Гормоны фетоплацентарного комплекса.
Во взаимоотношениях между организмами матери и плода плацента выполняет роль железы внутренней секреции. В ней происходят процессы синтеза, секреции и превращения ряда гормонов белковой и стероидной структуры. Местом продукции плацентарных гормонов являются синцитио - и цитотрофобласт, а также децидуальная ткань.
Из числа гормонов белковой природы в плаценте обнаружены тиреотропин, адренокортикотропный гормон (АКТГ), меланостимулирующий гормон, релаксин, лютеинизирующий рилизинг-гормон, соматостатин. Плацента синтезирует хорионический гонадотропин, плацентарный лактоген и пролактин, а также иммунореактивный эндорфин, меланоцитстимулирующий гормон и пропиомелакортин. Из гормонов стероидной природы синтезируются гестагены и эстрогены.
Физиологическая роль ряда гормонов плаценты еще не изучена полностью, однако уровень их значительно выше в тканях трофобласта, чем в децидуальной ткани. Относительно соматостатина плаценты известно, что он идентичен таковым других тканей и сходен с ним по структуре. Оказывая локальное воздействие на трофобласт, регулирует секрецию плацентарного лактогена.
Белковые гормоны:
1. хорионический гонадотропин
2. плацентарный лактоген
3. пролактин
Синтезируются в синцитиотрофобласте и в больших количествах поступают в материнскую кровь.
Эти гормоны относятся к группе гормонов - протекторов беременности.
|
|
|
Хорионический гонадотропин - э то основной белковый гормон беременности, близок к лютеинизирующему гормону. Он выявляется в крови беременных уже в момент прохождения бластоцисты по маточной трубе, то есть еще до имплантации. На этом основывается тест на беременность. Пик секреции этого гормона приходится на 7-16 неделю беременности (поддерживает функцию желтого тела в яичнике), на 34 неделе – активно стимулирует надпочечники плода.
Функции хорионического гонадотропина:
· Обеспечение адаптации организма женщины к беременности
· Ингибирует иммунологические реакции отторжения плодного яйца (то есть обеспечивает толерантностьть)
· Снижает сократительную активность миометрия (стимулирует желтое тело к синтезу прогестерона)
· Обеспечивает правильное формирование половых желез у плода
· Плацентарный лактоген.
· Выявляется в крови с 5-6 недели беременности, уровень его повышается до 37 недели.
Функции плацентарного лактогена
· Лютеотропное действие (стимулирует синтез половых гормонов в желтом теле)
· Снижает сократимость матки
· Лактогенное действие (подготавливает молочные железы к лактации)
· Липолитическое действие (обеспечивает высокий уровень свободных жирных кислот)
|
|
|
· Диабетогенное действие
· Стимулирует синтез белка
Таким образом, он влияет на все виды обмена веществ и от его уровня зависит масса плода.
Пролактин. Функции:
· Участвует в фетоплацентарной осморегуляции
· Участвует в продукции и созревании легочного сурфактанта.
Стероидные гормоны:
· прогестерон
· эстрогены
Прогестерон. Пик секреции приходится на 16 неделю, затем его уровень повышается до 37 недели, а затем падает. Функции:
· Повышает активность бетта-адренорецепторов
· Снижает активность альфа-адренорецепторов
· Обеспечивает децидуальные превращения миометрия и обеспечивает имплантацию
· Снижает сократительную активность матки
· Вызывает гиперполяризацию мембран.
Эстрогены.
· эстрадиол
· эстрон
· эстриол
Синтезируются эстрогены из предшественника холестерина - холестерола материнского организма, который поступает в материнскую часть плаценты, превращается в прогестерон и идет в кровь плода.
В надпочечниках плода он переходит в предшественники мужских половых гормонов – дегидроэпиандростерон, андростерон и тестостерон, которые вновь поступают в плаценту.
