Получение адсорбированной агглютинирующей сыворотки методом истощения (адсорбции) по Кастеллани.
Метод адсорбции агглютининов по Кастеллани
При постановке реакции агглютинации иногда наблюдается явление групповой агглютинации, когда сыворотка больного (а иногда и агглютипирующая диагностическая сыворотка) агглютинирует не один вид микроба, а несколько видов, родственных один другому. Так, например, сыворотка больного брюшным тифом может агглютинировать не только брюшнотифозных бактерий, но и паратифозных А и В; диагностическая дизентерийная сыворотка агглютинирует несколько видов дизентерийных бактерий. То же явление может встретиться и при определении вида исследуемого микроба путем агглютинации, когда обнаруживается, что он агглютинируется не одной специфической сывороткой, но и другими сыворотками близких типов.
В этих случаях, благодаря наличию идентичных компонентов в сложных бактериальных антигенах, в иммунной сыворотке могут оказаться не только антитела к специфическому микробу, но и групповые антитела к родственным видам микробов. Это явление, затрудняющее точную серодиагностику и идентификацию микроба, может быть устранено методом адсорбции агглютининов, предложенным Кастеллани.
Метод основан на том, что при добавлении к иммунной сыворотке специфического антигена он адсорбирует полностью все антитела — и специфические, и групповые, в то время как неспецифический антиген способен связать только побочные (групповые) антитела, оставляя свободными антитела к специфическому антигену. Так, в приведенном выше примере после прибавления брюшнотифозных бактерий к сыворотке больного брюшным тифом они адсорбируют все антитела, и в дальнейшем эта сыворотка больше не будет способной к агглютинации. Если же к другой порции этой сыворотки прибавить микробов паратифа, то в наступившей групповой реакции паратифозные бактерии свяжут только групповые антитела, но не специфические, после чего сыворотка окажется вполне способной агглютинировать специфических микробов — брюшнотифозные палочки.
|
|
|
Титрование агглютинирующей сыворотки:
Тип реакции: реакция агглютинации.
Исследуемый материал: сыворотка животного, гипериммунизированного бактериальной взвесью.
Диагоностический препарат: взвесь убитых бактерий, применявшихся для гипериммунизации.
Принцип метода: к серийным разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют равные количества взвеси убитых бактерий, применявшихся для получения этой сыворотки.
Положительный результат реакции: образование хлопьев, просветление жидкости. Отрицательный результат: равномерная муть. Применение: для определения титра агглютинирующей сыворотки.
|
|
|
Титр агглютинирующей сыворотки -наибольшее разведение сыворотки, в которой еще наблюдается агглютинация. В данном случае титр агглютинирующей сыворотки равен
Серотипирование – изучение антигенного состава микроорганизмов
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
Постановка реакции агглютинации
Существует несколько методов постановки реакции агглютинации:
1) макроскопическая (развернутая) агглютинация в пробирках, которая учитывается через 2 часа выдерживания при 37° и на следующий день стояния при комнатной температуре;
2) ориентировочная агглютинация на предметном стекле в капле концентрированной агглютинирующей сыворотки, наступающая в течение нескольких минут;
3) ускоренный метод Нобля с применением концентрированных сывороток н встряхиванием, для чего требуется 8—10 минут.
Агглютинирующая диагностическая сыворотка готовится путем иммунизации кроликов; полученную иммунную сыворотку, определив ее титр (максимальное разведение), разливают по ампулам с добавлением консерванта; следует иметь в виду, что обозначенный на ампуле титр сыворотки со временем снижается. Иногда употребляют высушенную сыворотку; при пользовании сухими сыворотками разводят их дестиллированной водой 1 : 9 из расчета, что сыворотка потеряла при высушивании 9 частей веса.
|
|
|
Сыворотка от больного для постановки реакции агглютинации получается из его крови, взятой стерильно из локтевой вены в количестве 5—10 .мл. Одновременно часть крови употребляют для посева. Если же кровь берут только для постановки реакции, то вполне достаточно 1—2 мл; тогда берут кровь из пальца путем прокола иглой Франка.
Антигеном для реакции агглютинации являются соответствующие культуры бактерий в живом или убитом состоянии. Живыми культурами пользуются тогда, когда агглютинация ставится с целью определения вида бактерий, выделенных из Какого-либо субстрата; в таком случае суточную агаровую культуру бактерий смывают 1— 2 мл физиологического раствора и полученной взвесью бактерий пользуются для реакции.
При постановке же реакции с сывороткой больного принято пользоваться заранее заготовленными диагностикумами — взвесью убитых бактерий.
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 711; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!