ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТАЦИИ ЛАКТОЗЫ (ГЛЮКОЗЫ)
Оксидазоотрицательную колонию засеивают параллельно в две пробирки с лактозой (глюкозой). Для подтверждения наличия ОКБ посев инкубируют при t + 370С 48 часов. Для подтверждения наличия ТКБ посев осуществляют в среду, предварительно подогретую до t + 44 - 430С и инкубируют при t + 440С в течение 24 часов.
УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ.
При отсутствии общих и термотолерантных колиформных бактерий на фильтрах результат записывают «не обнаружено КОЕ ОКБ в 100 мл » и «не обнаружено КОЕ ТКБ в 100 мл».
В случае идентификации выросших подозрительных колоний подсчитывают КОЕ ОКБ и ТКБ и выражают результат анализа КОЕ в 100 мл. воды.
Вычисление проводят по формуле:
а 100
Х = ------------, где х – число колоний в 100 мл; V – объём воды,
V
профильтрованный через фильтры, на которых вёлся учёт; а – число подсчитанных на этих фильтрах колоний в сумме.
НОРМА. ОКБ в 100 мл. – отсутствие
ТКБ в 100 мл. – отсутствие.
Пример: 2 100
Х = ---------- = 0,7 КОЕ ОКБ (ТКБ) в 100 мл.
300
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩИХ И ТЕРМОТОЛЕРАНТНЫХ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ ТИТРАЦИОННЫМ МЕТОДОМ
ВЫПОЛНЕНИЕ АНАЛИЗА
Для исследования воды качественным методом засевают 3 объёма по 100 мл. Для количественного определения засевают 3 объёма по 100 мл, 3 объёма по 10мл, 3 объёма по 1 мл.
Каждый объём исследуемой воды засевают в лактозно–пептонную среду (ЛПС). Посев 100 мл. и 10 мл. производят в 10 и 1 мл. концентрированной среды, посев 1 мл пробы производят в 10 мл. среды обычной концентрации.
|
|
|
Посевы инкубируют при t 370С 48 часов. Через 24 часа из ёмкостей, где наличие роста (помутнение, газ) производят высев петлей на сектора среды Эндо для получения изолированных колоний. Емкости без наличия роста оставляют в термостате и окончательно просматривают через 48 часов. Посевы без признаков роста считают отрицательными и дальнейшему исследованию они не подлежат.
Посевы на среде Эндо инкубируют при t 370С 18 – 24 часа. Если на Эндо тёмно – красные или красные с металлическим блеском колонии дают положительный ответ и выполняют оксидазный тест, подтверждают принадлежность к Грамму, посев на лактозу.
УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ.
При исследовании 3 объёмов по 100 мл. результаты оцениваются качественно и при обнаружении ОКБ и ТКБ хотя бы в одном из трёх объёмов делается запись в протокол «обнаружены» в 100мл.
При исследовании количественным методом определяют наиболее вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ по таблице 1 (срок действия таблицы до 1.01.05г.), а впоследствии по таблице 2 (срок действия таблицы с 1.01.05г.).
ТАБЛИЦА 1. (действует до 1.01.05г.)
| Число положительных результатов
| НВЧ бактерий в 100 мл. | ||||
| 3-х объёмов по 100 мл. | 3-х объёмов по 10 мл. | 3-х объёмов по 1мл. | |||
| 0 | 0 | 1 | 0,3 | ||
| 0 | 0 | 2 | 0,6 | ||
| 0 | 0 | 3 | 0,9 | ||
| 0 | 1 | 0 | 0,3 | ||
| 0 | 1 | 1 | 0,6 | ||
| 0 | 1 | 2 | 0,9 | ||
| 0 | 1 | 3 | 1,2 | ||
| 0 | 2 | 0 | 0,6 | ||
ТАБЛИЦА 2. (действует с 1.01.05г.)
| Число положительных результатов | НВЧ бактерий в 100 мл. | ||
| 3-х объёмов по 100 мл. | 3-х объёмов по 10 мл. | 3-х объёмов по 1мл. | |
| 0 | 0 | 1 | 0,3 |
| 0 | 0 | 2 | = |
| 0 | 0 | 3 | = |
| 0 | 1 | 0 | 0,3 |
| 0 | 1 | 1 | = |
| 0 | 1 | 2 | = |
= - количественный учёт невозможен результат оценивается качественно.
БОЕ – бляшкообразующие единицы (колифаги или фаги кишечной палочки), является сан. показателями м/о. Для посева берут 20 мл. исследуемой воды. Произведя посев на 4 чашки (по 5 мл. в чашку), заливают расплавленными до 430С агарам заражённым кишечной палочкой. Перемешивают воду и агар круговыми движениями. После того, как агар застынет, посев ставят в термостат при t 370С, на 18 – 24 ч. Результат считается положительным, если наблюдается зона лизиса. Количество зон лизиса подсчитывают и определяют БОЕ в одном литре.
|
|
|
В одном литре допускается 100 БОЕ. Если количество коли – фагов выше, то это является подозрением на загрязнение воды, кишечными палочками.
Дата добавления: 2020-11-15; просмотров: 86; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!