Нанесение пробы и получение хроматограмм
Нанесение пробы в виде раствора на пластинку проще всего осуществить при помощи капилляра. Объем раствора составляет от 0,5 до 5 мкл. Каплю раствора наносят на расстоянии 1-2 см от края пластинки.
Для качественного анализа диаметр образовавшегося пятна раствора не должен превышать 5 мм, для количественного он должен быть еще меньше. После нанесения капли раствора необходимо полностью испарить растворитель.
Для получения хроматограммы необходимо обеспечить движение подвижной фазы вдоль пластинки. Для этого пластинку помещают в закрытую хроматографическую камеру (рис.). На дно камеры наливают немного растворителя - подвижной фазы и насыщают ее парами. При установке пластинки необходимо следить, чтобы пятно пробы не касалось жидкого слоя растворителя. Под действием капиллярных сил растворитель начинает перемешаться вверх по пластинке. После того, как растворитель пройдет примерно две трети длины пластинки, пластинку вынимают из камеры. На этом получение хроматограммы заканчивается. После этого растворитель высушивают и детектируют пятна компонентов пробы.
Детектирование
В ходе предварительных, обзорных, анализов, как правило, ограничиваются визуальным детектированием с целью идентификации компонентов смеси. Для определения положения пятен компонентов пробы пластинку опрыскивают раствором группового или селективного реагента, образующего с соединениями определенных классов окрашенные продукты.
|
|
|
Идентификацию вещества на основании положения его пятна можно осуществить очень легко, если одновременно с пробой на той же пластинке для сравнения провести хроматографирование индивидуальных предполагаемых веществ. При этом в случае использования проявляющих реактивов должны совпасть не только положения пятен, но и их окраска.
Величина R f
Для характеристики удерживания веществ на внутренних хроматограммах, к которым принадлежат тонкослойные, используются специальные параметры. Основным является кеоэффициент удерживания, обозначаемый (и чаще всего так и называемый) Rf. Он представляет собой отношение расстояний, пройденных на пластинке данным веществом (zR) и фронтом подвижной фазы (zM; рис.):
Для симметричных пятен ZR находят по положению центра пятна, для несимметричных - по положению максимума интенсивности.
Количественный анализ проводят по площади пятна или с использованием инструментальных методов. Среди инструментальных методов детектирования преобладает измерение интенсивности локального диффузного отражения света в УФ- или видимой области. Предназначенный для этого прибор называется денситометром или сканнером. Кроме того, можно послойно снимать носитель с пластинки и анализировать его отдельные порции обычными методами химического анализа, например, спектроскопическими.
|
|
|
Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 144; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!