Лабораторная работа № 9. Приготовление фиксированных окрашенных препаратов
Цель работы. Освоение методов приготовления и окрашивания бактериальных препаратов.
Задание. Освоить технику приготовления и окрашивания мазка из зубного налета. Посмотреть с иммерсионным объективом окрашенные мазки; определить и зарисовать обнаруженные формы и взаиморасположение микроорганизмов. Ответить на поставленные вопросы .
Приготовление бактериальных препаратов.
Препарат – мазок для окрашивания, приготовляется в несколько этапов: приготовление препарата; высушивание; фиксация; окраска.
Для приготовления препарата используют предметное стекло - тонкую стеклянную пластинку размером 76×26 мм с хорошо отшлифованными краями.
При микроскопировании применяют покровные стекла толщиной 0,15-0,17 мм и размером 18×18, 20×20, 18×24 мм. Их подготавливают заранее обезжиренными.
Чистые стекла берут пинцетом, так как пальцы оставляют на них жирные пятна. Если стекла находятся в жидкой среде, их перед употреблением обсушивают фильтровальной бумагой и слегка обжигают над пламенем горелки. При длительном употреблении стекла мутнеют и становятся непригодными для работы.
Препарат-мазок готовится при помощи бактериологических петель или пастеровских пипеток.
Бактериологическую петлю готовят из платиновой или нихромовой проволоки длиной 5-7 см, толщиной 0,5 мм и припаивают к ней стеклянную ручку или вставляют ее в металлическую – петледержатель. Такая проволока легко стерилизуется на пламени и быстро остывает.
|
|
|
Пастеровские пипетки выполняют из стеклянных трубок диаметром 3-6 мм.
Для приготовления препарата-мазка исследуемую культуру микроба осторожно распределяют равномерным тонким слоем на предметном стекле.
Мазок из культур, выросших на плотных средах, готовят в определенной последовательности.
На чистое предметное стекло стерильной пипеткой или бактериологической петлей наносят каплю воды или физиологического раствора. Пробирку с культурой, из которой необходимо приготовить мазок, в наклонном положении помещают на указательном и среднем пальцах левой руки и сверху прижимают большим пальцем так, чтобы хорошо была видна вся поверхность питательной среды с выросшими на ней микроорганизмами (рисунок 24 а-з).
Прежде чем взять материал из культуры, необходимо прокалить бактериологическую петлю в пламени горелки до покраснения. При этом петля должна находиться в вертикальном положении (а), чтобы пламя охватывало не только всю петлю, но и часть иглодержателя.
При работе петлю или пипетку держат в правой руке, как карандаш при письме. Зажав пробку между мизинцем и ладонью правой руки (в ней же находится подготовленная петля), вынимают ее из пробирки (б) и держат концом вниз, не допуская соприкосновения с рукой той части пробки, которая находилась в пробирке. Открытый конец пробирки обжигают на пламени (в) и отводят несколько к себе, затем вводят в пробирку петлю (еще раз проведя ее через пламя), охлаждают прикосновением к стенке пробирки (а) и набирают небольшое количество материала, слегка прикасаясь к культуре и не царапая среды петлей. После взятия материала (д) пробирку тотчас закрывают той же ватной пробкой (е), а перед этим края пробирки и конец ватной пробки обжигают на пламени горелки. Взятый материал эмульгируют (ж) в имеющейся на предметном стекле капле и равномерно тонким слоем петлей распределяют по поверхности (1,5×2 см)
|
|
|
Если культура выращена на жидкой питательной среде, то стерильную петлю опускают в жидкость, захватывают каплю и растирают ее на предметном стекле. На обратной стороне стекла обводят восковым карандашом место, где приготовлен мазок. Это облегчает в дальнейшем нахождение его. После этого петлю прокаливают (д), с тем, чтобы убить оставшиеся на ней микроорганизмы, и кладут на место.
Для приготовления мазка можно пользоваться и стерильной пипеткой. Пастеровскую пипетку предварительно проводят над пламенем горелки, затем пинцетом над прокаленным пламенем горелки обламывают тонкий запаянный конец пипетки и набирают материал. Использованную пипетку опускают в сосуд с дезинфицирующим раствором (5 %-м раствором фенола).
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 738; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!