В плодовой части плаценты из них синтезируются эстрогены.
|
|
|
Количество образующихся эстрогенов зависит от:
· количества предшественников
· функциональной активности надпочечников плода
Биологическое действие эстрогенов:
· Повышает активность альфа-адренорецепторов
· Снижает активность бетта-адренорецепторов
· Вызывает гиперплазию и гипертрофию клеток миометрия (увеличение массы матки от 50 грамм до беременности до 1,5 кг в конце беременности, рост сосудов и нервных окончаний)
· Активирует кровообращение, повышает степень потребления кислорода миометрием
· Активируют синтез ферментов
· Активируют синтез сократительных белков в миометрии (актина и миозина), синтез ДНК и РНК
· Способствуют накоплению в миометрии энергетических веществ (АТФ, глюкоза, фосфолипиды)
· Способствуют накоплению микроэлементов в миометрии
· Активируют образование специфических белков – рецепторов к простагландинам и окситацину
· Сенсибилизируют нервно-мышечный аппарат к веществам, вызывающим сокращение матки (к утеротоникам)
· Блокируют ферменты, разрушающие утеротоники
· Снижают потенциал покоя, инициируют потенциал действия
· Повышают образование в гипоталамусе биологически активных веществ (простагландинов, катехоламинов, окситацина)
|
|
|
Таким образом, эстрогены способствуют накоплению энергии и сократительных белков в миометрии и готовят матку к активным сокращениям.
Лабораторная диагностика беременности животных
При беременности продукты обмена плода поступают в материнский организм, у беременных животных в крови появляется хорианальный и гонадотропный гормон, в моче — эстрогены, изменяется состав молока.
На обнаружении гормонов в крови, моче и изменении состава молока основан ряд лабораторных методов диагностики беременности.
1. Метод влагалищных мазков. Этот метод применим только для определения жеребости кобыл. Перед взятием слизи из влагалища необходимо наружные органы кобылы обмыть теплой водой с мылом. Затем, введя зеркало-расширитель во влагалище, берут слизь из глубины верхнего свода влагалища посредством длинной острой ложечки с предварительно затупленными краями или стерильным ватным тампоном. По получении слизи делают мазок на предметном стекле из слизи. Для производства мазка можно воспользоваться покровным стеклом. Мазок высушивают, фиксируют метиловым спиртом в течение 5 минут, окрашивают по Гимза (2 капли на 1 мл дистиллированной воды) в продолжение 25-30 минут и тщательно просушивают.
При микроскопическом исследовании мазка слизи от жеребой кобылы обнаруживаются клетки мерцательного эпителия, слизевые шары и редко - лейкоциты. У нежеребых кобыл во влагалищной слизи наблюдают нейтрофильные лейкоциты, клетки плоского эпителия и одиночно встречающиеся клетки мерцательного эпителия.
В качестве дополнительных показаний для постановки диагноза на жеребость обращают внимание на клинические признаки, наблюдаемы при макроскопическом исследовании полости влагалища.
Слизистая оболочка влагалища с 3-недельной жеребости животного покрывается густой, очень вязкой и мутной слизью, которая затрудняет введение и выведение влагалищного зеркала. С этого срока жеребости слизистая оболочка влагалища становится анемичной, сухой и без блеска. Отверстие шейки матки плотно закрыто слизью, образующей как бы пробку, вследствие этого влагалищная часть шейки матки выглядит тусклой. К 4-5 неделям жеребости влагалищная часть шейки матки отклоняется обычно вправо или влево.
2. Гормональный метод. На основании изучения физиологии передней доли гипофиза и яичника разработана реакция на беременность, основанная на очень раннем появлении в крови жеребых кобыл гормона пролана и в моче беременных кобыл, коров и свиней - гормона фолликулина.
Для исследования на пролан у животного берут из яремной вены около 25?50 мл крови, из нее отстаивают сыворотку, которую инъецируют без всякой обработки под кожу мышам. Инъекция в количестве по 0,1-0,4 мл исследуемой жидкости производится в течение 3 дней по 2 раза в день инфантильным (неполовозрелым) мышам-самкам. Вес такой мыши составляет 6-8 г (3-4 возраст).
