Приготовление О- и Н-антигенов
Соматический 0-антиген бактерий является по своему составу сложным химическим комплексом, специфичность которого определяется глюцидолштоидополипептидпым компонентом.
Этот антиген устойчив к воздействию температуры, спирта в противоположность жгутиковому Н-антигену. Эта различная устойчивость О- и Н-антигенов к нагреванию и спирту положена в основу приготовления 0-антигена.
Наиболее простым способом приготовления 0-антигена является прогревание пробирки со смывом агаровой культуры соответствующего микроорганизма в кипящей водяной бане в течение 1,5—2 часов (по Кауфману достаточно 30 минут).
Для приготовления спиртового 0-антигена берут возможно более густую взвесь микробов в физиологическом растворе (смыв агаровой культуры). К определенному объему взвеси маленькими порциями медленно добавляют равный объем абсолютного этилового спирта, причем после добавления каждой его порции пробирку с антигеном встряхивают. После добавления всего объема спирта пробирку помещают в термостат на 12—24 часа, после чего в нее добавляют физиологический раствор в количестве половины объема жидкости, содержащейся в данной пробирке (концентрация спирта—33%). Перед употреблением полученный антиген разводят еще в 6 раз.
Приготовление жгутикового Н-антигена основано на том, что обработка подвижных микробов формалином приводит к понижению активности соматического антигена. Для приготовления жгутикового антигена к взвеси агаровой культуры микробов в физиологическом растворе добавляют 0,2% формалина, после чего взвесь выдерживают в термостате при 37° в течение 24 часов.
|
|
Агглютинирующая диагностическая сыворотка содержит антитела, полученные из сыворотки крови гипериммунизироанных животных, предназначена для постановки реакций агглютинации
Определение антигенного состава Х-культуры с помощью неадсорбированных и адсорби рованных агглютинирующих сывороток.
Ориентировочная реакция агглютинации
Ориентировочную реакцию агглютинации ставят на предметном стекле. Наносят пастеровской пипеткой каплю физиологического раствора, затем в ней тщательно размешивают небольшое количество культуры до получения гомогенной взвеси бактерий. Если отсутствует реакция самооглютинации, продолжают исследование. Рядом с первой каплей наносят каплю сыворотки в разведении 1 : 10, 1 : 20 и смешивают обе капли. Через несколько минут в случае положительного результата наблюдается образование агглютината , которое еще ускорится, если слегка покачивать стекло
2. Реакция развернутой агглютинации с целью серотипирования E . с oli
|
|
Применяется для подтверждения результатов ориентировочной реакции агглютинации с моновалентными сыворотками.
Сначала готовят основное разведение взвеси микроорганизмов (1:50). из которого делают серию разведений путем последовательного переноса 0,5 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда (0,5 + 0,5 физраствора). Из последней пробирки 0,5 мл разведенной взвеси удаляют для сохранения одинакового объема. В контрольную пробирку (контроль антигена) вносят 1 мл изотонического раствора хлорида натрия.
В каждую пробирку с разведениями и в контрольную пробирку вносят пастеровской пипеткой по 2 капли моновалентной сыворотки. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37°С на 2 ч, затем сутки выдерживают при комнатной температуре.
Учет реакции развернутой агглютинации производят, оценивая последовательно каждую пробирку, начиная с контрольных, при осторожном встряхивании. В контрольных пробирках агглютинации не должно быть. Интенсивность реакции агглютинации отмечают следующими знаками: "++++" — полная агглютинация (хлопья агтлютината в абсолютной прозрачной жидкости), "+++" — неполная агглютинация (хлопья в слабоопалесцирующей жидкости), "++" — частичная агглютинация (хлопья четко различимы, жидкость слегка мутная), "+" — слабая , сомнительная агглютинация (жидкость очень мутная, хлопья в ней плохо различимы), "—" — отсутствие агглютинации (жидкость равномерно мутная).
|
|
Контрольные вопросы:
1.Какими свойствами обладают антигены?
2.Какие виды антител Вы знаете?
3.Назовите стадии антителообразования
4.Каков механизм реакций иммунитета.
