Типы дыхания бактерий и особенности культивирования анаэробов.
По отношению к кислороду, а также по использованию его в процессах получения энергии микроорганизмы подразделяются на 3 группы: облигатные аэробы, облигатные анаэробы, факультативные анаэробы.
Облигатные аэробы растут и размножаются только в кислородной среде, используя его для получения энергии путем кислородного дыхания.
Энергию они получают оксидативным матаболизмом, используя кислород как терминальный акцептор электронов в реакции, катализируемой цитохромоксидазой. Облигатные анаэробы подразделяются на строгие аэробы, которые растут при парциальном давлении атмосферы воздуха, и микроаэрофилы, которые, используя кислород в процессах получения энергии, растут при его пониженном давлении.
Облигатные анаэробы – не используют кислород для получения энергии.
Облигатные анаэробы делятся на две группы: строгие анаэробы и аэротолерантные. Строгие анаэробы характеризуются тем, что молекулярный кислород для них токсичен: он убивает микроорганизмы или ограничивает их рост. Энергию строгие анаэробы получают маслянокислым брожжением. (некоторые клостридии)
Аэротолерантные анаэробы не используют кислород для получения энергии, но могут существовать в его атмосфере (молочнокислые бактерии).
Факультативные анаэробы способны расти и размножаться как при наличии кислорода, так и в его отсутствии. Они обладают смешанным типом метаболизма. Процесс получения энергии у них может происходить кислородным дыханием при наличии кислорода, а в его отсутствии переключаться на брожение. Для этой группы бактерий характерно наличие некислородного нитратного дыхания.
|
|
|
Для культивирования факультативных анаэробов используют те же методы, что и при культивировании аэробов.
Облигатные анаэробы для своего роста и размножения требуют исключения доступа кислорода воздуха. Это достигается следующими методами:
· Добавлением к питательным средам редуцирующих кислород веществ (тиогликолевой кислоты, аскорбиновой кислоты, цистеина, сульфидов)
· Путем кипячения (освобождение от кислорода воздуха) жидких питательных сред с последующим плотным закупориванием резиновыми пробками сосудов со средами.
· Использование поглотителей кислорода (щелочного пирогаллоза и др), помещая их в герметически закрываемые емкости «газ-паки». Этот метод используется для культивирования аэротолерантных бактерий.
· Механическим удалением кислорода воздуха с последующим заполнением емкости инертным газом (для этих целей используют анаэростаты и анаэробные боксы)
Методы выделения культур, основанных на принципах разобщения микробных клеток и на биологических признаках.
|
|
|
Методы выделения чистых культур аэробных микроорганизмов подразделяются на 2 группы:
а) методы, основанные на принципе механического разобщения микроорганизмов:
· посев по методу Дригальского осуществляется шпателем последовательно на 3 чашки с МПА. В зависимости от содержания микробных клеток в исследуемом материале, на одной из чашек вырастают отдельные колонии, используемые для выделения чистой культуры микроорганизма;
· рассев петлей (посев штрихами).По Коху. Исследуемый материал петлей засевают последовательно на 4 сектора МПА в чашке Петри, проводя петлей параллельные линии на расстоянии 5 мм одна от другой. На секторах с небольшим количеством клеток вырастают отдельные колонии, описываемые согласно таблице.
-серийные разведения в жидкой питательной среде (метод Пастера)
- метод фильтрации (для очистки вирусов от бактерий и получения фагов и токсинов)
б) методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов:
· метод фильтрации основан на разделении микроорганизмов по величине путем пропускания исследуемого материала через специальные (миллипоровые) фильтры с определенным диаметром пор;
|
|
|
· методы, основанные на «ползучих» свойствах микроорганизмов, например, метод Шукевича для выделения чистой культуры протея. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного МПА, из которой протей как бы «вползает» на его поверхность;
· метод прогревания, позволяющий отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм. Для этого исследуемый материал прогревают на водяной бане при 800 С 10-15 мин., при этом вегетативные формы погибают, а споры сохраняются и прорастают;
· бактериостатический метод (метод ингибирования роста бактерий определенными химическими веществами или антибиотиками). Например, небольшие концентрации пенициллина задерживают рост грамположительных микроорганизмов, но не влияют на грамотрицательные. Смесь пенициллина и стрептомицина позволяет освободить грибы от бактериальной флоры, а нистатин ингибирует грибы, но не влияет на бактерии;
· метод обогащения - посев исследуемого материала засевают на элективные питательные среды, предназначенные для выделения определенного вида микроорганизмов;
· метод заражения чувствительных видов лабораторных животных или растений для выделения облигатных патогенных микроорганизмов. После появления у зараженных животных признаков болезни их умерщвляют и производят посев органов и тканей на питательные среды с целью выделения чистой культуры микроорганизмов.
Дата добавления: 2019-03-09; просмотров: 821; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!