Калибровка прибора № 1 по стандартным растворам
| Конц. этанола | h этан. | h проп. | h этан./ h проп. |
| 0,5‰ | 4,51 | 8,72 | 0,51 |
| 1‰ | 7,13 | 9,91 | 0,71 |
| 2‰ | 13,90 | 8,24 | 1,69 |
| 3‰ | 17,73 | 8.51 | 2,08 |
| 4‰ | 22,21 | 8,80 | 2,52 |
21
Таблица 4
Калибровка прибора № 2 по стандартным растворам
| Конц. этанола | h этан. | h проп. | h этан / h проп. |
| 0,5‰ | 2,92 | 7,40 | 0,51 |
| 1‰ | 6,73 | 7,14 | 0,94 |
| 2‰ | 11,01 | 7,11 | 1,57 |
| 3‰ | 16,04 | 7,16 | 2,24 |
| 4‰ | 21,03 | 7,23 | 2,89 |
Газохроматографический анализ дистиллята паровоздушным методом
Исследование дистиллята газохроматографическим методом: часть дистиллята (1-2 мл) или биологической жидкости (кровь, моча) переносят в пенициллиновый флакон, который закрывают резиновой пробкой и под обкатку. Пенициллиновый флакон помещают на 10 мин. в термостат при 40-50 °С. Медицинским шприцом, через резиновую пробку, отбирают 1 мл газовой фазы из флакона и вводят в дозирующее устройство хроматографа. На хроматографической ленте отмечают момент ввода пробы. Исследования проводят на колонках различной полярности (колонка № 1 15% сквалан и колонка № 2 реоплекс 400R). После получения хроматограмм, приступают к их обработке. Вначале определяют абсолютное расстояние (время) удерживания (lабс, tабс) компонентов анализируемой смеси, а затем относительное расстояние (время) (lотн, tотн) удерживания, используя в качестве стандарта этиловый спирт. Для этого определяют абсолютное расстояние (время) удерживания этилового спирта (lст, tст) по той же методике на каждой колонке перед проведением газохроматографического анализа дистиллята. Полученные расчетным путём относительные расстояния (времена) удерживания (lотн, tотн) компонентов смеси сравнивают с относительными расстояниями (временами) удерживания веществ, приведенных в таблице 5 и делают заключение о составе анализируемой смеси.
|
|
|
Условия хроматографирования прибор ЛХМ-80 с детектором катарометром, колонки: 200x0,4 с насадками:
№ 1 15% сквалана на хроматоне N-AW 0,16-0,20 мм;
№ 2 реоплекс 400 R на хроматоне N-AW 0,16-0,20 мм;
22
Ткол =100 °С, Тисп =110 °С, газоноситель - гелий.
Газохроматогафический анализ биологического материала суховоздушным методом
5 г биологической ткани помещают в пенициллиновый флакон и укупоривают под обкатку. Затем помещают в термостат при температуре 60-80 °С на 5 мин. Медицинским шприцом, прокалывая резиновую пробку, отбирают 1 мл газовой фазы и исследуют хроматографическим методом на двух колонках с различной полярностью как описано выше. Полученные данные обрабатывают аналогично предыдущему опыту (табл. 6).
|
|
|
Таблица 5
Расстояния удерживания некоторых «летучих ядов»
| Вещество | колонка № 1 | колонка № 2 | ||
| lабс, мм | lотн, мм | lабс, мм | lотн, мм | |
| Этанол (станд.) | 14 | 1,00 | 12 | 1,00 |
| Пропанол | 24 | 1,70 | 17 | 1,40 |
| Изопропанол | 15 | 1,07 | 23 | 1,91 |
| Изобутанол | 34 | 2,42 | 17 | 1.41 |
| Хлороформ | 30 | 2,14 | 40 | 3,33 |
| Четырёххлористый углерод | 10 | 0,71 | 60 | 5,00 |
| Ацетон | 10 | 0,71 | 12 | 1,00 |
В указанных условиях не проводят исследование методом ГЖХ фенола, формальдегида и хлоралгидрата, поскольку данные вещества являются высококипящими (например, фенол имеет Ткип. 188,7 °С) или находится в водном растворе в виде гидратов (например, формальдегид), которые трудно переходят в газовую фазу. Данные вещества могут быть проанализированы методом ГЖХ в условиях указанных для этиленгликоля (см. ниже.).
23
Экспресс-определение этиленгликоля в моче и плазме, крови методом газовой хроматографии
Этиленгликоль относится к группе «летучих ядов», но имеет очень высокую температуру кипения (см. табл. 6). Поэтому для проведения исследования этиленгликоля газохроматографическим методом необходимо использовать метод прямого ввода пробы и прибор, снабженный пламенно-ионизационным детектором.
|
|
|
Обнаружение: 2-3 мкл мочи или плазмы крови или извлечения из органов вводят в колонку хроматографа. Чувствительность прибора устанавливается таким образом, чтобы при хроматографировании метчика - 100 мг % (16 ммоль/л) раствора этиленгликоля на хроматограмме регистрировался пик высотой не менее 5 см. При условиях исследования биожидкостей на хроматограмме фиксируются и самые низкие токсические концентрации этиленгликоля, идентификация которого осуществляется по абсолютному времени удержания, совпадающему с метчиком.
