Правила работы и дисциплина студентов.

ГОУ ВПО «Красноярская государственная медицинская академия

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

ФФМО (лечебное дело)

Кафедра гистологии, эмбриологии, цитологии

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ДЛЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЯ

К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ №1

Тема: «Определение и содержание гистологии. Принципы и правила работы на кафедре гистологии. Гистологическая и микроскопическая техника. Правила зарисовки препаратов и ведение альбома. Деонтология в медицине».

Утверждена на кафедральном заседании

№ протокола …………..

«___» _____________2007 г.

Зав.кафедрой гистологии, эмбриологии, цитологии

ГОУ ВПО КрасГМА Росздрава

д.м.н., Н.Н. Медведева……………………….

Составитель: Доцент Л.Е. Сухова

Красноярск

2007

1. Тема занятия: Определение и содержание гистологии. Принципы и правила работы на кафедре гистологии. Гистологическая и микроскопическая техника. Правила зарисовки препаратов и ведение альбома. Деонтология в медицине.

2. Форма организации учебного процесса – практическое занятие

Значение темы

Цитология, гистология и эмбриология, как и другие науки, использует для решения присущих задач специальные методы исследования. Применяемый в гистологии комплекс методических приемов называется гистологической техникой.

Различные способы гистологической техники позволяют изучать микро- и ультраструктуры, гистофизиологию, приспособительные реакции, восстановительные свойства клеток, тканей и органов в норме, эксперименте и патологии. Изучение биопсийного материала может иметь существенное значение в диагностике заболеваний, выборе метода лечения.

Микроскопические методы исследования имеют огромное значение для теории и практики медицины как способ изучения гистологических структур.

Цели обучения

Общая цель:

Познакомиться с основными видами работ при изучении гистологии.

4.2. Учебные цели:

- Знать конструкцию биологического микроскопа, усвоить назначение его оптических, механических частей и свойств линз.

- Уметь работать с микроскопом, используя различные источники освещения, объективы и окуляры на основании «Правил пользования микроскопом».

- Получить представление об устройстве и назначении вертикального осветителя, темнопольного, фазово-контрастного, поляризационного, ультрафиолетового люминесцентного и электронного микроскопов.

- Ознакомиться с основными методами гистологического исследования неживых и живых объектов, а также основными этапами изготовления препаратов для световой и электронной микроскопии.

4.3. Психолого-педагогическая цель: Для современной гистологии характерен функциональный подход к изучаемым структурам. Материал занятия может служить иллюстрацией для обоснования с позиций диалектики тесной связи таких категорий как форма и содержание (на примере единства структуры и функции изучаемых тканей).

В ходе занятия целесообразно отметить приоритет ученых, показать достижения медицины.

Необходимо напомнить студентам, что биологическая природа человека такова, что она требует обязательного нормативного взаимодействия всех систем и органов, поэтому употребление алкоголя, наркотиков, курение снижают их жизнедеятельность. Студенты должны воспитывать в себе личность, гармонически сочетающую духовное богатство, моральную чистоту и физическое совершенство.

Во время занятия студенты должны соблюдать все правила микроскопирования. Правильная работа сохраняет препараты и зрение.

5. Место проведения практического занятия:

- учебная комната,

- гистохимическая лаборатория

6. Оснащение занятия:

- микроскопы

- таблицы

- блоки

- препараты

- компьютер

- ООД по теме занятия

Структура содержания темы (хронокарта, план занятия).

№ п/п

Этапы практического занятия

Продолжительность (мин)

Цель этапа и оснащенность

Организация занятия

3 мин.

Проверка посещаемости и внешнего вида обучающихся.

Формулировка темы и цели

10 мин.

Преподавателем объявляется тема, ее актуальность и цели занятия.

Определение исходного уровня знаний

15 мин.

Разбор основных вопросов темы занятия по ответам на контрольные вопросы или через тестирование. Оснащение: 1. Контрольные вопросы 2. Тесты 3. Таблицы 4. Схемы 5. Компьютер

Раскрытие учебно-целевых вопросов

30 мин.

1.Устное собеседование, в процессе которого разбираются наиболее важные и сложные вопросы по теме. 2.Инструктаж обучающихся по выполнению самостоятельной работы.

Самостоятельная работа: 1) микроскопия гистологических препаратов.

70 мин.

Изучение темы занятия с использованием электронного гистологического атласа и обучающих компьютерных программ. Оснащение: 1. Микроскопы 2. Препараты 3. Компьютер 4. Альбомы 5. Ручка 6. Карандаши

Определение конечного уровня знаний

20 мин.

Закрепление изученного материала при решении ситуационных задач или с использованием компьютерных контролирующих программ.

Подведение итогов и задание на дом

7 мин.

1. Оглашение оценок; 2. Задание на дом.

Всего:

155 мин.

Аннотация

Гистология - наука, изучающая развитие, микроскопическое и ультрамикроскопическое строение, жизнедеятельность клеток, тканей и органов. Курс гистологии включает в себя: цитологию (или учение о клетке), эмбриологию (или науку о зародыше), общую гистологию (или собственно учение о тканях) и частную гистологию (или учение о микроскопическом строении органов). Однако такое деление условно, так как организм представляет собой единое целое, где все части связаны и взаимодействуют друг с другом. Так, клетки входят в состав тканей, каждый орган состоит из нескольких тканей, органы объединяются в системы и т.д.

Гистология относится к морфологическим наукам, изучающим микроскопическое строение организма, в отличие от анатомии, которая изучает макроскопическое строение организмов.

