Капельный метод выделения чистой культуры из одной клетки.
Предварительно подготавливается разведение культуры микроорганизма в питательной среде с таким расчетом, чтобы в небольшой капле этой среды могли быть единичные клетки. Затем на поверхность стерильного стекла с помощью стерилизованной иглы и стеклянной палочки наносят ряды мелких капель среды, содержащей микроорганизмы.
Стекло переворачивают и помещают над лункой предметного стекла. Края лунки предварительно обмазывают вазелином. Затем все капли просматривают под микроскопом и отмечают те из них, в которых находится только одна клетка.
Стекло помещают в чашку Петри, на дне которой находится увлажненная фильтровальная бумага, и ставят в термостат; клетка размножается, образуя микроскопическую колонию.
Полученную колонию снимают стерильной фильтровальной бумагой, которую держат стерилизованным на пламени пинцетом, и переносят в пробирку с питательной средой. Выделение чистой культуры капельным методом используется при работе с крупными микроорганизмами (дрожжами, плесенью).
Метод выделения чистой культуры с помощью твердых сред (метод Коха и метод Дригальского).
Наиболее распространенный в микробиологической практике метод основан на том, что при нанесении микроорганизмов из посевного материала на твердую среду отдельные клетки будут закрепляться (иммобилизоваться) в определенной точке твердой среды и, размножаясь, давать потомство (клон), представляющее чистую культуру микроорганизма.
|
|
|
Для получения изолированных колоний на твердой среде на поверхность твердой питательной среды исследуемый материал высевают, каплю его наносят петлей или пипеткой.
Рассев проводят либо методом истощающего мазка, либо методом истощающего штриха.
В первом случае шпателем равномерно распределяют нанесенную каплю по поверхности твердой среды. Тем же шпателем делают посев на поверхности второй пластинки и затем третьей, т. е. переносят последовательно на твердую среду клетки микроорганизмов, которые остались на шпателе.
Таким образом, количество микроорганизмов, вносимых последовательно на пластинки, будет уменьшаться: на вторую пластинку - меньше, чем на первую; на третью - еще меньше, чем на вторую, и т. д.
При использовании метода истощающего штриха исследуемый материал наносят петлей в верхнюю часть твердой среды в чашке Петри и аккуратно, зигзагообразно петлей по поверхности чашки. Затем посев проводят аналогично на второй и третьей чашках.
После посева чашки необходимо перевернуть вверх дном и поставить в термостат при температуре, благоприятной для данного микроорганизма. Инкубируют посевы обычно в термостате в течение 2-3 дней. В результате на поверхности среды вырастают колонии микроорганизмов. Выросшие колонии сначала рассматривают невооруженным глазом, а затем при помощи лупы или при малом увеличении микроскопа.
|
|
|
а 
б 
Рисунок 19 – а – метод посева зигзагообразной петлей; б – метод посева истощающего штриха
Может наноситься серия штрихов (рисунок 20). При этом, проводя на поверхности среды штрихи, после каждой серии чашку немного поворачивают, так чтобы в каждой новой серии распределялись бактерии из предыдущей серии штрихов, истощая, таким образом, штрихи до отдельных бактерий.
С помощью этого метода можно выделять бактерии из естественных мест обитания, например из почвы, молока, воды. Образцы твердых субстанций, таких как почва, лучше суспендировать в небольшом количестве воды, либо предварительно проинкубировать в жидкой среде. Безопасным источником для рутинной работы является пастеризованное молоко. Перед тем как проводить эксперименты с бактериями или грибами, следует ознакомиться с инструкциями и правилами безопасности, чтобы снизить до минимума риск культивирования вредных организмов.
Из отобранных колоний готовят препараты, микроскопируют их (рассматривают под микроскопом) для проверки морфологической однородности клеток. Рассматривают препараты с объективом ×90 при максимальном освещении. При приготовлении препаратов необходимо соблюдать все правила стерильности (не открывать широко крышку чашки, хорошо стерилизовать петлю).
Рисунок 20 – Каждая линия обозначает один штрих проволочной петлей
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 408; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!