Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
ИНФЕКЦИЯ (от лат. infectio – заражение) – представляет собой сложный патофизиологический процесс взаимодействия микро- и макроорганизма, происходящий при определенных условиях внешней и социальной среды.
Результат взаимоотношений между макро- и микроорганизмом в виде адаптационных и патологических реакций – суть инфекционного процесса, наиболее выраженной формой которого является инфекционная болезнь.
Выделяют три основных фактора инфекционного процесса:
• возбудитель (количественные и качественные характеристики микробов-возбудителей);
• организм человека (его состояние и степень восприимчивости к микробам);
• окружающая среда (физические, химические и биологические факторы окружающей микроб и макроорганизм внешней среды; для человека особое значение имеют социальные условия его жизнедеятельности).
Классификации инфекций
По кратности заражения:
• инфекция с однократным заражением организма
• суперинфекция – заражение тем же или другим микробом, но до выздоровления.
• реинфекция – заражение тем же микроорганизмом, но после выздоровления.
• рецидив – возврат клинических проявлений болезни без повторного заражения за счет оставшихся в организме возбудителей (остеомиелит, возвратный тиф). По числу возбудителей:
• моноинфекция
• смешанная инфекция
По этиологическому фактору
· бактериальные инфекции
· вирусные инфекции
|
|
|
· грибковые инфекции (микозы)
По длительности – острая и хроническая.
По степени распространения – локальная и генерализованная
По выраженности – манифестная и инаппарантная
По источнику – антропонозы; зоонозы; сапронозы. Особое место занимают инфекции, связанные с оказанием медицинской помощи (ИСМП).
По пути проникновения: • экзогенная • эндогенная
Классификация микроорганизмов по патогенности:
• Не патогенные (сапрофиты).
• Условно-патогенные (оппортунистические): вызывают заболевания при определенных условиях: а. При попадании в атипичные для них условия обитания (например, транслокация из кишечника в кровоток); б. Снижение иммунобиологической реактивности человека.
• Патогенные. Инфекционное заболевание возникает не при каждом попадании патогенного микроорганизма в организм человека.
Необходимы: - достаточная доза микроорганизмов (понятие о критических дозах). Чума - несколько бактериальных клеток, дизентерия – десятки, для некоторых инфекций – тысячи и сотни тысяч;
- естественный путь проникновения. Существует понятие о входных воротах инфекции, различных для различных групп инфекций – раневых, респираторных, кишечных, урогенитальных с различными механизмами заражения (глаза, кожа, дыхательные пути, желудочно-кишечный тракт, мочеполовая система и др.).
|
|
|
Патогенность (от греч. πάθος - страдание, болезнь и γένεσις - первоисточник) – это способность микроорганизмов, попадая в макроорганизм, вызывать в его тканях и органах патологические изменения. Это качественный видовой признак, детерминированный генами патогенности – вирулонами. Они могут локализоваться в хромосомах, плазмидах, транспозонах.
Вирулентность (от лат. virulentus - ядовитый) – фенотипическое количественное выражение патогенности (степень патогенности). Вирулентность может варьировать и может быть определена лабораторными методами (чаще DL50 - 50% летальная доза - количество патогенных микроорганизмов, позволяющая вызвать гибель 50% зараженных животных).
Серологические реакции, основанные на
использовании меток
Методы иммунного анализа широко вошли в медицинскую практику.
Особенно важно, что они дают возможность идентифицировать
биологические компоненты (гормоны, ферменты, нейропептиды,
продукты иммунной системы, антигены и т.д.) в низких и очень низких
концентрациях. Все продукты, против которых возможно получение антител,
|
|
|
выявляются этими методами.
Иммунный анализ основывается на взаимодействии антигена (АГ) и
антитела (АТ) с использованием различных вариантов мечения одного из
компонентов (фермент, радионуклид, флуоресцентный краситель и другие).
Оценка реакции проводится автоматически на специальной аппаратуре, что
позволяет стандартизировать эти методы.
В зависимости от типа используемой метки и условий постановки теста
иммунный анализ обозначается как иммуноферментный (ИФА),
радиоиммунный (РИА), иммунофлуоресцентный. При постановке реакций в
один или несколько этапов они обозначаются как прямые или непрямые.
Имеет значение среда, в которой проводится реакция. Если реакция
проводится с реагентами, фиксированными на поверхности, то тест
обозначается как твердофазный.
Серологические реакции, основанные на
использовании меток
МЕТКИ
•Ферментные
•Флюоресцирующие
•Радиоизотопные
МЕТКА
1. Фермент
2. Радиоизотоп
3. Флюорохром
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Впервые предложена Coombs в 1942 г. Популярность РИФ сегодня
объясняется экономичностью, наличием широкого спектра диагностических
наборов, быстротой получения ответа. Учет результатов реакции
|
|
|
осуществляется с помощью люминесцентного микроскопа, в оптическую
систему которого устанавливается набор светофильтров, обеспечивающих
освещение препарата ультрафиолетовым или сине-фиолетовым светом с
заданной длинной волны. Исследователь оценивает характер свечения, форму,
размер объектов и их взаимное расположение.
Прямой метод РИФ – выявление специфических
антигенов – основан на непосредственном соединении
антигенов со специфическими антителами (из
диагностических сывороток), мечеными флуоресцентным
красителем (ФИТЦ – флюоресцеина изотиоцианат).
Чаще всего РИФ используют для быстрого обнаружения возбудителя в
патологическом материале. В этом случае из исследуемого материала готовят
мазок на предметном стекле, как для обычной микроскопии. Препарат
фиксируют метиловым спиртом, ацетоном или другим химическим
фиксатором. На поверхность фиксированного мазка наносят меченные ФИТЦ
сыворотки или моноклональные антитела.
В последнее время для этой цели применяют РНИФ: фиксированный
мазок сначала обрабатывают диагностической сывороткой против искомых
антигенов (чаще кроличьей), а затем – мечеными антителами к
иммуноглобулинам кролика, использованным на первом этапе.
Непрямой метод (РНИФ) – выявление специфических
антител – двухэтапный:
1. Образование комплекса антиген-антитело;
2. Выявление этого комплекса путем обработки его
антиглобулинами, меченными флуоресцентным
красителем (АТ к АТ).
При постановке РНИФ для обнаружения антител в сыворотке больного
готовят мазки из эталонного штамма возбудителя (диагностикума).
Исследуемую сыворотку наносят на мазок. Если в ней присутствуют искомые
антитела, то они связываются с антигенами микробных клеток. Промывка
препарата буферным раствором позволяет удалить несвязавшиеся антитела.
Затем препарат обрабатывают меченой сывороткой против
иммуноглобулинов человека. В случае положительного результата реакции
при микроскопии мазка в люминесцентном микроскопе наблюдают
специфическое свечение эталонной культуры.
Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 250; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!