Основной метод исследования в гистологии - микроскопирование. В последние годы в связи с созданием электронного микроскопа большое значение приобрел метод ультрамикроскопического исследования структур.

Для современной гистологии характерен функциональный подход к изучаемым структурам, то есть установление связи между строением клеток, тканей, органов с их функциями. Это направление в гистологии получило названия гистофизиологии. Взаимоотношение между структурой и функцией рассматривается с позиций диалектического представления о единстве формы и содержания: нет структуры без функции и нет функции без структуры.

Различные структуры различаются с позиции целостного организма, тесно взаимодействующего с внешней средой. Ведущая роль в обеспечении этого единства принадлежит нервной и эндокринной системам.

Возникновение тканей происходит в определенный период эмбрионального развития. Правильно понять процессы образования различных структур можно только при сравнительном, эволюционном изучении эмбриогенеза, начиная с относительно просто устроенных хордовых животных (ланцетник) и постепенно переходя к рыбам, амфибиям, рептилиям, птицам, млекопитающим и человеку.

Эмбриология позволяет установить закономерности формирования структур в процессе эволюции, так как некоторые стадии филогенетического развития повторяются в онтогенезе. Гистология тесно связана с другими науками, прежде всего медицинскими и биологическими: анатомией, физиологией, биохимией, биофизикой, генетикой и другими.

Необходимость химических и физических процессов в клетках и тканях обеспечивает тесное взаимодействие гистологии с такими дисциплинами как физика и химия. Знание нормального строения и функции всех частей человека на организменном, тканевом, клеточном и субклеточном уровне необходимо для глубокого понимания изменений, происходящих в организме больного человека. Поэтому анатомия, гистология, физиология и биохимия служат фундаментом, на котором строится преподавание патологической физиологии и патологической анатомии - дисциплин, непосредственно связанных с клиникой. Данные гистологии все чаще используются в клинических дисциплинах. В клинике наряду с клиническими методами часто используются методы морфологического анализа - изучение клеток крови, красного костного мозга, пунктатов и биопсии печени, селезёнки и других органов.

Гистологию студенты изучают в течение 2 семестров (18 недель в весеннем семестре и 19 в зимнем – лечебное дело, педиатрия; 19 недель в весеннем и 20 в зимнем семестрах – стоматология). В зимнюю экзаменационную сессию после третьего семестра студенты сдают экзамен по гистологии.

Кафедральный учебный план на этот семестр студент может посмотреть на доске объявлений.

Правила работы и дисциплина студентов.

1. За каждым студентом закрепляется на семестр определенное рабочее место, микроскоп, набор препаратов и он несет ответственность за их сохранность, а также за порядок на рабочем месте.

2. Каждый студент обязан приходить на занятия подготовленным, в
халате, имея при себе альбом для зарисовки препаратов и набор цветных
карандашей. Альбом должен заполнятся по форме, установленной
кафедрой.

3. Дежурный студент, сдав студенческий билет лаборанту,
принимает комнату и отвечает за порядок в учебной комнате, а после
практического занятия он сдает комнату лаборанту.

4. Студент до прихода преподавателя должен приготовить свое
рабочее место, альбом, карандаши, авторучку. Портфели и сумки
студенты ставят в специальный шкаф, который находится в учебной
комнате.

5. Перед занятием студент должен проверить целостность и
сохранность набора препаратов и о всяких отклонениях от нормы
сообщить дежурному группы и преподавателю.

6. В конце каждого занятия необходимо:

• подписать зарисовки препаратов у преподавателя, а
следовательно получить зачет по данной теме.

• навести порядок на рабочем месте.

7. Студенты, пропустившие занятие, должны отработать его в
установленный кафедрой день.

8. В часы самостоятельной работы, в период подготовки к
итоговому занятию, в вечернее время студент может получить набор
препаратов и микроскоп при предъявлении студенческого билета.

9. Все просьбы и указания лаборанта кафедры во время
самостоятельной работы должны выполняться студентом.

10. Контроль за выполнением данных правил работы и дисциплины возлагается на старост групп и дежурных групп.

Микроскопическая техника - это приготовление гистологического препарата и основные приемы его изучения с помощью микроскопа.

Существуют сотни различных методов, позволяющие получить постоянные контрастно окрашенные микропрепараты различных клеток и тканей животных. Можно изучать такие препараты с помощью разных микроскопов - светового, фазово-контрастного, люминесцентного, в "темном поле", ультрафиолетового и, наконец, электронного. Для разных способов микрокопирования требуется и специальные методы приготовления препаратов.

Мы разберем основные методы приготовления препаратов для последующего изучения их в световом микроскопе. Так как наблюдение производится преимущественно в проходящем свете, то объекты должны иметь небольшую толщину и большую прозрачность.

Препарат может представлять собой мазок или отпечаток ткани (например, крови, костного мозга, взвеси различных клеток), тотальный препарат (растянутая на предметном стекле пленка подкожной соединительной ткани), давленый препарат (раздавленный корешок лука при изучении митотических процессов) и, наконец, срезы различных тканей и клеток.

Цитологический и гистологический препарат может быть временным или постоянным. В первом - клетки могут быть живыми или находятся в состоянии переживания - такие препараты надо изучать сразу после их приготовления. Во втором случае он содержит предварительно убитые и окрашенные клетки. Постоянные препараты могут храниться годами.

Как постоянные, так и непостоянные препараты готовятся на предметных стеклах и покрываются сверху тонкими покровными стеклами толщиной 0,17 - 0,2 мм, через которые можно рассмотреть структуру при больших увеличениях микроскопов.

