Определение бактерий рода Salmonella

Этап 1. Предварительное обогащение в неселективной среде.

Навеску исследуемого продукта 25 г или 10 г помещают в забуференную пептонную воду, исходя из разведения 1:10.

5.7.1. Специфичность приготовления исходной суспензии для некоторых продуктов:

Для какао и какао содержащих продуктов (массовая доля какао более 20%) забуференную пептонную воду готовят с добавлением 100 г/л обезжиренного молочного порошка (перед стерилизацией). Если пищевые продукты предположительно содержат большое количество грамположительных микроорганизмов, прибавляют после 2ч инкубирования раствор бриллиантового зеленого 0,9 мл на 250мл инокулята. Раствор бриллиантового зеленого следующего состава: бриллиантовый зеленый - 0,5 г и вода 100мл.

Кислые и кислотосодержащие пищевые продукты

При селективном обогащении рН не должна быть ниже 4,5. В случае кислых и кислотосодержащих продуктов рН стабилизируют путем использования забуференной пептонной воды двойной концентрации.

5.7.2. Инкубируют исходную суспензию при температуре (37±1)^о С в течение (18±2) ч.

Этап 2. Селективное обогащение.

5.7.3. Культуры, полученные после инкубирования персевают в среды селективного обогащения.

5.7.4. 1 мл культуры пересевают в 10 мл RVS среды и инкубируют при температуре (37±1)^о С в течение (24±3) ч.

5.7.5. 1 мл культуры пересевают в 10 мл тетратионатного бульона Мюллер-Кауфмана и инкубируют при температуре (41,5±1,0)^о С в течение (24±3) ч (следят за тем, чтобы температура не превышала 42,5^о С).

Этап 3. Пересев на чашки.

5.7.6. Культуры, полученные после инкубирования на селективных средах персевают так, чтобы получить хорошо изолированные колонии, на агаризованные среды XLD, Hectoen. Чашки переворачивают вверх дном и помещают в термостат при температуре (37±1)^о С, время инкубации - (24±3) ч.

Этап 4. Идентификация выделенных культур.

5.7.7. После инкубирования просматривают чашки и отмечают присутствие колоний бактерий рода Salmonella типичных и не совсем типичных. Отмечают их местоположение на дне чашки.

Типичные колонии бактерий рода Salmonella, вырастающие на XLD-агаре, имеют черный центр и слегка прозрачную зону красного цвета.

Бактерии рода Salmonella сероводород-отрицательные образуют на на XLD-агаре розовые колонии с темным розовым центром. Лактозоположительные бактерии рода Salmonella на на XLD-агаре образуют желтые колонии с почернением и без него.

На среде Hectoen бактерии рода Salmonella образуют красноватые или розовые

Отсутствие в посевах на селективно-диагностических средах типичных колоний для бактерий рода Salmonella свидетельствует об отсутствии бактерий рода Salmonella в анализируемой навеске (объеме) продукта.

При наличии хотя бы на одной селективно-диагностической среде типичных или не совсем типичных колоний для бактерий рода Salmonella проводят дальнейшую идентификацию.

5.7.8. Для идентификации берут с каждой чашки каждой селективной среды сначала одну колонию типичную или не совсем типичную, а затем четыре колонии, если первая окажется отрицательной. В случае эпидимической ситуации - брать сразу пять колоний. Отобранные (полностью изолированные колонии) колонии переносят в чашки с предварительно подсушенным ГРМ-агаром и инкубируют при температуре (37±1)^о С в течение (24±3) ч.

5.7.9. Окраска по Грамму

Из отобранных колоний готовят мазки и окрашивают по Граму. Бактерии рода Salmonella являются грамотрицательными палочками с закругленными концами.

Определение дрожжей и плесневых грибов

Приготовление питательных сред

Питательные среды с антибиотиками готовить непосредственно перед использованием путем добавления к расплавленной и охлажденной до 45^оС основе среды антибиотиков. В качестве основы среды использовать среду № 2.

- Среда агаризованная с левомицетином: к 1 л основы добавить 2 мл раствора левомицетина сукцината с массовой концентрацией 50 г/л.

- Среда агаризованная с окситетрациклином: к 900 мл основы добавить 100 мл раствора окситетрациклина дигидрата с массовой концентрацией 1 г/л.

- Среда агаризованная с окситетрациклином и гентамицином: к 895 мл основы добавить 1 мл раствора пенициллина с массовой концентрацией 50000 ЕД и 0,4 мл раствора стрептомицина с массовой концентрацией 100 г/л.

- Среда агаризованная с пенициллином и стрептомицином: к 1 л основы добавить 100 мл раствора окситетрациклина дигидрата с массовой концентрацией 1 г/л и 5 мл раствора гентамицина с массовой концентрацией 10 г/л.

- Среда агаризованная с неомицином сульфатом: к 1 л основы добавить 7 мл раствора неомицина сульфата с массовой концентрацией 50 г/л.

- Солодовое агаризованное сусло приготовить по ГОСТ 10444.1.

Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 145; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 1 234 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!