Для исследования на фолликулин у животного берут мочу посредством катетера или путем выжидания естественного мочеотделения. Моча перед инъекцией мышам подвергается обработке эфиром для снижения ее токсичности. Для этого моча отстаивается. Образовавшийся сверху прозрачный слой сливается в количестве до 10 мл, подливается уксусная кислота для создания слабокислой реакции и прибавляется эфир в равном объеме. После этого моча встряхивается в течение 5 минут. Затем содержимому пробирки дают отстояться в течение 10 минут; эфир сливают, а мочу оставляют в открытом сосуде на несколько часов для полного удаления остатков эфира. Тогда мочу разбавляют в 3 раза дистиллированной водой и в таком виде впрыскивают под кожу мышам в шесть приемов в течение 3 дней. Для выявления фолликулина моча вводится кастрированным мышам-самкам или инфантильным.
Для уточнения диагноза моча или кровь от каждого исследуемого на беременность животного вводится 3-4 мышам. При наличии в исследуемой жидкости половых гормонов течка у мышей появляется через 72-100 часов после начала инъекции. Для обнаружения течки, начиная с утра 3-го дня, от мышей посредством тампона берут два раза в день выделения из влагалища. Из полученной слизи делают на предметном стекле в капле воды мазок, который рассматривают под микроскопом.
При наличии течки у мышей в мазке обнаруживаются только сплошные массы клеток ороговевшего безъядерного эпителия. В период покоя в мазке обнаруживаются лейкоциты и ядерные эпителиальные клетки.
Реакцию течки можно подтвердить вскрытием подопытных мышей, при котором обнаруживают увеличение и гиперемию матки. При реакции на пролан необходимо для дополнительной проверки вскрыть одну из подопытных мышей и в случае положительного результата находят увеличение яичников, присутствие в них зрелых фолликулов, красных кровяных точек на месте вскрывшихся граафовых пузырьков и даже желтых тел. Кроме того, хорошо заметны гипертрофия и гиперемия половых органов.
Минимальное количество гипофизарного или фолликулярного гормона, способное вызвать реакцию течки у самок-мышей, называют мышиной единицей.
У лошадей с 30-го дня жеребости можно попытаться использовать метод, основанный на обнаруживании в крови гормона пролана. Между 3а-м и 42Эм днями жеребости этот метод иногда дает неточные результаты, так как в этот период содержание пролана в крови незначительно (3а0-750 м. е. в литре крови). С 42-го по 100-й день жеребости количество гормона пролана в крови сильно повышается (до 10а 00а-130 000 м. е.), а потому в этот период реакция наиболее точная - дает верные результаты почти в 10а% случаев. После же 3 месяцев жеребости количество гормона пролана сильно снижается.
С 3 месяцев жеребости и до родов определение жеребости производят на основании обнаруживания в моче жеребой кобылы огромного количества гормона фолликулина, исчисляемое в десятках и даже сотнях тысячах мышиных единиц в литре моче. Правда, гормон фолликулин обнаруживается и нежеребых и в начале жеребости кобыл, но количество его исчисляется только в нескольких тысячах мышиных единиц в литре мочи. Таким образом, по разнице в количестве гормона фолликулина можно судить о жеребости кобылы.
3. Микроскопия мазков из влагалищной слизи. Слизь берут с шейки матки (лучше с ее устья) стерильным плотным ватным тампоном с помощью корнцанга. Эти тампоном делают ровные мазки на сухом, обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом в течение 5 минут, окрашивают краской Гимза (на 1 мл дистиллированной воды 2-г капли краски) на протяжении 25-30 минут, тщательно смывают краску, высушивают и микроскопируют.