Обработка живого объекта для приготовления из него постоянного гистологического препарата включает в себя следующие моменты:

1. Взятие материала.

2. Фиксация.

3. Промывка.

4. Обезвоживание и уплотнение.

5. Заливка в плотные среды.

6. Изготовление срезов.

7. Окрашивание.

8. Просветление и заключение в среду, служащую для сохранения препарата.

Рассмотрим подробнее все названные этапы приготовления постоянного препарата и познакомимся со смыслом каждой из упомянутых процедур.

1. Взятие материала. Материал для гистологических препаратов берется от свежезабитых животных. Берутся кусочки органа около 0,5 см. Затем помещаются в фиксирующую жидкость.

2. Фиксирование или фиксация заключается в том, что кусочек подлежащего исследованию органа помещается на определенное время в фиксирующую жидкость, содержащую в себе вещества, быстро свертывающие белки. Такими веществами являются спирт, слабые растворы многих кислот (уксусной, азотной, хромовой и др.), формалин, соли металлов (сулема, двухромовокислый калий). Фиксаторы, состоящие из одного вещества, называются простыми. Например, кусочек органа можно зафиксировать 96% спиртом, либо 10-15% формалином, либо насыщенным водным раствором сулемы. Чаще применяются сложные фиксаторы, являющиеся смесями из нескольких простых. Во время фиксации происходят изменения в живом веществе, заключающиеся в денатурации (свертывании) белка. Фиксирующее вещество, убивая клетки, должно сохранить в максимальной степени их прижизненную структуру. Фиксация нужна не только для того, чтобы убить ткань. Важно также осадить и связать имеющиеся в клетке вещества и структуры, сделав их в клетке недоступными для извлечения или разрушения при последующей обработке ткани. Фиксатор должен повышать способность структур воспринимать гистологические красители. В фиксирующей жидкости кусочек остается до полного пропитывания ткани на всю глубину. Средний срок фиксации для формалина, если кусочек по объему не более 0,5 см - сутки.

3. Промывка - после фиксации кусочки промываются в проточной
водопроводной воде в течение суток для удаления фиксатора.

4. Обезвоживание или уплотнение- последовательная обработка несколькими спиртами постепенно возрастающей концентрацией (50°,60°, 70°, 90°, 100°). В спиртах из фиксированных кусочков отнимается вода и они становятся более плотными. Однако такой кусочек все-таки бывает еще недостаточно плотным, а главное, недостаточно однородным для того, чтобы из него можно было приготовить тонкий срез, необходимый для изготовления препарата. Поэтому вслед за уплотнением в спиртах следует заливка материала в специальные плотные среды.

5. Заливка производится в вещество, которое, пропитав весь кусочек, делает его плотным и однородным. Наиболее часто употребляются для этой цели парафин и целлоидин, Принцип заливки заключается в последовательном проведении кусочка через ряд жидкостей, из которых каждая предыдущая должна обладать способностью смешиваться с последующей. Схема заливки в парафин: 1) 100° спирт; 2) смесь 100° спирта и ксилола; 3) ксилол; 4) раствор парафина в ксилоле (смесь хранится в термостате при Т=+36 °С); 5) расплавленный парафин (в термостате Т=+56°С). После этого кусочек вместе с парафином заливается в формочку, где и застывает в плотный блок. Затем объект вместе с небольшим количеством окружающего его парафина вырезают в виде кубика, который приклеивается расплавленным парафином к подставке (деревянной), вместе называемый парафиновым блоком.

6. Изготовление срезов из парафиновых и целлоидиновых блоков производится на санном микротоме. Срезы изготовляют толщиной 4-7мкм. Затем срезы переносятся на предметное стекло. При необходимости получения препарата в короткий срок (с диагностической целью) используют замораживающий микротом, который позволяет изготовить срезы из только что зафиксированного кусочка (без обезвоживания и заливки). Кусочек помещается в капле воды на предметный столик микротома и замораживается сжатой углекислотой. Недостатком этого метода является то, что срезы получаются более толстыми, чем из парафиновых и целлоидиновых блоков.

7. Окраской достигаются цветовые выделения различных структурных частей клетки и ткани и усиление их контрастности. Для окрашивания служат различные естественные и синтетические красители, которые обладают различным рН. Основной принцип окраски заключается в избирательном окрашивании кислыми и основными красителями различных структур. К основным красителям принадлежат: гематоксилин (синий или фиолетовый), кармин (красный), азур (синий). К кислым красителям относятся: эозин (розовый), конго (оранжевый), анилиновый синий. В свою очередь многие клеточные и тканевые структуры также имеют кислую или слабощелочную реакцию. Например, ядра клеток всех тканей имеют кислую реакцию, так как содержат нуклеиновые кислоты Цитоплазма многих клеток слабощелочная, а у клеток, активно синтезирующих белок, слабо кислая. Разная кислотность вещества структур и обеспечивает избирательное окрашивание их красителями. Структуры, имеющие кислую реакцию, обладают сродством к основным красителям, поэтому их называют базофильными (ядра клеток базофильны, цитоплазма клеток, богатая РНК базофильна). Структуры, имеющие основную, щелочную реакцию, обладают сродством к кислым красителям и их называют оксифильными, или ацидофильными, или эозинофильными, если препарат был окрашен эозином. Например, цитоплазма большинства клеток, волокна межклеточного вещества. Окрашивая срез основными и кислыми красителями разных цветов (например, гематоксилином и эозином), можно получить контрастный препарат (базофильные структуры будут фиолетовыми, а оксифильные - розовыми). В таком препарате различные его структуры отличаются не только показателем преломления, но и цветом. Нейтральные красители - солеобразные соединения кислых и основных красителей. Пример нейтральной структуры в клетке - цитоплазматическая зернистость в клетке крови - нейтрофиле, она окрашивается и кислыми, и основными красителями в розово-фиолетовый цвет. Для выявления специфических веществ применяют специальные красители: например, для окраски жира берется краситель судан III, который окрашивает жир в оранжевый цвет. Краситель орсеин - окрашивает эластические волокна в тканях в коричневый цвет. В гистологической технике употребляется метод импрегнации (пропитывания), основанный на том, что из раствора солей, в которых находится материал, восстанавливаются свободные металлы и осаждаются на поверхности некоторых структур. Для импрегнации чаще всего применяются растворы азотнокислого серебра, четырехокиси осмия, хлорного золота. Импрегнация четырехокисью осмия используется для окрашивания жира и жироподобных веществ в черный цвет.

