Реакция иммунной флюоресценции (РИФ)
Реакция основана на том, что иммунные сыворотки обрабатывают флюорохромами (ФИТЦ), которые соединяются с антителами. Сыворотки при этом не теряют своей иммунной специфичности. При взаимодействии полученной люминесцентной сыворотки с соответствующим антигеном образуется специфический светящийся комплекс, легко видимый в люминесцентном микроскопе.
Различные иммунофлюоресцентные сыворотки могут быть использованы для прямого и непрямого метода иммунофлюоресценции. При прямом методе специфические флюоресцирующие иммунные сыворотки готовят для каждого микроба путем иммунизации кролика убитой культурой возбудителя, затем иммунную сыворотку кролика соединяют с флюорохромом (изоционат или изо-тиоционат флюоресцеина). Метод применяется для экспресс-диагностики с целью обнаружения бактериальных или вирусных антигенов.
Непрямой метод предусматривает использование диагностической иммунной не флюоресцирующей сыворотки (иммунизированного кролика или больного человека) и флюоресцирующей сыворотки, имеющей антитела против видовых глобулинов диагностической сыворотки.
К работе № 3
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Широкое применение находит твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА). Он основан на том, что белки прочно адсорбируются на пластинках, например из поливинилхлорида. Один из наиболее распространенных на практике вариантов ИФА основан на использовании меченных ферментом специфических антител той же специфичности. К носителю с иммобилизованными ат добавляют раствор с анализируемым аг. В процессе инкубации на твердой фазе образуются специфические комплексы аг-ат. Затем носитель отмывают от не связавшихся компонентов и добавляют гомологичные антитела, меченные ферментом, которые связываются со свободными валентностями антигена в составе комплексов. После вторичной инкубации и удаления избытка этих меченных ферментом антител определяют ферментативную активность на носителе, величина которой будет пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена.
|
|
|
При другом варианте ИФА к иммобилизованному аг добавляют исследуемую сыворотку. После инкубации и удаления не связавшихся компонентов с помощью меченных ферментом антиглобулиновых антител выявляют специфические иммунокомплексы. Данная схема является одной из наиболее распространенных при постановке ИФА.
*
+
|
|
|
Специфические Исследуемый материал- Специфические антитела Субстрат
антитела возбудитель с пероксидазой для пероксидазы
*
+
Специфический Исследуемая АГС, меченная Субстрат для антиген сыворотка пероксидазой пероксидазы
Контроль:
позитивный - иммунная сыворотка, меченная пероксидазой + субстрат - 2 лунки;
негативный - нормальная сыворотка + субстрат - 2 лунки.
Дата добавления: 2018-10-27; просмотров: 139; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!