или по 1 см исходного разведения в случае другого продукта вносят в две стерильные чашки Петри.
Другую пару чашек используют для других количеств - исходной суспензии и/или десятикратных разведений продукта.
Чашки с внесенным в них продуктом или его разведением заливают агаризованной питательной средой.
Посевы в чашках инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч.
5.1.2 Типичные и атипичные колонии подсчитывают и определяют у бактерий из типичных и атипичных колоний возможность ферментации лактозы.
5.1.3 Число колоний на 1 см 
или на 1 г продукта рассчитывают по ГОСТ 26670 исходя из числа подтвержденных типичных и атипичных колоний, выросших на чашках.
5.2 Метод посева на агаризованную селективно-диагностическую среду
5.2.1 На подсушенную поверхность агаризованной селективно-диагностической среды в двух чашках Петри наносят 0,1-0,2 см 
продукта, если продукт жидкий, или исходной суспензии в случае другого продукта.
Другую пару чашек используют для других количеств - исходной суспензии или десятикратных разведений продукта.
Внесенный в чашки продукт или его разведения распределяют по поверхности агаризованной питательной среды стерильным шпателем.
Посевы в чашках инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч.
5.2.2 Типичные и атипичные колонии подсчитывают и определяют у бактерий из этих колоний возможность ферментации лактозы.
5.2.3 Число колоний на 1 см 
или на 1 г продукта рассчитывают по ГОСТ 26670 исходя из числа подтвержденных типичных и атипичных колоний, выросших на чашках.
6 Питательные среды и реактивы
Химические вещества, используемые для приготовления питательных сред и реактивов, должны быть аналитического качества.
6.1 Селективная обогатительная среда (лаурил сульфат триптозный бульон)
6.1.1 Состав среды приведен в таблице 1.
Таблица 1
| Состав среды | а) Среда двойной концентрации | б) Среда нормальной концентрации |
| Ферментативный перевар молока и животных протеинов, г | 40 | 20 |
Лактоза (С  Н  О  ·Н О), г
| 10 | 5 |
Двузамещенный фосфорнокислый калий (K НРО  ), г
| 5,5 | 2,75 |
| Однозамещенный фосфорнокислый калий (KН РО ), г
| 5,5 | 2,75 |
| Натрий хлористый, г | 10 | 5 |
| Натрий лаурил сульфат, г | 0,2 | 0,1 |
Вода, см 
| 1000 | 1000 |
6.1.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную готовую среду в воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (6,8±0,2) при температуре 25 °С.
Разливают среду по 10 см в пробирки размером приблизительно 16х160 мм, содержащие пробирки Дархама (поплавки), в случае использования среды нормальной концентрации, и в пробирки размером приблизительно 20х200 мм, не содержащие пробирки Дархама (поплавки), в случае использования среды двойной концентрации.
Стерилизуют среду в автоклаве при температуре (121±1)°С в течение 15 мин. Пробирки Дархама (поплавки) после стерилизации не должны содержать пузырьков воздуха.
Дата добавления: 2020-12-12; просмотров: 71; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!