5.Перечислите виды реакций аглютинации.
6.Охарактеризуйте основные способы получения иммунных сывороток.
Список литературы:
Обязательная:
1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.—М.:Медицина,2000.— 432 с : ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).
2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 176 с.
3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. – 768 с.
4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.
Дополнительная:
1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.
2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. – СПб, СпецЛит. 2002. – 591 с.
|
|
3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.
4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.
Тема № 4: ИММУНИТЕТ: ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ПАМЯТЬ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ.ТРАНСПЛАНТАЦИОННЫЙ ИММУНИТЕТ.ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ.
Цель: Познакомиться с механизмами иммунологической памяти и толерантности. Изучить особенности трансплантационного иммунитета. Научиться ставить реакцию Видаля, РНГА. Уметь интерпретировать результаты реакций.
Вопросы для самоподготовки:
1. Иммунологическая память.
2. Иммунологическая ареактивность
3. Иммунологическая толерантность.
4. Трансплантационный иммунитет.
5. Реакции агглютинации (РА ). Нагрузочные реакции. РНГА
6. Критерии серодиагностики: дигностический титр, нарастание титра антител.
7. Применение реакций АГ+АТ в диагностике: изучение антигенного состава микроорганизмов (серотипирование), экспрессдиагностика, индикация антигенов в объектах внешней среды, серодиагностика.
План:
Программа:
1. Иммунологическая память и толерантность
2. Трансплантационный иммунитет
3. Критерии серодиагностики
3. Реакции агглютинации (РА) для серодиагностики брюшного тифа
4. Нагрузочные реакции. РНГА
Демонстрация:
1. Диагностические препараты для выявления антител (диагностикумы).
2. Результаты постановки реакции агглютинации по Видалю.
3. Результаты постановки РНГА.
Задание студентам:
1. Поставить развернутую реакцию агглютинации для определения титра антител к возбудителю брюшного тифа. Протоколировать и оценить результаты реакции.
2. Поставить РНГА с целью серодиагностики. Оценить результаты РНГА, поставленной с целью серодиагностики.
Информационный материал
Иммунологическая память
При повторной встрече с антигеном организм формирует более активную и быструю иммунную реакцию — вторичный иммунный ответ. Этот феномен получил название имму нологической памяти.
Иммунологическая память имеет высо кую специфичность к конкретному анти гену, распространяется как на гуморальное, так и клеточное звено иммунитета и обус ловлена В- и Т-лимфоцитами. Она обра зуется практически всегда и сохраняется годами и даже десятилетиями. Благодаря ней наш организм защищен от повторных антигенных интервенций.
Известно два наиболее вероятных механизма формирования иммунологической памяти.
1.Предполагает длительное сохранение антигена в организме. Этому имеется множество примеров: инкапсулированный возбудитель туберкулеза, персистируюшие вирусы кори, полиомиелита, ветряной оспы и некоторые другие патогены длительное время, иногда всю жизнь, сохраняются в организме, поддерживая в напряжении иммунную систему. Вероятно также наличие долгоживущих дендритных АПК, способных длительно сохранять и презентировать антиген.
2.Предусматривается, что в процессе развития в организме иммунного ответа часть антигенореактивных Т- или В-лимфоцитов дифференцируется в малые покоящиеся клетки, или клетки иммунологической памяти. Ониотличаются высокой специфичностью к конкретной антигенной детерминанте и большой продолжительностью жизни (до 10 лет и более), активно циркулируют в организме, но постоянно возвращаются в места своего происхождения за счет хоминговых рецепторов. Это обеспечивает постоянную готовность иммунной системы реагировать на повторный контакт с антигеном по вторичному типу.
Феномен иммунологической памяти широко используется в практике вакцинации людей. Осуществляют это 2-3-кратными прививками при первичной вакцинации и периодическими повторными введениями вакцинного препарата — ревакцинациями .
Однако феномен иммунологической памяти имеет и отрицательные стороны. Например, повторная попытка трансплантировать уже однажды отторгнутую ткань вызывает — криз отторжения.
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 138; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!