Метод импрегнации серебром особенно употребителен для выявления нервных клеток и их отростков, для обнаружения нервных окончаний, нервных волокон в соединительной ткани, органоидов клетки. Студентам следует объяснить, что такое аргентофильные клетки и аргирофильные структуры.

1. Аргентофильные клетки содержат вещества (серотонин), восстанавливающие серебро из его солей, эти клетки окрашиваются в темно-коричневый цвет (таковы, в частности, энтерохромаффинные клетки ЖКТ).

2. Аргирофильные структуры восстанавливают соли серебра только после добавления ьосстановителя (например, гидрохинона), эти структуры тоже приобретают коричневую окраску (таковы, например, некоторые эндокринные клетки и ретикулиновые волокна).

Кроме окрашивания фиксированного материала существует прижизненное окрашивание, когда неядовитый краситель (трипановая синь, тушь, нейтральный красный) вводят животному в кровь, подкожно, в брюшную полость или погружают кусочек живой ткани в раствор красителя, при этом краситель откладывается в клетках определенных видов.

8. .Подготовка срезов к окраске. Окраска препаратов. Разберём простейший метод окрашивания: гематоксилин + эозин. Так как большинство красителей - это водорастворимые растворы, то перед окраской срезы депарафинируются, то есть освобождаются от пропитывающего их парафина или целлоидина. Удаление парафина из среза осуществляется путем помещения его в стаканчик с толуолом, бензолом или ксилолом на 3-4 минуты. Далее срезы переносятся последовательно в стаканы со спиртами понижающейся концентрации (100°, 96°, 70°) и, наконец, в дистиллированную воду. Окрашиваются гематоксилином (приблизительно 5 мин), ополаскиваются в дистиллированной воде, окрашиваются эозином. Обезвоживаются в спиртах 70 °, 96 °, 100 °. Затем просветляются в карбол-ксилоле до исчезновения мути, а затем в чистом ксилоле.

9.3атем срезы заключаются. На срез наносится капля смолы (канадского бальзама), имеющий показатель преломления одинаковый со стеклом. Срез сверху покрывается покровным стеклом.

Наряду со световым микроскопом существуют другие оптические устройства, имеющие свои преимущества при изучении микропрепаратов.

Метод темного поля. Используется боковое освещение, при котором на темном фоне видно светлое изображение прозрачных объектов, благодаря отражению ими световых лучей.

Метод фазового контраста. С его помощью можно получить изображение объектов, невидимых при обычных методах исследования. Этот метод основан на различном преломлении света в зависимости от плотности структур.

Люминесцентная микроскопия. Освещения препарата производится сине-фиолетовыми или - ультрафиолетовыми лучами. При этом объекты, пропитанные специальными веществами - люминофорами, начинают светиться различными цветами.

Последним достижением микроскопической техники является электронная микроскопия, позволяющая получить увеличение объектов в десятки и сотни тысяч раз. Объект просматривается в потоке электронов, концентрация которых и направление на объект регулируется не оптическими линзами, а магнитными устройствами. Изображение изучаемого объекта видно на специальном экране микроскопа и фотографируется на пленку — получаются электронные фотографии.

Толщина среза-200А, разрешающая способность 4А, а светового-0,2 мкм.

В последнее время большое значение приобрела гистохимия, с помощью которой изучается распределение различных химических веществ в клетках, тканях. Метод основан на взаимодействии определенных химических компонентов живых структур со специфическими реактивами. Так, для определения ДНК в ядрах используется метод Фельгена. Гистохимическими методами выявляются РНК, гликоген, ферменты и другие вещества. Для изучения обмена веществ в клетках и тканях, включения в клетки питательных, распределение введенных питательных веществ и так далее. Большое значение имеет метод авторадиографии, суть которого состоит в введении радиоактивных химических элементов (Р, Н,С) в организм, которые затем попадают в ткани и клетки. Место нахождения введенного вещества определяется на гистологической препарате по излучению, которое улавливается чувствительной эмульсией, нанесенной на препарат.

В изучении живых объектов все большую роль приобретает культура тканей (выращивание тканей вне организма), микрокиносъемка (незаметные для глаза медленные процессы, протекающие в клетках, можно ускорить на экране во много раз).

Работа с микроскопом.

Общее увеличение микроскопа равно произведению увеличения объектива и окуляра.

