ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРАМ – ПРИНАДЛЕЖНОСТИ
ТЕМА: ТЕХНИКА САНИТАРНО – МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ВОДЫ
М У К РБ № 11 – 10 – 1 – 2002г.
Отбор, хранение и транспортировка проб
Для отбора проб воды используют стерильные флаконы вместимостью 0,5 л. с притёртой каучуковой или корковой пробкой, сверху стерильный бумажный колпачок, который обвязывают ниткой или бечёвкой. Кран обжигают пламенем горящего тампона, смоченного спиртом, и последующего спуска воды в течение 10 – 15 мин. При полностью открытом кране. При отборе пробы напор воды может быть уменьшен. Пробу отбирают непосредственно из крана без резиновых шлангов, водораспределительных сеток. При заполнении ёмкостей должно оставаться пространство между пробкой и поверхностью воды, чтобы пробка не смачивалась при транспортировке. Объём отбираемой пробы – 0,5 л. После наполнения ёмкость закрывают пробкой и колпачком. Для нейтрализации дезинфектанта вносят 10 мг. натрий серноватистокислый на 500 мл. воды.
Из колодца. Отбор пробы воды из шахтных колодцев можно производить при помощи батометра, бутылки с грузом 3 – 5 кг и двумя шнурами. Чаще пользуются общественными вёдрами, тщательно вымытым и предварительно обожжённым спиртовым факелом. Воду наливают в бутылки ч/з край ведра.
Отобранную воду маркируют и прилагают сопроводительный документ с указанием места, даты, времени, фамилии специалиста.
Доставку проб осуществляют в контейнерах – холодильниках при t +4 + 100С. При соблюдении указанных условий срок начала исследований от момента отбора проб не должен превышать 6 часов. Если пробы нельзя охладить, их анализ следует провести в течение 2-х часов после забора.
|
|
|
Пробы питьевой воды должны доставляться в отдельных продезинфицированных контейнерах.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО ЧИСЛА МИКРООРГАНИЗМОВ, ОБРАЗУЮЩИХ КОЛОНИИ НА ПИТАТЕЛЬНОМ АГАРЕ
Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативных анаэробных, микроорганизмов (МАФАМ) – ОМЧ, способных образовывать колонии на питательном агаре при t 370С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза.
При отсутствии роста учёт проводят через 48 часов. НОРМА НЕ БОЛЕЕ 50. Из каждой пробы делают посев двух объёмов по 1 мл. После тщательного перемешивания пробы воды вносят по 1 мл. в стерильные чашки Петри. После внесения воды в каждую чашку вливают 8 – 12 мл. МПА остуженного до 450С после фламбирования края посуды, в которой он содержался. Затем быстро смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха. Чашки ставят до застывания агара на горизонтальной поверхности. После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном при t +370С в течение 24 – 48 часов.
|
|
|
УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ.
Учитывают только те чашки, на которых выросло не более 300 изолированных колоний. Количество колоний на обеих чашках суммируют и делят на 2. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл. исследуемой пробы воды. Если на одной из 2 чашек подсчёт невозможен, результат выдают на основании учёта колоний на одной чашке. Если выросло более 300 колоний, подсчитывают в 1 секторе и умножают на 2 или 4. В этих случаях в протоколе отмечают «число КОЕ 1 мл. - ориентировочно». Если подсчёт колоний на чашках невозможен, то в протоколе отмечают «сплошной рост».
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩИХ ТЕРМОТОЛЕРАНТНЫХ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ.
МЕТОД МЕМБРАННОЙ ФИЛЬТРАЦИИ
Общие колиформные бактерии (ОКБ) – грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу (глюкозу) до кислоты и газа при t + 370С в течении 24 – 48 часов. Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число ОКБ, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу (глюкозу) до кислоты и газа при t + 440С в течение 24часов.
|
|
|
ВЫПОЛНЕНИЕ АНАЛИЗА
При исследовании воды анализируют 3 объёма по 100 мл.
Фильтровальный аппарат стерилизует фламбированием. После охлаждения на нижнюю часть фильтровального аппарата (столик) кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр и закрепляют. В воронку фильтровального прибора наливают 300 мл. воды, предварительно фламбируют горлышко ёмкости с пробкой. Создают вакуум в приёмном сосуде. После фильтрации фильтр берут фламбированным пинцетом и помещают на чашку со средой Эндо. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх. Чашки ставят в термостат вверх дном при t + 37 0С на 18 - 24 часа. Если на фильтре нет колоний или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые, выдают отрицательный ответ. Если на фильтрах обнаружен рост изолированных тёмно – красных, красных с металлическим блеском. Подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ. Каждую изолированную колонию исследуют на наличие оксидазной активности, принадлежность к Грамму /микроскопия окрашенного по Грамму препарата, ферментация лактозы /глюкозы/ до кислоты и газа.
|
|
|
ПОСТАНОВКА ОКСИДАЗНОГО ТЕСТА
Полоску фильтровальной бумаги помещают на чистую чашку Петри и смачивают 2 – 3 каплями реактива для оксидазного теста. Готовые бумажки смачивают дистиллированной водой. Бактериальной петлёй наносят колонию штрихом на фильтровальную бумагу. Реакция положительная, если появляется синее пятно. При отрицательной реакции цвет в месте нанесения культуры не меняется.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРАМ – ПРИНАДЛЕЖНОСТИ
Из оксидазоотрицательной колонии делают мазок, сушат, фиксируют, окрашивают по Грамму, микроскопируют. Колиформные бактерии являются грамотрицательными палочками.
Дата добавления: 2020-11-15; просмотров: 78; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!