ИММУНОБЛОТИНГ (Вестерн-блот).
СПИД
СПИД - это инфекционная болезнь, вызываемая вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Известно, что вирус передается, главным образом, из-за определенных особенностей образа жизни, которые можно предупредить.
Из-за отсутствия вакцины для предупреждения заражения ВИЧ или способов лечения данных заболеваний, главным методом предупреждения распространения заражения СПИД является медико-санитарное просвещение и консультирование, которые приводят к изменению стереотипов поведения, предупреждающему передачу ВИЧ.
Клиническая стадия заражения ВИЧ начинается с того момента, когда человек заражается ВИЧ в результате полового акта с инфицированным лицом либо переливания или инъецирования зараженной крови или продуктов крови, либо перинатальной передачи от зараженной женщины ребенку до родов, в процессе или вскоре после родов. Вирус проникает в клетки или макрофаги, в которых он размножается и затем поражает другие клетки. Вирус поражает неинфицированные клетки, нарушает их функцию. Со временем эти нарушения функции клеток начинают проявляться ввиде клинических симптомов. После заражения лицо считается заразным (способным передать вирус другим людям) в течение всей жизни.
Заражение ВИЧ считается непрерывным процессом, начиная с первичной инфекции до непродолжительного острого заболевания, за которым следует хроническое заболевание по прошествии месяцев или лет и серьезнейшие проявления позднего заболевания ВИЧ, которое называется СПИД. Течение болезни отличается своим непредсказуемым и нерегулярным характером:
|
|
|
| Инкубационный период | Недели или месяцы (в среднем 6 недель) |
| Острое заболевание | 1-2 недели |
| Бессимптомная серопозитивная стадия* | Месяцы-годы (в среднем 7 лет) |
| Симптомная серопозитивная стадия* | Месяцы-годы |
| СПИД | Месяцы-годы |
- тестирование на антитела дает положительные результаты,
Через 3-8 недель после заражения, у инфицированного лица, как правило, развивается острое заболевание, продолжающееся 2-3 недели и характеризующееся такими симптомами, как повышение температуры, сыпь, боль в суставах и мышцах, болезнь горла. Эти симптомы могут быть слабовыраженными и обычно полностью исчезают через некоторое время. Однако вирус продолжает развиваться в организме, и иммунная система инфицированного лица реагирует на него путем выработки антител к вирусу.
Антитела к ВИЧ можно, как правило, обнаружить в крови в течение 6- 26 недель после заражения. В отличие от антител к большинству микроорганизмов эти антитела неспособны уничтожить вирус. У некоторых инфицированных лиц эти антитела невозможно выявить даже через месяцы или годы после заражения, однако эти люди все равно считаются заразными.
|
|
|
После перенесения острого заболевания у большинства зараженных ВИЧ лиц наблюдается ослабленное функционирование иммунной системы, однако, в течение некоторого периода времени, у них обычно симптомы отсутствуют. По прошествии месяцев или лет у инфицированного лица могут наблюдаться не считающиеся окончательными симптомы СПИДа как то:
· Распухшие железы, особенно в области шеи, паха, подмышечных впадин, причем эта припухлость продолжается без сколько-нибудь явных на то причин
· Постоянное чувство усталости
· Периодические беспричинные лихорадочные состояния или потение по ночам
· Потеря веса на 10% и более
· Хроническая диарея
Эти симптомы не носят сколько-нибудь выраженного специфического характера, и их следует рассматривать вызванными ВИЧ лишь в том случае, если некоторые из этих симптомов продолжаются от нескольких недель до месяцев, или если имеются соответствующие дополнительные признаки проявляющихся симптомов физического характера в анамнезе. Такой комплекс симптомов называют иногда СПИД-ассоциативным состоянием (САС), Кроме того, такие заболевания как кандидозный стоматит, опоясывающий герпес, туберкулез легких, фолликулит и бактериальная пневмония, отмечаются обычно до того, как может быть поставлен диагноз СПИД, что свидетельствует о повышенном риске заболевания СПИД.