Начинать работу с микроскопом нужно с установки его на место (до защелкивания) объектива малого увеличения и освещения поля зрения, либо используя вогнутую поверхность зеркала, либо с помощью осветителя. Препарат кладется на столик микроскопа обязательно покровным стеклом вверх и устанавливается в фокусе вращением микрометрического винта. Для общего знакомства с препаратом его необходимо сначала рассмотреть при малом увеличении, постепенно передвигая его рукой слева на право, сверху вниз. После изучения препарата при малом увеличении установить нужное место в центре поля зрения, закрепить препарат зажимом и перевести микроскоп на большое увеличение. Уловить изображение объекта осторожным вращением микрометрического винта, вращая его не больше, чем на один оборот. При большом увеличении необходимо работать микровинтом, для рассмотрения препарата в глубину, что дает более полное представление об изучаемых структурах. Для улучшения освещенности и контрастности допускается перемещение конденсора (винт справа ниже столика). Закончив работу с микроскопом, нужно перевести его на малое увеличение. Наибольшее увеличение дают объективы с цифрами 90, 100, которые называются иммерсионными, так как линзы этих объективов погружаются в определенную среду (в воду - водная иммерсия, в иммерсионное масло - масляная иммерсия). Среда, в которую погружается объектив, препятствует рассеянию лучей, что улучшает качество изображения. При работе с иммерсионными объективами требуется большая осторожность обращения с микровинтом. Во избежание повреждения препарата и линзы объектива, расстояние между которыми очень мало, допустим лишь незначительный поворот винта в ту или другую сторону. Иммерсионные объективы используются в учебном процессе для демонстрационных препаратов (на занятиях по теме "Кровь").

Правила ведения альбомов

1, На альбоме должна быть написана фамилия и инициалы
студента, номер группы, факультет.

2. Первый лист альбома должен быть разграфлен по схеме,

№	Наименование	Дата пропуска	Дата	Оценка по
п/п	темы.	лекции	отработки	итоговому
		занятия	пропущенного	занятию
			занятия
1.
2.
3.

Оценка работы студента за год:

3. К ведению альбома предъявляются следующие требования:
а) аккуратность

б) каждое занятие начинать с нового листа, где указывается дата, тема

в) на листе альбома размещать не более 4 рисунков

г) делать зарисовки препаратов только на одной стороне листа

д) обязательно указывать все обозначения, перечисленные в методической разработке

е) обозначения писать без сокращения и только горизонтально, подписи карандашом не разрешаются

4. При зарисовке препарата:

а) указать № препарата, название, окраску

б) обратить внимание на форму и размер различных клеток, их ядер, волокон

в) сродство к красителям цитоплазмы клеток, ядер и так дел ее

г) топография отдельных клеток

д) различия в строении различных видов клеток, тканей

5. Запрещаются грубые приемы зарисовки препаратов, условные изображения структур, слоев, штриховка.

Беседа со студентами.

В заключении занятия преподаватель проводит беседу со студентами. Какими качествами должен обладать человек, избравший профессию врача? Прежде всего, человек, избравший профессию врача должен сильно и бескорыстно любить людей, ибо в этой особой любви заложены корни сострадания к больному человеку, чуткость и внимание, потребность делать людям добро и находить в этом свое счастье. Доброта для врача, медицинской сестры, санитарки - качество, которое больные больше всего ценят. Врачу приходиться сталкиваться с интимными сторонами жизни больного человека, доверяющего ему свои личные и семейные тайны, поэтому безразличие, равнодушие, черствость несовместимы с профессией врача.

Врач должен быть честным и трудолюбивым, так как трудиться ему приходиться всю жизнь, нередко забывая о сне и отдыхе, будь он дома или в пути, то есть всюду, где требуется врачебная помощь, он должен ее оказать. Трудолюбие врача необходимо не только в его повседневной профессиональной деятельности, но и в осуществлении непрерывного совершенствования своих теоретических знаний. Знания и навыки, полученные в институте должны постоянно совершенствоваться и пополняться, ибо становление врача как специалиста - это долгий и трудный путь, это происходит в процессе накопления личного опыта, изучения опыта других и постоянного самообразования. Врач должен постоянно развивать в себе наблюдательность, позволяющую ему увидеть, запомнить и оценить с медицинской точки зрения малейшие изменения в состоянии больного человека. Наблюдательность в сочетании с подвижным ассоциативным мышлением и с большой профессиональной и общей эрудицией обеспечивает врачу высокий уровень клинического мышления - важнейшую сторону диагностического и лечебного процесса.

Врачу необходимы максимальная самокритичность и высокое чувство ответственности, любого рода зазнайство и мнимое всезнайство всегда опасны и нередко служат причиной непоправимых ошибок, которые могут стоить больному жизни. Самокритичность и честность - неотъемлемые качества врача. Врачу также необходимы большое самообладание, выдержка, профессиональное мужество в сочетании с решительностью и большой осторожностью.

Врача в поведении должна отличать скромность, корректность, умеренность во всем. Он должен обладать высокой общей культурой, быть всесторонне развитым человеком. "Врач должен быть ясным умственно, чистым нравственно и приятным физически" (А. П. Чехов).

9. Вопросы для самоподготовки (приложение №1)

10. Тестовые задания по теме (приложение №2)

11. Ситуационные задачи по теме (приложение №3)

Рекомендации по УИРС

Написание рефератов:

1) Основные приборы для изготовления срезов. Их преимущества и недостатки.

2) Общая классификация гистологических красителей. Их направленное действие.

3) Метод культивирования тканей вне организма.

4) Основные назначения методов гистохимии.

5) Типы роста тканевых культур.

Перечень практических умений

Студент должен уметь:

1. Микроскопировать гистологические препараты.