Условия газохроматографического определения: газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором, колонка стеклянная, длиной 1,2 м, внутренним диаметром 3 мм, насадка - Separon BD (100 мкм) или Porapak Q-S (80-100 мкм), газоноситель - гелий со скоростью 45 мл/мин, температура колонки при использовании сепарона 180 °С, порапака 200 °С, температура испарителя 220 °С.
5 мкл мочи вводят в испаритель газового хроматографа марки «Цвет-110». Детектор ионизационно-пламенный, колонка № 1 - реоплекс-400 R на хроматоне 0,16-0,20 мм, колонка 2-апиезон L на хроматоне N-AW 0,16-0,20 мм, температура термостата - 170 °С, температура испарителя - 220 °С, расход газов: азота - 30 мл/мин, водорода - 30 мл/мин, воздуха - 300 мл/мин, предел чувствительности - 10x10, скорость движения диаграммной ленты - 720 мм/час. Время удерживания этиленгликоля на колонке № 1 - 36 мм, на колонке № 2 - 15 мм.
|
|
|
Таблица 6
Время удерживания (мин) важнейших растворителей (водные растворы) на Separon BD, колонка 0,3x12 см, температура колонки 180 °С, скорость газа носителя — 4 мл/мин
| Растворитель | Т кип (°С) | tабс (мин) |
| Метанол | 67.7 | 0.50 |
| Этанол | 78.4 | 0,82 |
| Ацетон | 56.2 | 1.27 |
24
| Хлористый метилен | 40.0 | 1,27 |
| Изопропанол | 82.5 | 1,33 |
| Эфир диэтиловый | 36,5 | 1,53 |
| Пропанол | 97.8 | 1,67 |
| Хлороформ | 61.2 | 2.33 |
| Этилацетат | 112 | 2,50 |
| Гексан | 68,8 | 2,67 |
| Дихлорэтан | 83,5 | 3,17 |
| Чегырёххлористый углерод | 76,8 | 3,17 |
| Изобутанол | 107,5 | 3,17 |
| Бензол | 80.1 | 3,50 |
| Метилцеллозоль | 124.6 | 3,67 |
| Трихлорэтилен | 87.2 | 3,67 |
| Бутанол | 117.4 | 4,00 |
| Этиленгликоль | 197,6 | 5,17 |
| Этшщеллозоль | 134.8 | 6.33 |
| Толуол | 110.6 | 7.33 |
| Изоамиловый спирт | 119,9 | 7,33 |
| 1,2-Пропиленгликоль | 189 | 8,00 |
| Амиловый спирт | 138,0 | 8,33 |
25
| Бутилацетат | 125,0 | 11,67 |
| М-Ксилол | 139,7 | 14,26 |
| О-Ксилол | 144,4 | 15.56 |
| Тетрагидрофурфуриловый спирт | 177,5 | 20.00 |
| Фенол | 188,7 | 28,00 |
| Диэтиленгликоль | 244.8 | 41,67 |
| Этилкарбитол | 201,9 | 55,00 |
Указанные соединения не мешают определению этиленгликоля. Порядок выхода перечисленных растворителей на Paropak Q-S аналогичен.
Следует отметить, что при исследовании биологических объектов на хроматограммах, как правило, регистрируется фоновый пик со временем удержания, приблизительно равным половине времени удержания этиленгликоля и также не мешающий его определению.
Чувствительность обнаружения этиленгликоля в объектах исследования - 10 мг/% (1,6 ммоль/л). При содержании этиленгликоля в биологических жидкостях свыше 50 мг % (8 ммоль/л), его количественное определение может проводиться непосредственно в объектах, минуя стадию предварительного изолирования яда.
Разработанные методики позволяют определить этиленгликоль в присутствии других гликолей, в том числе и пропиленгликоля. При гнилостно-разложившемся биоматериале данный метод исследования не используют.