|
|
|
Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД)
СПИД представляет собой конечную стадию клинического процесса заболевания ВИЧ. Существуют два определения диагноза СПИД, которые используются для предоставления соответствующей информации в ВОЗ. Одно определение, разработанное ВОЗ, основывается на клинических признаках, а второе - из Центра Борьбы с Болезнями (ЦББ/ВОЗ) - основывается на результатах тестирования антитела, а также четкого диагностирования других заболеваний, часто ассоциирующихся со СПИД. То определение, которое используется применительно к той или иной конкретной стране, будет зависеть от способностей и возможностей по проведению тестирования на антитела к ВИЧ при диагностировании заболевания, характерного для СПИД.
Данный диагноз СПИД основывается на клинических симптомах и результатах теста на антитела к ВИЧ. Диагноз СПИД устанавливается в случае выявления у пациента одного из конкретных заболеваний, фигурирующих в перечне (оппортунистические инфекции и отдельные виды рака) и свидетельствующий о лежащем в основе заболевания иммунодефиците. При этом следует исключить возможность других причин иммунной недостаточности.
|
|
|
О заболевании СПИД у взрослых свидетельствует наличие не менее двух основных признаков, связанных с не менее чем одним второстепенным признаком при отсутствии известных случаев подавления иммунитета, таких как рак или серьезное нарушение или недостаточность питания вследствие другой признанной этиологии.
Основные симптомы:
• Потеря веса - 10% от веса тела
• Хроническая диарея - один месяц
• Продолжительная лихорадка - один месяц
• Вторичные симптомы:
Упорный кашель на протяжении месяца
• Генерализованный зудящий дерматит
• Рецидивирующий опоясывающий герпес
• Глоточно-ротовой кандидоз
• Хроническая прогрессирующая и диссеменированная герпетическая инфекция (простой герпес)
• Генерализованная лимфоаденопатия
•
Для постановки диагноза СПИД достаточно наличие только лишь генерализованной саркомы Капоши или стрептококкового менингита. Заболевание СПИД у детей можно предположить, если у грудного младенца или ребенка присутствует не менее двух из следующих симптомов, сопровождающихся не менее чем двумя следующими второстепенными симптомами, при отсутствии известных случаев подавления иммунитета, обусловленного, например, раком или серьезным нарушением питания, или другим заболеванием признанной этиологии;
Основные симптомы:
• Потеря веса или ненормально медленный рост
• Хроническая диарея, продолжающаяся более одного месяца
• Затяжная лихорадка, длящаяся более одного месяца Вторичные признаки:
• Генерализованная лимфоаденопатия
• Рецидивирующие инфекции общего характера (отит, фарингит и т.д.)
• Глоточно-ротовой кандидоз
• Упорный кашель
• Генерализованный дерматит
• Подтверждение заражения ВИЧ у матери
СПИД характеризуется наличием оппортунистических заболеваний. Оппортунистическая болезнь - это болезнь, которая обычно не создает проблем, если организм способен бороться с ней с помощью иммунной системы, но которая становится серьезной проблемой в случае возникновения иммунодефицита. Причиной многих из этих заболеваний являются микроорганизмы, которые используют предоставленную в результате ослабления иммунной системы организма возможность для своего роста, размножения и инициации болезни. Кроме того, этими болезнями заболевают люди, иммунная система которых подавлена искусственным образом в результате проводившегося лечения. Такая терапия часто назначается пациентам, страдающим онкологическими заболеваниями или подвергшимся операции по пересадке органа. У здоровых людей эти микроорганизмы не привели бы к болезни. У людей, пораженных СПИД, отмечалось наличие целого ряда видов рака. Наиболее распространенным из них является саркома Капоши, вызывающая появление плоских или приподнятых участков кожи розового или пурпурного цвета.
Лечение
Радикальная терапия СПИДа остается не решенной проблемой. Выделяют ряд направлений в лечении больных СПИДом:
1. Этиотропная терапия.
2. Патогенетическая терапия.
3. Лечение оппортунистических состояний.
