Тема 2: Специальные методы окраски. Устройство биологического микроскопа. Виды
Микроскопии. Порядок проведения иммерсионной микроскопии
Цель занятия: знать специальные методы окраски, используемые для выявления структур бактериальной клетки (спор, капсул, включений) и отдельных групп микроорганизмов; устройство биологического микроскопа и правила работы с ним; виды микроскопии (фазово-контрастная, люминесцентная, темнопольная, электронная); порядок проведения микроскопии с масляной иммерсией.
уметь выявлять наличие капсул у бактерий в препаратах, окрашенных методом Бурри-Гинса; выявлять наличие спор у бактерий в препаратах, окрашенных методом Ожешко; готовить препараты “раздавленной” и “висячей” капли из грибов и бактерий; определять подвижность у бактерий; определять включения бактерий (зерна волютина) в препаратах, окрашенных методом Леффлера; проводить микроскопию с масляной иммерсией.
Задание на дом:
I. Вопросы для самоподготовки:
1. Специальные методы окраски для выявления отдельных структур бактериальной клетки (Бурри-Гинса, Ожешко, Леффлера, Нейссера)
2. Методы окраски отдельных групп про- и эукариот
3. Изучение подвижности микроорганизмов
4. Виды микроскопии (фазово-контрастная, люминесцентная, темнопольная, электронная)
5. Устройство биологического микроскопа
6. Порядок проведения иммерсионной микроскопии
II. Базовый текст
Специальные методы окраски для выявления отдельных структур бактерий
|
|
|
Метод Бурри-Гинса.Относится к сложным методам окраски и используется для выявления капсулы бактериальной клетки. Этапы окраски:
1. На предметном стекле смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши, разведенной 1:10 и при помощи стекла со шлифованным краем сделать мазок таким же образом, как мазок крови, высушить и осторожно фиксировать в пламени горелки или горящим на мазке спиртом.
2. Нанести на мазок водный раствор фуксина на 1-2 мин.
3. Промыть водой, высушить на воздухе.
Метод Бурри-Гинса относится к негативным методам окраски: на первом этапе тушь, обтекая капсульные бактерии, создает черный или коричневый фон (соответствующий цвету туши) на котором хорошо видны неокрашенные бактерии, которые на втором этапе окрашиваются в красный цвет, а капсула остается бесцветной. Таким образом, капсулы бактерий хорошо видны на темном фоне туши виде неокрашенных зон вокруг красных бактерий.
Метод Ожешко (Ауэски). Относится к сложным методам окраски и используется для выявления спор бактерий. Этапы окраски:
1. На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор хлористоводородной кислоты (HCl) и подогреть в течение 2-3 мин на пламени (для протравливания плотной оболочки споры) до полного испарения кислоты. При этом происходит фиксация мазка к стеклу.
|
|
|
2. Окрасить по методу Циля-Нильсена.
Споры бактерий будут окрашиваться в красный цвет (как кислотоустойчивые бактерии), а вегетативные формы в синий цвет (как некислотоустойчивые бактерии).
Метод Леффлера. Относится к простым методам окраски и используется для выявления зерен волютина (цитоплазматических включений полифосфатов) у возбудителя дифтерии (C. diphtheriae), у которого эти включения располагаются по полюсам клетки. Фиксированный мазок окрашивают уксусно-кислым метиленовым синим в течение 3-5 минут. Зерна волютина обладают свойством метахромазии и более интенсивно накапливают краситель – цитоплазма бактерий окрашена в голубой цвет, зерна волютина – в темно-синиий.
Метод Нейссера. Относится к сложным методам и используется наряду с методом Леффлера для выявления зерен волютина.
1. На фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера (уксуснокислый раствор метиленового синего) на 1-2 мин.
2. Добавить раствор Люголя на 30 секунд и промыть водой.
3. Нанести водный раствор везувина или хризоидина на 1 минуту.
Зерна волютина имеют в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию и избирательно воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет (метахромазия).
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 566; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!