Стандарты ответов

Правила пользования микроскопом:

1) Микроскоп переносят, держа одной рукой за тубусодержатель, а другой поддерживая основание.

2) Микроскоп располагают на рабочем месте фронтальной частью к источнику света.

3) Включают малое увеличение.

4) Устанавливают зеркало так, чтобы равномерно осветить поле зрения. Эту операцию производят под контролем глаза.

5) На предметный столик помещают препарат покровным стеклом вверх.

6) Макровинтом приближают объектив малого увеличения к препарату и поднимая тубус под контролем глаза фокусируют объект.

7) Конденсором обеспечивают оптимальное освещение препарата.

8) Отыскивают необходимую часть препарата и изучают ее.

9) При необходимости перейти на большее увеличение – поворачивают револьвер с включением объектива большого увеличения.

10) Микровинтом фокусируют объект на большом увеличении, а конденсором обеспечивают оптимальное освещение препарата.

11) Перемещение препарата на большом увеличении производят центричными винтами предметного столика.

12) В случае перехода на новый участок объекта, следует вернуться к малому увеличению и с помощью последнего найти необходимую часть препарата. После этого включить объектив большого увеличения.

13) После окончания работы с микроскопом ставят объектив малого увеличения и поднимают конденсор до упора.

Список литературы

Основная литература:

1. Кузнецов С.Л. Гистология, цитология, эмбриология: Учебник для мед. вузов/С.Л. Кузнецов, Н.Н. Мушкабаров. – Москва: Мед. информ. агентство, 2005. – 600с.

Дополнительная литература:

1. Атлас по гистологии: Учебное пособие/Ред А.С. Пуликов, Т.Г. Брюховец; Колл. авт. Красноярская мед академия. – Красноярск: КрасГМА, 2004. - 128с.

Методические пособия, рекомендации:

1. Гистология: Комплексные тесты: ответы и пояснения: Учебное пособие/ С.Л. Кузнецов, Ю.А. Челышев – Москва: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2001. – 312с.

2. Пуликов А.С. Толковый словарь гистологических терминов/А.С. Пуликов, Л.Е. Сухова; Колл. авт. Красноярская мед. академия. – Красноярск: ИПЦ «КАСС», 2004. – 37с.

3. Ситуационные задачи для студентов/Сост. Н.Н. Медведева, Л.Е. Сухова, Л.Г. Левкович Л.Г. и др.; Колл. авт. Красноярская мед академия. – Красноярск: КрасГМА, 2007. – 86с.

4. Тестовые задания по гистологии, эмбриологии, цитологии для студентов 1-2 курсов по специальности “лечебное дело”/Сост. Н.Н. Медведева, Л.Е. Сухова, Л.Г. Левкович и др.; Колл. авт. Красноярская мед. академия. – Красноярск: КрасГМА, 2007. – 80с.

5. Гистология, эмбриология, цитология (стандарты практических навыков и умений для студентов 1-2 курсов по специальности “лечебное дело”)/Сост. Н.Н. Медведева, Л.Е. Сухова, Е.А. Хапилина; Колл. авт. Красноярская мед академия. – Красноярск: КрасГМА, 2007. – 44с.

Приложение №1

Вопросы для самоподготовки

1. Назовите основные этапы изготовления гистологического препарата.

2. Что такое фиксация и в чем ее сущность?

3. Какие наиболее употребляемые в гистологической практике простые и сложные химические фиксаторы вы знаете?

4. Какие плотные среды используются для объектов с целью последующего изготовления гистологических препаратов?

5. Какова последовательность заделки объектов в парафин?

6. Какова последовательность заделки препаратов в целлоидин?

7. Как называются приборы для изготовления срезов? Их типы, преимущества и недостатки.

8. Какие гистологические структуры называются оксифильными, базофильными и нейтрофильными?

9. Общая характеристика и классификация гистологических красителей.

10. В чем сущность метода авторадиографии?

11. В чем сущность метода импрегнации?

12. В чем значение гистохимии?

13. Укажите наиболее распространенные способы микроскопического изучения живых объектов.

14. В чем заключается метод культивирования тканей вне организма? Его преимущества и недостатки.

15. Какие условия необходимы для культивирования тканей вне организма?

16. Каковы типы роста тканевых культур?

17. Назовите фиксаторы, используемые в электронной микроскопии.

18. Какие среды используются для уплотнения в электронной микроскопии?

19. Что составляет оптические части микроскопа?

20. Что составляет механические части микроскопа?

21. Что составляет осветительную часть микроскопа?

22. Какие основные свойства линз микроскопа? Факторы, влияющие на них.

23. Какие виды объективов и окуляров различают? Их особенности.

24. Как определить общее увеличение микроскопа?

25. Назначение диафрагмы и конденсора.

26. Какой предел увеличения светооптического микроскопа?

27. Основные правила микроскопирования гистологических препаратов.

28. Каков принцип действия и назначения бинокулярного, фазово-контрастного, поляризационного, темнопольного, ультрафиолетового, люминисцентного и электронного микроскопов?

Эталоны ответов на вопросы для самоподготовки

1. 1) Взятие материала; 2) фиксация; 3) промывка; 4) обезвоживание; 5) уплотнение; 6) заливка; 7) изготовление срезов; 8) окраска; 9) заключение.

2. Цель фиксации – сохранение структуры изученной ткани или органа наиболее близкой к прижизненной. При фиксации происходят сложные физико-химические изменения, наиболее существенными из которых является коагуляция белков.

