Качественный и количественный анализ в плоскостной хроматографии
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Метод колоночной хроматографии был предложен в 1906 году русским ботаником Михаилом Цветом. Используя колонку, заполненную тонкодисперсным порошком карбоната кальция, и петролейный эфир, он сумел разделить окрашенные компоненты (хлорофилл и ксантофилл спириллоксантин) экстракта листьев растений. При этом он наблюдал на колонке окрашенные зоны компонентов и поэтому назвал метод хроматографией (дословно цветопись - от греческих слов «хрома» - цвет и «графо» - «Пишу»).
Общий обзор
В основе хроматографии лежит процесс распределения разделяемых компонентов или сорбатов между двумя несмешивающимися фазами. Одна из этих фаз является неподвижной, другая – подвижной. Пробу вводят в подвижную фазу, которой может быть жидкость, газ или сверхкритический флюид. Подвижная фаза движется относительно неподвижной фазы. Неподвижная фаза может быть твердой или жидкой. Во втором случае она нанесена на твердый носитель. В табл. приведена классификация методов хроматографии в соответствии с природой подвижной и неподвижной фаз.
Неподвижная фаза может находиться в колонке или в плоском тонком слое. В зависимости от этого различают колоночную или плоскостную хроматографию.
Подвижная фаза перемещает разделяемые компоненты вдоль неподвижной фазы. Разделение происходит в результате различного сродства разделяемых компонентов к твердой фазе. Механизм взаимодействия разделяемых компонентов с неподвижной фазой может быть различный: сорбционный, распределительный (основанный на различной растворимости компонентов в жидкой фазе), ионообменный, эксклюзионный (основанный на различных размерах и формах определяемых компонентов) и т.д.
|
|
|
Получение хроматограмм
В зависимости от способа регистрации различают внутренние и внешние хроматограммы. При внутреннем способе регистрации компоненты анализируемой смеси за одно и то же время проходят различные расстояния. По окончании процесса разделения все они находятся внутри разделяющего устройства и там детектируются. Этот способ регистрации характерен для плоскостной хроматографии.
Внешние хроматограммы регистрируют в кoлоночной хроматографии. Здесь все компоненты проходят одно и то же расстояние и регистрируются на выходе из колонки. Ввиду различного сродства компонентов пробы к неподвижной фазе их времена выхода оказываются различными.
Качественный и количественный анализ в колоночной хроматографии
Выходная кривая хроматографического анализа называется хроматограмма. Хроматограмма представляет собой зависимость сигнала детектора от времени ввода пробы в хроматографическую колонку. На рис. 1 показана упрощенная хроматограмма двухкомпонентной смеси (компоненты А и В).
|
|
|
Отделившиеся от других компоненты разделяемой смеси выходят из колонки и проходят детектор относительно узкой полосой, в центре которой концентрация компонента максимальна, а по краям – минимальна. Поэтому на хроматограмме выходу каждого отдельного компонента из колонки соответствует хроматографический пик.
Каждый пик характеризуется во-первых, временем удерживания 
, соответствующим наибольшей концентрации компонента, т.е. наибольшему сигналу от детектора и, во-вторых, площадью. Время удерживания используется для качественного анализа.
Площадь пика пропорциональна массе компонента. Поэтому для количественного анализа используют значения площадей пиков на хроматограмме, либо величины, пропорциональные площади пика – например, высоты. В количественном хроматографическом анализе широко применяют метод градуировочного графика. Градуировочный график строят в координатах площадь (высота) пика – масса или концентрация аналита. Косвенные способы определения концентрации (титрование) не используют.
|
|
|
Качественный и количественный анализ в плоскостной хроматографии
К плоскостным методам относятся бумажная и тонкослойная хроматографии. Плоский носитель неподвижной фазы может использоваться непосредственно (полоска бумаги в бумажной хроматографии) или быть нанесен в виде тонкого слоя на пластинку (из стекла, пластмассы, металла). Движение подвижной фазы может обеспечиваться капиллярными или гравитационными силами.
Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 328; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!