Алгоритм микробиологического исследоваНИSI при столбняке
Занятие 3
Возбудители раневых инфекции- клостридии столбняка, газовой гангрены
Знать:
9. Биологические особенности клостридий столбняка
10. Столбняк - патогенез, эпидемиология, лечение, спецпрофилактика
11. Имуннобиологические препараты
12. Методы микробиологической диагностики
Уметь:
11. Квалифицированный забор исследуемого материала
12. Подготовку исследуемого материала к исследованию
13. Культивацию в анаэробных условиях
14. Оформить протокол микробиологического исследования
15. Составить заключение по результатам исследования
Возбудители раневых анаэробных инфекций - столбняка и газовой гангрены - Гр+ анаэробные спорообразующие палочки - клостридии. Раневые инфекции всегда
сопровождаются загрязнением ран аэробными гноеродными кокками - стафилококками и стрептококками. Для создания анаэробных условий при проведении лабораторной диагностики используют специальные методы взятия материала, элективные питательные среды и специальную аппаратуру для культивирования анаэробов.
Материалы дли исследования, забор и доставка
Гной, раневое отделяемое, отечная жидкость, кусочки мышечной ткани, а также перевязочный материал и кетгут (проверка стерильности). Материал берут из разных участков очага, особенно из глубоких слоев. Для обеспечения бескислородных условий взятие материала производят шприцем с притертым поршнем до полного его заполнения и вытеснения воздуха. Затем шприц надевают на иглу, воставленную через резиновую пробку в пробирке со смесью инертный газов (без кислорода) и вводят в нее исследуемый материал, которыЙ доставляют в лабораторию.
|
|
|
Питательные среды для выращивании анаэробов
Пробирочные среды:
7. Тиогликолевая среда (полужидкий агар) - среда накопления;
8. Среда Китта- Тароцци (жидкая) - среда накопления и вьщеления чистоЙ
культуры. Среду Китта- Тароцци перед посевом регенерируют кипячением 20 минут.
9. Среда Вильсона-Блера (плотная, высокий столбик) - для первичного посева. Расплавленной и горячей (60 градусов Цельсия) средой Вильсона-Блера заливают внесенный в пробирку материал.
После посева все среды охлаждают под холодной водой и заливают вазелиновым
маслом.
Чашечные среды:
3. Кровяной агар с глюкозой (агар Цейсслера).
Посевы на чашки осуществляются методом Фортнера, Штурм и др. После посева
края чашки заливают парафином. Все посевы помещают в ан аэростат и ставят его в термостат.
Имуннобиологические препараты ДЛJI диагностики, лечения и профилактики раневых инфекций
5. Противостолбнячная антитоксическая сыворотка - нейтрализует действие
|
|
|
столбнячного токсина (диагностика, лечение и профилактика)
6. Столбнячный анатоксин - входит в состав АКДС (коклюшно-столбнячно
дифтерийная вакцина) - для вакцинации.
Методы лабораторной диагностики
7. Биологическая проба (основной метод) - реакция нейтрализации токсинов.
8. Микроскопический метод
9. Бактериологический метод (при отрицательной биопробе с целью получения
чистой культуры и повтора с ней биопробы).
Биологические особенности клостридий столбняка
Возбудитель столбняка Clostridium Tetani относится к роду Клостридий (анаэробных Гр+ спорообразующих палочек).
Морфология: крупные (4-8 мкм), палочки с закругленными краями. Споры располагаются терминально, что придает вид барабанной палочки. Подвижны, перетрихи. Тинкториальные свойства: Гр+. Метаболизм: ферментативный, хемоорганотрофы. Тип дыхания: строгий анаэроб.
Патогенетический признак - экзотоксин (тетаноспазмин и тетанолизин),
вызывающий гемолиз эритроцитов.
Культивирование: растут в анаэробных условиях при 37 градусах Цельсия на среде
Китта- Тароцци, Вильсона-Блера, агаре Цейсслера через 72 часа.
Культуральные свойства: помутнение Китта-Тароцци, на среде Вильсона-Блера - в толще агара темные колонии в виде пушинок, на агаре Цейсслера - прозрачные колонии
|
|
|
с зоной гемолиза.
Биохимические свойства: сахаролитически не актвен.
Протеолитические свойства: медленно разжижает желатину, свертывает молоко,
восстанавливает нитриты и нитраты.
Антигенные свойства: по О и Н антигену различают 1 О сероваров, однако все они
продуцируют токсин одного типа (видовой).
Алгоритм микробиологического исследоваНИSI при столбняке
Первый день
Микроскопия исследуемого материала - окраска по Граму и по Ожешко. Наличие
Гр+ спороносных (барабанных) палочек позволяет выдать ориентировочный ответ: клостридии. Исследуемый материал делят на две порции (для биопробы и бакисследования).
Часть материала засевают на среду накопления Китта- Тароцци и культивируют в анаэробных условиях при 37 градусах Цельсия в течение трех дней.
Для постановки биопробы из другой части материала экстрагируют анатоксин. С этой целью материал растирают в стерильной ступке с песком, заливают физ.раствором для экстракции токсина на 1 час и фильтруют через бумажный фильтр. Полученный фильтрат токсина делят на 2 порции.
|
|
|
Первая порция опытная, вторая порция контрольная - в нее добавляют противостолбнячную сыворотку и для нейтрализации токсина оставляют на 1 час. В опыт берут две пары мышей которым внутримышечно вводят: первой (опытной) паре мышейфильтрат токсина без сыворотки, второй паре (контрольной) - фильтрат токсина ссывороткой.
Через 1-2 суток в опытной группе мышей появляются признаки столбняка: ригидность конечностей, хвоста (хвост трубой). Затем животные погибают в характерной позе: поджав передние лапки и вытянув задние. У контрольных мышей получивших антитоксическую сыворотку заболевания не возникают.
На основании положительной биопробе ставится окончательный диагноз: столбняк. При отрицательном результате биопробы (все мыши живы) продолжают
бактериологи ческие исследования.
Со среды накопления Китта- Тароцци (2-3 сутки) делают пересевы на агар Цейсслера, культивируют в анаэробных условиях, изучают культуральные свойства (прозрачные колонии с зоной гемолиза), микроскопируют.
На 4-5 день для выделения чистой культуры пересевают на среду Китта- Тароцци и
ставят биопробу с чистой культурой.
При отрицательном результате выдается отрицательный ответ.
Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 302; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!