3. Простые фиксаторы: формалин (10% водный раствор формальдегида), этиловый и метиловый спирты (96-100%).

Сложные фиксаторы состоят из нескольких компонентов, взятых в определенных пропорциях, например: жидкость Ценкера (водный раствор сулемы, двухромокислого калия, сернокислого натрия, ледяная уксусная кислота), жидкость Карнуа (абсолютный спирт, хлороформ, ледяная уксусная кислота).

4. Целлоидин, парафин.

5. Из абсолютного спирта кусочек помещают в смесь растворителя парафина (ксилол) и абсолютного спирта, взятых в равных количествах. Затем объект проводят через 2-3 порции чистого ксилола с целью замещения им спирта, не смешивающегося с парафином. Далее приступают к пропитыванию материала, погружением его в насыщенную смесь парафина в ксилоле при температуре 37º С, затем в чистый расплавленный парафин (две порции) при температуре 54-56º С.

6. Целлоидин представляет собой специальным способом приготовленную целлюлозу. Материал из абсолютного спирта переносят в смесь равных частей этилового эфира и абсолютного спирта, являющуюся растворителем целлоидина и затем последовательно в 2%, 4%, 8% целлоидин. Пропитывание объекта целлоидином происходит медленно. В каждом из этих растворов кусочек выдерживают в течение 7-14 дней.

7. Микротомы. В швейном и ротационном микротоме микротомный нож закреплен неподвижно, а объект закрепляется в подвижном столике. В санном и замораживающем микротомах блок укрепляется в блокодержателе, а движущийся в горизонтальном направлении нож, режет блок. Замораживающий микротом используется для изготовления срезов из фиксированного и нефиксированного материала без заделки в уплотняющие среды. Уплотнение происходит посредством замораживания объекта жидкой углекислотой. Преимуществом этого микротома является возможность приготовления срезов для экспресс-диагностики. Недостатком его является невозможность получения срезов толщиной менее 15 мкм. Микротомы-криостаты применяются для приготовления гистологических срезов при проведении гистохимических реакций.

8. Структуры, проявляющие кислые свойства, а окрашивающиеся основным красителем, называются базофильными. Структуры, проявляющие основные свойства, а окрашивающиеся кислым красителем, называются оксифильным. Структуры, окрашивающиеся и кислым и основным красителями, называются нейтрофильными.

9. Цель окрашивания – сделать отчетливо видными различные компоненты клеток и тканей. Гистологические красители условно можно разделить на общие и специальные. Общие красители используются для изучения общей морфологии клеток, тканей, органов. Они окрашивают ядро и цитоплазму. По источникам получения, гистологические красители бывают натуральными и синтетическими. В зависимости от электролитических свойств красители разделяют на:

1) основные – красящие основания или их соли (гематоксилин, кармин, азур);

2) кислые – кислоты с красящими свойствами или их соли (эозин, кислый фуксин, пикриновая кислота);

3) нейтральные – красящие смеси (азур II-эозин, гематоксилин-эозин).

10. Авторадиография применяется для изучения динамики различных биосинтезов в конкретных морфологических структурах, перемещения веществ в пределах клеток, тканей и организма. В организм вводят меченые радиоактивные изотопы, химические соединения, которые включаются в обмен веществ. Для регистрации места расположения таких веществ на гистологический срез наносят в темноте слой фотоэмульсии, фиксируют подобно фотонегативу, срез окрашивают. В участках, где фотоэмульсия соприкасается с радиоактивным веществом, происходит фотореакция, образуются засвеченные участки.

11. Импрегнация – обработка кусочков тканей или срезов растворами солей тяжелых металлов с последующим восстановлением последних до металлического состояния (импрегнация нитратом серебра).

12. Гистохимические методы – комплекс способов гистологического исследования, в основе которых лежат цветные гистохимические реакции, протекающие между реактивом и исследуемым веществом. Позволяет выявить распределение различных химических компонентов.

13. Витальные (прижизненные) методы исследования можно разделить на две группы:

1) исследование живых объектов, извлеченных из организма (in vitro);

2) исследование живых тканей без полного нарушения связей с организмом (in vivo).

Суть первого метода заключается в выращивании клеток и тканей в искусственно созданных условиях. Этот метод позволяет изучить рост клеток, тканей, их взаимодействие, развитие и т.д. Второй метод позволяет изучить ткани при имплантации их в переднюю камеру глаза, под капсулу почки, в подкожную клетчатку. Выращиваемая ткань находится под контролем регулирующих систем организма.

14. Метод позволяет изучить в строго контролируемых условиях: рост клеток и тканей, их взаимодействие, развитие, дифференцировку, а также происходящие в них изменения под действием различных факторов. Метод позволяет эксперименты с клетками, полученными от человека. Можно наблюдать увеличение массы живого вещества, движение клеток, их деление и заснять эти процессы на кинопленку. Недостатком метода является нестандартность и сложность стерилизации сред.

15. Для культивирования ткани вне организма необходимо соблюдать следующие условия:

1) размер кусочка не должен превышать 1 мм³;

2) при взятии материала должны соблюдаться правила асептики;

3) культивирование в специальной посуде в специальных средах;

4) важное значение для роста имеет осмотическое давление (среда изотонична), рН=7, t=+20-25ºС для холоднокровных и 37-38º С для теплокровных животных;

5) питательная среда периодически обновляется.

16. Типы роста тканевых культур:

1) цитологический рост, при котором культура утрачивает признаки ткани или органа;

2) гистологический рост, при котором культура некоторое время сохраняет признаки исходной ткани;

3) органотипический рост, при котором культура некоторое время сохраняет признаки, характерные для исходного органа.

