Условия культивирования бактерий
Культивирование микроорганизмов - размножение микроорганизмов путем создания оптимальных условий для их роста и размножения. Для культивирования бактерий необходимо соблюдать такие условия:
1. Наличие полноценной питательной среды. Каждая питательная среда независимо от сложности состава и цели применения должна обладать водной основой, органическим источником углерода и энергии, определенным рН, осмотическим давлением.
2. Температура культивирования. Температура влияет на скорость размножения. В зависимости от температурного режима выделяют:
· мезофилы размножаются в диапазоне температур 20—40°С, оптимум температуры развития для них 37°С. К мезофиллам относится большинство болезнетворных для человека бактерий;
· термофилы растут в диапазоне температур 40—60°С. Их оптимум развития лежит в пределах 55°С (в организме теплокровных не размножаются и медицинского значения не имеют. К термофилам относятся актиномицеты и некоторые спороносные бациллы;
· психрофилы, холодолюбивые, размножаются в диапазоне температур 0-20°С. Это иерсинии, психрофильные варианты клебсиелл, псевдомонады, вызывающие заболевания человека. Размножаясь в пищевых продуктах, они более вирулентны при низких температурах.
3. Атмосфера культивирования. Для роста и размножения строгих аэробовнеобходим кислород. Аэробы хорошо растут на поверхности агара на чашках Петри или в тонком верхнем слое жидкой среды. Для обеспечения роста и размножения строгих аэробов в глубинных слоях жидкой среды необходимо диффузное распределение кислорода по всему объему питательной среды. Это достигается непрерывным перемешиванием или встряхиванием питательной среды, т. е. аэрированием. Аэрирование осуществляется на специальных аппаратах — встряхивателях.
|
|
|
Для культивирования факультативных анаэробовиспользуют те же методы, так как в присутствии кислорода у них преобладает оксидативный метаболизм над ферментацией, как наиболее энергетически выгодный.
Микроаэрофилы размножаются при пониженном парциальном давлении кислорода. Этого можно достичь повышением в атмосфере культивирования парциального давления С02 до концентрации 1-5 % против 0,03 % СО2 в атмосфере воздуха. Для этих же целей используют специальные СО2-инкубаторы, или же посевы помещают в эксикаторы, в которых устанавливают горящую свечу.
Облигатные анаэробы для своего роста и размножения требуют исключения доступа кислорода воздуха. Это достигается следующими мерами:
· добавлением к питательным средам редуцирующих кислород веществ: тиогликолевой кислоты, аскорбиновой кислоты, цистеина, сульфидов;
|
|
|
· регенерацией от кислорода воздуха жидких питательных сред путем их кипячения с последующим плотным закупориванием сосудов, в которые налиты среды, резиновыми пробками;
· использование поглотителей кислорода, щелочного пирогаллола, и других, помещая их в герметически закрываемые емкости «газ-паки». Этот метод используется для культивирования аэротолерантных бактерий;
· механическим удалением кислорода воздуха с последующим заполнением емкости инертным газом (для этих целей используют анаэростаты и анаэробные боксы).
Для культивирования хемо- и фотоавтотрофных бактерий создается атмосфера, насыщенная СО2.
4. Время культивирования. Зависит от времени генерации. Большинство бактерий культивируют для получения видимого роста в течение 18—48 ч. Для культивирования возбудителя коклюша требуется 5 суток, а для культивирования М. tuberculosis — 2—4 недели (табл. 17).
Таблица 17. Время генерации бактерий
| Виды микроорганизмов | Время генерации (мин) | Время образования визуализируемой колонии на плотной питательной среде (ч) |
| Clostridium perfringes | 10 | 8 |
| Escherichia coli | 20 | 16 |
| Mycobacterium tuberculosis | 800 (>13hours) | 336 (2 weeks) |
4. Освещение. Для выращивания фототрофных микроорганизмов необходим свет. Некоторые условно-патогенные микобактерии в зависимости от освещенности образуют пигмент, что используется при их идентификации.
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 499; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!