Фиксация и окрашивание мазков пунктата костного мозга
3.2.1 Общие правила фиксации и окрашивания мазков пунктата костного мозга:
- из доставленного в лабораторию пунктата с антикоагулянтом немедленно готовят 10-12 мазков; 20 мкл пунктата смешивают с 0,4 мл 3,5% раствора уксусной кислоты;
- из полученных или приготовленных непосредственно в лаборатории 10-12 мазков для цитологического исследования отбирают 3, их фиксируют, окрашивают и исследуют.
П р и м е ч а н и е ¾ Оставшиеся препараты предназначены для консультации у профильного специалиста в случае диагностических затруднений или, при наличии более 10% бластов, - для проведения цитохимических исследований в гематологической лаборатории. Эти препараты, нефиксированные и некрашеные, хранят при комнатной температуре не более 1.5 мес. При отсутствии необходимости в консультации или в цитохимическом исследовании, а особенно у первичных пациентов или при низкой клеточности пунктата, дополнительно обрабатывают и изучают все оставшиеся мазки.
- фиксация и окрашивание мазков пунктата костного мозга может выполняться вручную или автоматически с помощью специальных устройств, в которые загружаются нефиксированные мазки. Последующее автоматическое дозирование фиксатора-красителя и буферных растворов обеспечивает стандартную и равномерную окраску;
- вручную фиксация и окрашивание мазков пунктата костного мозга проводится аналогично фиксации и окрашиванию препаратов периферической крови.
|
|
- применение любой методики фиксации и окрашивания мазков требует точного соблюдения последовательности процедур при приготовлении растворов и временных промежутков в течение процесса фиксации и окрашивания.
Фиксация мазков выполняется либо как предварительный этап перед окрашиванием, либо одновременно с окрашиванием, если по технологии используются растворы готовых панхромных красителей.
Подготовительная работа для выполнения фиксации и окрашивания мазков состоит: в приготовлении буферного раствора, основных и рабочих растворов красителей, подготовке оборудования.
3.2.2 Методика фиксации и окрашивания мазков пунктата костного мозга по Нохту[3]
Для фиксации и окрашивания мазков необходимо приготовить следующие реактивы:
а) приготовление фосфатного буфера (рН 7,0). Для приготовления основного раствора фосфатного буфера необходимо приготовить навески следующих солей:
КН2РО4 (однозамещенного, безводного) - 0,49 г;
Nа2 НРО4 (двузамещенного, безводного) - 0,909 г;
Навески солей растворяют в дистиллированной воде, в объеме до 1000 мл.
П р и м е ч а н и е ¾ Для приготовления буферного раствора (рН 7,0) допустимо использование готовых форм (смеси фосфатных солей в виде таблеток, навесок).
|
|
б) приготовление основных и рабочего растворов красителей:
1) основной раствор азура ІІ: 1г краски растворяют в 1л дистиллированной воды. Оставляют в посуде из темного стекла на 12 -14 дней при комнатной температуре или в термостате при 37о С на 6-8 дней;
2) основной раствор эозина калия: 1г краски растворяют в 1л дистиллированной воды. Оставляют в посуде из темного стекла на 12 -14 дней при комнатной температуре или в термостате при 37о С на 6-8 дней;
3) рабочий раствор азур-эозина: перед окрашиванием мазков смешивают с 25 мл основного раствора азура ІІ, 20 мл основного раствора эозина калия и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут варьировать, их устанавливают опытным путем при приготовлении свежих основных растворов.
в) приготовление смеси Никифорова:
- смесь Никифорова готовится из этилового спирта (40 мл) и диэтилового эфира (40 мл) в пропорции 1:1. Смесь используется: для хранения чистых предметных стекол.
Фиксация мазков[4]
Реактив (краситель-фиксатор): раствор эозин-метиленового синего по Май-Грюнвальду или по Лейшману.
Оборудование: кювета для фиксации и окраски мазков со штативом-контейнером (или широкогорлая посуда с притертой пробкой).
|
|
Последовательность процедур:
- мазки помещают в штатив-контейнер и опускают его в кювету с фиксатором на 5мин.;
- вынимают контейнер из фиксирующего раствора.
Окрашивание мазков.
Оборудование:
- кювета для окраски мазков со штативом-контейнером (или лотки со специальными «рельсами» для окраски мазков);
- химические стаканы низкие (для разведения красителей).
Реактивы:
- рабочий раствор азур–эозина;
Последовательность процедур:
- контейнер с фиксированными мазками переносят в кювету с рабочим раствором красителя (или фиксированные мазки располагают горизонтально на специальные рельсы и наливают по 3-4 мл красителя на каждый из препаратов), на 20 - 45 минут [5];
- смывают краску водопроводной водой;
- окрашенные и промытые мазки высушивают на воздухе в течение 15 –20 минут.
4.2.3 Методика окрашивания мазков пунктата костного мозга по Паппенгейму[6] [6].
Реактивы:
- раствор фиксатора-красителя по Май–Грюнвальду;
-раствор азур-эозина по Нохту или готовый краситель Романовского–Гимзы, разведенный фосфатным буфером в 10 - 20 раз;
Последовательность процедур:
- сухие нефиксированные мазки аккуратно помещают в штатив-контейнер для окраски мазков или располагают горизонтально на специальные рельсы;
|
|
- штатив-контейнер опускают в кювету с раствором фиксатора-красителя на 3 - 5 минут, или наливают по 3 - 4 мл фиксатора-красителя на каждый из препаратов, находящихся на рельсах;
- контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой в течение 1 минуты или на мазок, не сливая фиксатор-краситель, добавляют дистиллированную воду на 1 мин;
- помещают контейнер с мазками в кювету с рабочим раствором азур-эозиновой краски по Нохту (или по Романовскому-Гимзе) на 8 -10 минут или наливают краситель на мазки, находящиеся на рельсах;
- смывают краску водопроводной водой, мазки высушивают.
Дата добавления: 2019-07-17; просмотров: 264; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!