В мазках из слизи, взятой у жеребых кобыл, находят значительное количество клеток мерцательного эпителия, слизевые шары голубого цвета, единичные клетки плоского эпителия и иногда незначительное количество лейкоцитов.
В мазках из слизи, взятой у нежеребых кобыл, обнаруживают большое количество лейкоцитов и клеток плоского эпителия, единичные клетки мерцательного эпителия. Шаров из слизи нет. Слизь на мазке лежит ровным слоем.
4. Биологическое исследование крови и мочи. В период беременности в крови и моче кобыл накапливается довольно большое количество гонадотропных (фолликулостимулирующий гормон - ФСГ и лютеинизирующий гормон - ЛГ) и гонадальных (фолликулин) гормонов, стимулирующих функциональную деятельность половых органов.
Диагностика жеребости по результатам биологического исследования крови или мочи основана на выявлении количественного содержания в них названных гормонов. Этот метод диагностики отличается высокой точностью (95-100%), но, несмотря на это, при массовых исследованиях на жеребость он применяется редко из-за сложности и дороговизны его выполнения.
Для выявления гормонов в крови и моче жеребых кобыл существуют следующие способы: 1) Колла и Харта, 2) Фридмана и Шнейдера, 3) Цондека и Ашгейма.
При изучении функционального состояния яичников некоторые авторы заменяют лапаротомию осмотром яичника через фистулу брюшной стенки.
Для этой же цели предложена пересадка яичника в переднюю камеру глаза кастрированных крольчих. При удачной операции, с ослаблением воспалительной реакции, роговица просветляется (в первые дни послеоперационного периода она мутнеет), и за привившимся яичником очень просто и удобно вести наблюдение.
После введения испытуемой сыворотки в ушную вену крольчих в трансплантате можно видеть кровоизлияния, через три дня - увеличение фолликулов, а через пять дней - ясную лютеинизацию.
5. Реакция Цондека и Ашгейма. Сущность реакции - выявление фолликулина в моче или крови беременных.
У жеребой кобылы в моче фолликулина в сотни раз больше, чем в крови, поэтому при постановке реакции используют мочу. Содержание фолликулина в моче увеличивается с течением жеребости: в первые три месяца колеблется в пределах 300-800 МЕ, с третьего месяца до выжеребки достигает 28 000-500 000 и даже 1 000 000 МЕ в 1 л мочи.
Эти данные указывают на целесообразность применения фолликулиновой реакции преимущественно после третьего месяца жеребости, а в более ранней стадии - исследование на пролан.
Техника реакции. Мочу пропускают через бумажный фильтр, подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции (лакмус). Для освобождения от токсичных веществ к моче прибавляют равное количество эфира и тщательно взбалтывают. Эфир сливают, а мочу оставляют стоять открытой до испарения остатков эфира (пока не останется слабый запах). Обработка эфиром повышает активность фолликулина.
Лабораторными животными служат овариоэктомированные белые мыши (кастраты), выдержанные в течение двух недель после операции и проверенные на отсутствие течки. Можно использовать инфантильных самок мышей; у каждой из них окрасить шерсть на условном месте и в течение трех дней два раза в день вводить под кожу:
К а с т р а т а м
· 1-й мыши - 0,3 цельной мочи
· 2-й » - 0,2 » »
· 3-й » - 0,1 » »
· 4-й » - 0,1 мочи, разбавленной водой в 2 раза
инфантильным
· 1-й мыши - 0,2 цельной мочи
· 2-й » - 0,1 » »
· 3-й » - 0,1 » »
· 4-й » - 0,1 мочи, разбавленной водой в 2 раза
Если есть основание предполагать более поздние сроки жеребости, когда фолликулина в моче много, можно всем мышам вводить мочу, разбавленную водой в 2-3 раза.