17. Фиксация материала производится фиксирующими веществами, не вызывающими грубой коагуляции белков (забуференным 2-4% раствором глютаральдегида или четырехокиси осмия и др.). Фиксация осуществляется на холоде в течение нескольких часов.

18. Для уплотнения используются полимеризующиеся вещества: эпоксидные смолы – аральдид, эпон 812 и др.

19. 1) Объективы

2) Окуляр

3) Зеркало

4) Конденсор

5) Диафрагма

20. 1) Основание

2) Тубусодержатель (колонка)

3) Предметный столик

4) Револьвер

5) Тубус

6) Макровинт

7) Микровинт

8) Механизм перемещения конденсора

21. К осветительным частям относятся: зеркало, осветительный аппарат, состоящий из конденсора, вставленного в оправу, на нижней части которой укреплена диафрагма.

22. Свойства линз микроскопа:

1) Увеличение – способность раздвигать лучи, идущие от объектива. Зависит от кривизны линзы – чем больше кривизна, тем больше увеличение.

2) Качество изображения (определяющая способность) характеризуется четкостью изображения и зависит от степени исправления основных оптических недостатков линзы – сферической и хроматической аберрации.

23. Объектив – основная оптическая часть микроскопа, которая создает изображение препарата. Является системой линз. Различают:

1) объектив малого увеличения (8);

2) объектив среднего увеличения (20);

3) объектив большого увеличения (40);

4) иммерсионный (масляный) – 90.

В зависимости от того, какая среда находится между объективом и препаратом, объективы именуются сухими (воздух) или иммерсионными (жидкость).

Окуляр – оптическая часть микроскопа, используемая для рассмотрения изображения, построенного объективом. Простой окуляр состоит из двух плосковыпуклых линз, обращенных выпуклой поверхностью в сторону объектива. Между линзами находится диафрагма с постоянным отверстием. На верхней линзе (глазной) указывается увеличение окуляра (7х, 10х, 15х и т.п.).

24. Увеличение объектива умножить на увеличение окуляра.

25. Диафрагма – служит для регулирования четкости изображения деталей препарата. Она состоит из тонких серповидных пластинок, которые заходят одна за другую и образуют округлое отверстие.

Конденсор – собирает лучи света и фокусирует их на препарате, обеспечивая достаточное и равномерное освещение последнего.

26. Около 1500 раз.

27. Правила пользования микроскопом:

1) Микроскоп переносят, держа одной рукой за тубусодержатель, а другой поддерживая основание.

2) Микроскоп располагают на рабочем месте фронтальной частью к источнику света.

3) Включают малое увеличение.

5) На предметный столик помещают препарат покровным стеклом вверх.

7) Конденсором обеспечивают оптимальное освещение препарата.

8) Отыскивают необходимую часть препарата и изучают ее.

11) Перемещение препарата на большом увеличении производят центричными винтами предметного столика.

13) После окончания работы с микроскопом ставят объектив малого увеличения и поднимают конденсор до упора.

28. 1) Бинокулярный микроскоп – это световой микроскоп с бинокулярной насадкой, которая вставляется в головку тубусодержателя микроскопа. Она дает возможность рассматривать объект двумя глазами, улучшает видимость объекта и сохраняет зрение.

2) Фазово-контрастный микроскоп – применяется для получения четких контрастных изображений живых или неокрашенных объективов, содержащих структуры по разному преломляющие световые лучи.

3) Поляризационный микроскоп – выявляет в гистологическом объекте изо- и анизотропные структуры.

4) Темнопольный микроскоп – применяется для изучения прозрачных, слабо преломляющих свет объектов, не видимых при освещении обычным способом. Для создания темнопольного освещения используются специальные конденсоры темного поля. Исследователь наблюдает светящиеся части изображения на темном фоне.

5) Ультрафиолетовый микроскоп – дает возможность уменьшить разрешаемое расстояние до 0,1 мкм вследствие применения более коротких фиолетовых лучей. В качестве источника их используется фтутнокварцевая лампа. Возможно изучение спектров поглощения с помощью микроспектрофотометра, благодаря чему можно установить присутствие и определить количественное содержание некоторых химических компонентов в изучаемом объекте.

6) Люминисцентный микроскоп – используется для изучения распределения ряда химических компонентов в гистологических структурах. Применение ультрафиолетовых или коротких синих лучей вызывает свечение веществ в строго определенных частях спектра. Ценность метода заключается в том, что можно наблюдать объекты малоотличающиеся по внешнему виду (разница химического состава).

7) Электронная микроскопия – представляет возможность получить изображение объектов, величина которых в среднем имеет около 0,1-0,7 нм. Высокая разрешающая способность обусловлена применением электронных лучей (поток электронов), источником которых является электронная пушка. С помощью микроскопа возможно изучение ультраструктур клеток и их производных, вирусов.

Приложение 2

Тестовые задания по теме

Укажите последовательность гистологических этапов:

а) фиксация, уплотнение, приготовление среза;

б) приготовление среза, фиксация, окраска, уплотнение;

в) окраска, приготовление среза, заливка, обезвоживание;

г) фиксация, промывка, обезвоживание, уплотнение, заливка, приготовление среза, окраска, заключение.

Цель фиксации:

а) изменение структурного состава;

б) сохранение структур соответственно прижизненному состоянию;

в) удаление воды;

г) уплотнение тканей.

Дата добавления: 2018-10-27; просмотров: 912; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

12 3 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!