Количественное определение этиленгликоля проводят методом внутреннего стандарта с использованием пропиленгликоля. В случае обнаружения в биологическом материале пропиленгликоля внутренним стандартом является н-бутанол. В пенициллиновом флаконе тщательно смешивают равные объемы исследуемого объекта (моча, плазма крови или извлечение из мочи, крови, внутренних органов и внутреннего стандарта (3% раствор пропиленгликоля). 2-3 мкл смеси вводят в колонку газового хроматографа при описанных выше условиях. Расчет концентрации этиленгликоля в исследуемом объекте производят по предварительно построенному калибровочному графику зависимости отношения высот пиков этиленгликоля и пролиленгликоля от концентрации этиленгликоля. Калибровочные графики, построенные на водных растворах этиленгликоля, растворам этиленгликоля в плазме крови и моче, практически совпадают между
26
собой, что не требует введения поправочных коэффициентов при расчете содержания этиленгликоля в биологических жидкостях по калибровочному графику, построенному по водным растворам. В случаях проведения количественного определения в извлечениях расчет концентрации этиленгликоля в крови, моче и внутренних органах осуществляется по формуле:
Сэг = Сэг · V · 100 / (n · 100),
где Сэг - концентрация этиленгликоля в крови, моче или внутренних органах, мг % (или моль/л);
Сэг - концентрация этиленгликоля в водном извлечении, мг % (или ммоль/л);
V - объём водного извлечения, мл;
n - объём крови или мочи, взятый для определения, мл, или навеска органа, г;
% - усреднённый процент выхода этиленгликоля по методике: для мочи - 73%, для крови - 62%, для внутренних органов - 42%.
27
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ
1. Хроматография относится к методам:
1. Спектральным;
2. Разделительным;
3. Химическим;
4. Электрохимическим
5. Фармакологическим.
2. Химико-токсикологический анализ на «летучие» яды метом ГЖХ следует проводить на:
1. Одной колонке средней полярности;
2. Одной высокополярной колонке;
3. Одной колонке низкой полярности;
4. Двух колонках различной полярности;
5. Двух колонках одинаковой полярности.
3. В каком узле газового хроматографа осуществляется хроматографическое разделение компонентов смеси:
1. В детекторе;
2. В газохроматографической колонке;
3. В дозирующем устройстве;
4. В специальной насадке перед дозирующем устройством;
5. В другом узле.
4. Более точную идентификацию веществ методом ГЖХ следует проводить с использованием:
1. Абсолютных параметров удерживания;
2. Относительных параметров удерживания;
3. Площади пика;
4. Исправленных абсолютных параметров удерживания;
5. Высоты пика.
5. Абсолютное расстояние удерживания вещества на хроматограмме следует измерять:
1. От момента ввода пробы до максимума пика вещества;
2. От максимума пика воздуха до максимума пика вещества;
3. От любого соседнего пика;
4. От вершины хроматографического пика до нулевой линии;
5. От момента выхода воздуха.
6. Идентификация компонентов в ГЖХ может осуществляться:
1. По времени удерживания пиков;
2. По расстоянию удерживания;
3. По объёму удерживания пиков;
4. По площади пика;
5. По высоте пика.
7. В качестве подвижной фазы в ГЖХ используются:
28
1. Органически растворители - гептан, гексан, изооктан и др.;
2. Смеси воды или водных буферных растворов с ацетонитрилом или метанолом;
3. Инертные газы - водород, гелий, азот, аргон, углекислый газ, воздух
4. Фреоны, диэтиловый эфир, изопропанол;
5. Сероводород, хлор, бром, пары ледяную уксусную кислоту.
8. Детектор хроматографа - это блок, необходимый для:
1. Подачи подвижной фазы;
2. Ввода пробы:
3. Регистрации выхода пробы из колонки хроматографа;
4. Термостатирования колонки;
5. Обработки хроматограмм.
9. Имеется ли принципиальная разница между терминами: расстояние удерживания, время удерживания, объём удерживания:
1. Да
2. Нет
10. При качественном анализе величину «удерживания» надо мерить:
1. от момента ввода пробы
2. от максимума пика воздуха
3. от любого соседнего пика
29
ЛИТЕРАТУРА
Основная
1) Швайкова М. Д. Токсикологическая химия.- М.: Медицина , 1975.-376 с.
2) Крамаренко В. Ф. Токсикологическая химия.- Киев: Вища школа, 1989.-448 с.
3) Крамаренко В. Ф. Химико-токсикологический анализ. Практикум.- Киев: Вища школа, 1982. - 272с.
4) Белова А. В. Руководство к практическим занятиям по токсикологической химии.- М.: Медицина, 1976.- 231с.
5) Столяров В. В., Савинов И. М., Виттенберг А. Г. Практическая газовая и жидкостная хроматография.- СПб.: Издательство С.-Петербургского университета, 2002.- 610 с.
6) Беликов В. Г. Фармацевтическая химия.- Пятигорск, 2003.- 720 с.
Дополнительная
1) Руководство по судебно-медицинской экспертизе отравлений, под редакцией Бережного Р. В.- М.: Медицина, 1980.- 265 с.
2) Коцев Н. Справочник по газовой хроматографии. М.: Мир. 1976. 200 с.
3) Справочник «Неотложные состояния и экстренная медицинская помощь» Под. ред. Чазова Е. И.- М.: Медицина, 1990.- 640 с.
4) Бонитенко Е. И., Бабаханян Р. В., Боровко В. К, Бушуев Е. С, Гуляева Т. Н., Шипов В. В. Отравления этиленгликолем и его эфирами.- СПб.: Изд-во НИИХ СПбГУ - 119 с.
Дата добавления: 2020-12-12; просмотров: 123; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!