Через 100 часов после первой инъекции (лучше с 70-80-го часа) из влагалищной слизи каждой мыши три раза в день изготовляют мазки. Для получения материала и приготовления мазков употребляют платиновые петельки. Прокаленную на спиртовке петельку погружают в дистиллированную воду и вместе с захваченной ею каплей воды вводят во влагалище. Для извлечения слизи петли проводят по слизистой оболочке легким скоблящим движением. Той же петлей слизь размазывают на поверхности предметного стекла. На одно стекло можно нанести 3-ж мазков. Каждый мазок помечают восковым карандашом тем номером, которым обозначена мышь.
Мазок высушивают на воздухе, фиксируют спиртом и окрашивают по Романовскому или просматривают под микроскопом без окраски, в затемненном поле зрения. Наличие в мазке безъядерных клеток (чешуек), указывающих на появление течки, расценивается как положительный диагноз. В сомнительных случаях можно вскрыть 1-2 мыши. Диагноз подтверждается обнаружением матки, увеличенной под влиянием фолликулина.
6. Реакция Колла и Харта. Пролан появляется в крови кобыл через 30-40 дней после начала жеребости в количестве 144 МЕ** МЕ (мышиной единицей) называется минимальное количество гонадостимулирующего или фолликулярного гормона, вызывающие сдвиги в половом цикле мыши. По этому же принципу определяются крысиные и кроличьи единицы. в литре (в среднем). К 40-50-му дню жеребости количество пролана достигает 26 тысяч, к 90-му дню - 30-40 тысяч МЕ. С 90-го дня содержание в крови пролана начинает уменьшаться.
Практически выявление пролана в сыворотке крови кобыл может быть осуществлено в период между 40-120 днями жеребости (с половины второго до пятого месяца).
Тестобъектом служат инфантильные мыши (весом 6-8 г) или крысы (весом 20-28 г).
Из вены кобылы, подлежащей исследованию, берут около 50 мл крови и ставят в прохладное место для отделения сыворотки. Последнюю вводят под кожу трем мышам или крысам в дозах (мл):
· 1-й мыши . . . . 0,5
· 2-й » . . . . 0,3
· 3-й » . . . . 0,1
· 1-й крысе . . . . 1,0
· 2-й » . . . . 0,5
· 3-й » . . . . 0,3
Всего делают шесть инъекций в течение трех суток (по две инъекции в сутки).
На 4-5-й день после начала инъекций от подопытных животных 2-3 раза в день готовят мазки из влагалищной слизи и исследуют под микроскопом. Если кобыла была жеребой, то под влиянием имеющегося в крови пролана у инфантильных мышей или крыс происходит половое созревание - развитие фолликулов. С созреванием фолликулов образующийся в них фолликулин вызывает течку, и мазок состоит из безъядерных клеток (чешуек). Если картина не ясна, через 100 часов после начала инъекции мышей убивают. При наличии у кобылы жеребости у мышей удается установить увеличение рогов матки, а в яичниках - зрелые фолликулы, желтые тела или фолликулы, заполненные кровью.
Решающее значение имеют изменения яичников и матки, поэтому для суждения о реакции всех или некоторых мышей убивают или вскрывают.
7. Реакция Фридмана и Шнейдера. Объектом служат крольчихи весом 900-1200 г, то есть достигшие половой зрелости. Самки должны содержаться изолировано от самцов, а еще лучше и от самок.
Десять миллилитров сыворотки крови исследуемой кобылы вводят в ушную вену крольчихи. Через 36-48 часов после инъекции у крольчихи производят лапаротомию и осмотр яичников. После инъекции сыворотки на месте разорвавшихся фолликулов или обнаруживают фолликулы, полость которых заполнена кровью.
После осмотра яичников рану брюшной стенки зашивают. Через 2-3 недели эту же крольчиху можно использовать вторично (иногда одно животное удается использовать 5-6 раз). При повторных инъекциях следует иметь в виду возможность анафилаксии.
К преимуществам этой реакции относится укорочение срока ее до 48 часов, вместо 100 часов при методике Колла и Харта.
Дата добавления: 2019-02-22; просмотров: 792; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!