Определение белка по методу Бредфорда
Метод основан на образовании окрашенного в синий цвет комплекса красителя кумасси ярко - голубого G-250 с белком.
0,1 мл раствора препарата, содержащего 0,01-0,10 мг испытуемого белка, помещают в пробирку, прибавляют 5 мл реактива Бредфорд, перемешивают и оставляют при комнатной температуре в течение одинакового времени в интервале от 2 до 60 мин. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре при длине волны 595 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь этих же реактивов без препарата.
Калибровочный график строят в пределах концентраций от 0,01 до 0,10 мг стандартного образца белка, измеряя оптическую плотность растворов при 595 нм
Анализ результатов
Калибровочная кривая для определения белка методом Лоури
Оптическая плотность, полученная при измерении активности каталазы
| опыт | контроль |
| 0,0930 | 0,4052 |
| 0,0872 | 0,4222 |
| 0,0875 | 0,4485 |
| 0,1008 | 0,4603 |
| 0,0612 | 0,4607 |
Оптическая плотность, полученная при измерении активности СОД
| Контроль1 | 0,7541 |
| Контроль2 | 0,7720 |
| 1 | 0,6671 |
| 2 | 0,5281 |
| 3 | 0,5538 |
| 4 | 0,5931 |
| 5 | 0,6732 |
Оптическая плотность, полученная при измерении концентрации МДА
| 1 | 0,2178 |
| 2 | 0,2463 |
| 3 | 0,3416 |
| 4 | 0,3204 |
| 5 | 0,3418 |
Список использованных источников
Досон Р. и др., Справочник биохимика. — М.: Мир, 1991.
|
|
|
Lowry O.H. et. al. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. – 1951. – v. 193. – P. 265-275
Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы.// Лабораторное дело. - 1988. - № 1. - С. 16-19.
Сирота Т. В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использования его для измерения активности супероксиддисмутазы.// Вопросы медицинской химии. – 1999. - №3.
Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитутовой кислоты // Современные методы в биохимии/ под ред. Ореховича В.Н. - М.: Медицина, 1977.- С. 66-68.
Дата добавления: 2019-07-17; просмотров: 673; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!