Механизмы окрасок по Граму и Цилю-Нильсену
Метод Грама. Относится к сложным методам окраски и позволяет дифференцировать грамположительные и грамотрицательные бактерии, что является важным таксономическим признаком. Результат окраски определяется особенностями строения клеточной стенки бактерий. При окраске генцианвиолетом и последующем воздействии раствора Люголя образуется комплексное соединение генцианвиолета и йода с пептидогликаном, которое при обработке спиртом удерживается в клетках грамположительных бактерий, имеющий многослойный пептидогликан и вымывается из грамотрицательных бактерий, имеющих тонкий слой пептидогликана. При дополнительной окраске водным раствором фуксина грамотрицательные бактерии приобретают красный цвет.
Таблица 4. Метод Грама
| Этапы окраски | Цвет бактерий |
| 1. На фиксированный мазок поместить фильтровальную бумажку, пропитанную генцианвиолетом, смочить водой, 2-3 минуты | Все бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет |
| 2. Снять бумажку, слить с препарата оставшуюся краску и налить раствор Люголя на 1 минуту | Все бактерии остаются фиолетовыми |
| 3. Для дифференцирования нанести на мазок этиловый спирт в течение 3-6 с, промыть водой | Грамположительные бактерии остаются фиолетовыми, грамотрицательные обесцвечиваются |
| 4. Нанести фуксин Пффейфера (водный раствор фуксина) на 1-2 мин, промыть водой, высушить | Грамположительные остаются фиолетовыми, грамотрицательные окрашиваются в красный цвет |
Метод Циля-Нильсена.Относится к сложным методам окраски и позволяет дифференцировать кислотоустойчивые и некислотоустойчивые бактерии.
|
|
|
Таблица 5. Метод Циля-Нильсена
| Этапы окраски | Цвет бактерий |
| 1. На фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина Циля через полоску фильтровальной бумаги и подогреть препарат в пламени горелки до появления паров (повторить 3-4 раза) | Все бактерии окрашиваются в красный цвет |
| 2. Снять бумагу, промыть мазок водой | Все бактерии остаются красными |
| 3. Для дифференцирования нанести 5% раствор серной кислоты на 1-2 минуты | Кислотоустойчивые бактерии остаются красными, некислотоустойчивые обесцвечиваются |
| 4. Нанести водный раствор метиленового синего и докрасить 3-5 мин, промыть водой, высушить | Кислотоустойчивые остаются красными, некислотоустойчивые окрашиваются в синий цвет |
Кислотоустойчивые бактерии имеют особое строение клеточной стенки, содержащей большое количество сложных липидов (миколовая и фтиоловая кислоты, воск D, глико- и фосфолипиды), что делает эти бактерии кислото-, щелоче- и спиртоустойчивыми. Клеточная стенка этих бактерий плохо воспринимает анилиновые красители и обычные способы окраски. Высокая температура в процессе окраски методом Циля-Нильсена расплавляет липиды, фенол разрыхляет клеточную стенку и краситель проникает внутрь клетки. После остывания препарата липиды вновь затвердевают, прочно удерживая краситель, поэтому кислотоустойчивые бактерии не обесцвечиваются серной кислотой и остаются красными. Некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и их докрашивают контрастным красителем – метиленовым синим. В основном, метод используется для окраски бактерий, относящихся к роду Mycobacterium (M. tuberculosis, M. bovis, M. leprae и др.)
|
|
|
III. План практической работы
1. Изучить механизм и этапы окраски по Граму, приготовить мазок из смеси бактерий и окрасить по Граму, заполнить таблицу в рабочей тетради.
2. Изучить механизм и этапы окраски по Цилю-Нильсену, приготовить мазок из сапрофитных микобактерий, окрасить по Цилю-Нильсену, заполнить таблицу в рабочей тетради.
3. Сравнить строение прокариотической и эукариотической клетки по ряду признаков, заполнить таблицу в рабочей тетради.
4. Изучить и перечислить в таблице основные таксономические категории на примере C. tetani и T. pallidum или других бактерий.
|
|
|
IV. Примеры ситуационных задач
Ситуационная задача № 1
Из мокроты больного приготовлен мазок и окрашен по методу Циля-Нильсена. При микроскопии с масляной иммерсией обнаружены длинные палочки, располагающиеся одиночно и окрашенные в красный цвет. Сформулируйте заключение микроскопического исследования:
1. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы рода Mycobacterium
2. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы Staphylococcus
3. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы Streptococcus
4. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae
Ситуационная задача № 2
Из гноя больного приготовлен мазок и окрашен по методу Грама. При микроскопии с масляной иммерсией обнаружены кокки (шаровидные бактерии), располагающиеся в виде гроздьев винограда и окрашенные в фиолетовый цвет. Сформулируйте заключение микроскопического исследования:
1. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы рода Mycobacterium
2. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы рода Staphylococcus
3. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы рода Streptococcus
4. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae
Ситуационная задача № 3
|
|
|
Из фекалий больного приготовлен мазок и окрашен по методу Грама. При микроскопии с иммерсией обнаружены одиночные палочки, окрашенные в красный цвет. Сформулируйте заключение микроскопического исследования:
1. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы рода Mycobacterium
2. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы рода Staphylococcus
3. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы рода Streptococcus
4. В исследуемом материале обнаружены микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 531; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!