Этапы исследования материала в лаборатории

⇐ ПредыдущаяСтр 7 из 12Следующая ⇒

Успешная диагностика и лечение анаэробной инфекции возможна только при заинтересованном сотрудничестве микробиологов и клиницистов соответствующего профиля. Получение адекватных образцов проб для микробиологического исследования является критическим фактором. Методы взятия материала зависят от локализации и типа патологического процесса. Лабораторное исследование основано на индикации и последующей видовой идентификации анаэробных и аэробных микроорганизмов, содержащихся в исследуемом материале, с помощью традиционных и экспресс методов, а также на определении чувствительности выделенных микроорганизмов к антимикробным химиотерапевтическим препаратам (2).

Прямое исследование материала

Имеется много быстрых прямых тестов, которые убедительно указывают на присутствие анаэробов в большом количестве в исследуемом материале. Некоторые из них весьма просты и дешевы и поэтому имеют преимущества перед многими дорогостоящими лабораторными исследованиями.

1. 3 а п а х. Зловонные материалы всегда содержат анаэробы, только единичные из них не имеют запаха.

2. Газожидкостная хроматография (ГЖХ). Относится к числу экспресс методов диагностики. ГЖХ позволяет определить в гное короткоцепочечные жирные кислоты (уксусную, пропионовую, изовалериановую, изокапроновую, капроновую), которые обусловливают запах. С помощью ГЖХ по спектру летучих жирных кислот можно осуществить видовую идентификацию присутствующих в нем микроорганизмов.

3. Флуоресценция. Исследование материалов (гноя, тканей) в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм позволяет выявить интенсивную красную флуоресценцию, которая объясняется присутствием черно пигментированных бактерий, принадлежащих к группам Васteroides и Porphyromonas, и которая указывает на наличие анаэробов.

4. Бактериоскопия. При исследовании многих препаратов, окрашенных по методу Грама, в мазке выявляется присутствие клеток воспалительного очага, микроорганизмов, особенно полиморфных грамотрицательных палочек, малых грамположителъных кокков или грамположительных бацилл.

5. Иммунофлуоресценция. Прямая и непрямая иммунофлуоресценция являются экспресс методами и позволяют выявить анаэробные микроорганизмы в исследуемом материале.

6. Иммуноферментный метод. Иммуноферментный анализ позволяет определить наличие структурных антигенов или экзотоксинов анаэробных микроорганизмов.

7. Молекулярно-биологические методы. Наибольшее распространение, чувствительность и специфичность в последние годы показала цепная полимеразная реакция (ЦПР). Она применяется как для выявления бактерий непосредственно в материале, так и для идентификации.

Способы и системы для создания анаэробных условий

Материал, забранный из соответствующих источников и в подходящие для этих целей контейнеры или транспортную среду, должен быть доставлен незамедлительно в лабораторию. Однако имеются сведения, что клинически значимые анаэробы в больших объемах гноя или в анаэробной транспортной среде выживают в течение 24 часов. Важно чтобы среда, в которую проведен посев, инкубировалась в анаэробных условиях или была помещена в заполненный СО2 сосуд и сохранялась до момента переноса в специальную инкубационную систему. Имеется три типа анаэробных систем, широко используемых в клинических лабораториях. Более широко применяются системы микроанаэростатов типа (GasPark, BBL, Cockeysville), которые используются в лабораториях многие годы, особенно в малых лабораториях, и позволяют получить удовлетворительные результаты. Чашки Петри с посевом анаэробных бактерий помещаются внутрь сосуда одновременно со специальным пакетом, генерирующим газ, и индикатором. В пакет добавляется вода, сосуд герметически закрывается, из пакета в присутствии катализатора (обычно палладиевого) выделяется СО2 и Н2. В присутствии катализатора Н2 реагирует с О2 образуя воду. СО2 необходим для роста анаэробов, так как они являются капнофилами. В качестве индикатора анаэробных условий добавляется метиленовый синий. Если газогенерирующая система и катализатор работают эффективно, то наблюдается обесцвечивание индикатора. Для большинства анаэробов необходимо культивирование не менее 48 часов. После этого камеру открывают и чашки исследуют первично, что представляется не совсем удобным, так как анаэробы чувствительны к кислороду и быстро утрачивают жизнеспособность.

В последнее время в практику вошли более простые анаэробные системы - анаэробные мешки. В прозрачный, герметически закрываемый полиэтиленовый мешок помещают одну или две засеянных чашки с генерирующим газ пакетом и инкубируют в условиях термостата. Прозрачность полиэтиленовых мешков позволяет легко проводить периодический контроль за ростом микроорганизмов.

Третьей системой культивирования анаэробных микроорганизмов является автоматически герметизированная со стеклянной передней стенкой камера (анаэробная станция) с резиновыми перчатками и автоматической подачей безкислородной смеси газов (N2 , H2, СО2). Материалы, чашки, пробирки, планшеты для биохимической идентификации и определения чувствительности к антибиотикам помешаются в этот кабинет через специальный люк. Все манипуляции выполняются бактериологом в резиновых перчатках. Материал и чашки в данной системе могут просматриваться ежедневно, а посевы могут инкубироваться от 7-10 дней.

Эти три системы имеют свои достоинства и недостатки, но они эффективны для выделения анаэробов и должны быть в каждой бактериологической лаборатории. Часто они используются одновременно, хотя наибольшая надежность принадлежит методу культивирования в анаэробной станции.

Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 126; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 2 3 4 5 678 9 10 11 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!