Этиотропные препараты воздействуют на возбудитель, в частности, на вирусную обратную транскриптазу. Это ацикловир, рибоверин, сурамин, азидотимидин. Последний препарат имеет наибольшую эффективность. К методам этиотропного лечения относят и применение интерферона и его аналогов в больших дозировках (реаферон, плаферон) для антивирусного воздействия.
Вторая группа медикаментозных средств, применяемых в плане иммунокоррекции - тимомиметики - тималин, тимозин, Т-активин, тимостимулин. Самым эффективным препаратом является интерлейкин-2.
Для терапии оппортунистических инфекций применяют массивные дозы антибиотикотерапии и иммуноглобулины. Для лечения пневмоцистной пневмонии используют в/в введения бисептола, 1-дифтормтилорнитина (ДМФО), для лечения герпеса - ацикловир, завиракс, виролекс и др. Микотические поражения лечат амфотеррицином В, саркому Капоши - винкристином и эпидодовиллотоксином.
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ.
Процесс формирования антител (гуморальный иммунный ответ) у ВИЧ-инфицированных лиц тесно связан с основными стадиями развития заболевания, к которым относятся: первичное инфицирование, латентный период, персистентная генерализорванная лимфаденопатия (ПГЛ), СПИД-ассоцииированный комплекс и собсвенно СПИД. На каждом этапе развития ВИЧ-инфекции, характеризующимся определенными иммунопатологическими особенностями, серодиагностика должна рассматриваться как часть комплексной оценки состояния пациента, включающей, помимо клинического обследования, ряд лабораторных тестов. Составной частью
последних является определение в крови и других биологических жидкостях ВИЧ-антител и антигенов. Наиболее распространенным способом первичной серодиагностики ВИЧ-инфекции являются определение суммарных антител с помощью скринингоавые пробы отборочных тестов - ИФА и агглютинационных реакций. На втором (арбитражном) этапе используют более сложные современные тесты (Иммуноблот (ИБ), РИП), которые позволяют не только подтвердить, (или отклонить) первоначальное заключение, но и сделать это на уровне определения антител к индивидуальным белкам вируса.
Иммуно-ферментный анализ.
ИФА - является основным и наиболее широко применяемым методом определения антител к ВИЧ. В ИФА последовательно взаимодействует иммуносорбент, исследуемая сыворотка, конъюгат и хромоген. Инкубация каждого компонента с предыдущим завершается промывкой планшета для удаления несвязавшихся остатков очередного реагента. Итогом реакции является окрашивание содержимого лунок (обычно желто-оранжевое), интенсивность которого регистрируют на спектрофотометре с вертикальным прохождением луча по показателям оптической плотности. Особенностью применения ИФА в серодиагностике ВИЧ-инфекции являются частые ложноположительные результаты (ЛПР). Именно поэтому результат в ИФА не является основанием для заключения о ВИЧ-серопозитивностипациента. Причины ЛПР многобразны. Наиболее простые технические причины заключаются в нарушении правил постановки ИФА, а именно в несоблюдении режима промывочных процедур, фотозасвечивании при инкубации на свету после внесения хромогена. В этих случаях увеличивается интенсивность окрашивания жидкости в лунках. ЛПР могут провоцироваться после повторного замораживания и оттаивания, а также после прогревания. Однако в основе большей части ЛПР лежат процессы специфического взаимодействия белковых компонентов испытываемой сыворотки, не относящихся к ВИЧ-антителам, и антигена-иммуносорбента. Можно выделить следующие основные причины причины ЛПР при ВИЧ-инфекции:
- недостаточная очистка иммуносорбента от балластных белков;
- спонтанное связывание антител сыворотки с пластиком, если его участки, не занятые иммуносорбентом, недостаточно блокированы или не блокированы совсем специальным нейтральным белком, например бычьим сывороточным альбумином;
- перекрестное взаимодействие с ВИЧ-белками иммуносорбента различных протеинов, присутствующих в крови лиц с определенными, чаще аутоиммунными патологическими процессами (рассеянный склероз, СКВ, лепра, туберкулез). К этой категории можно отнести ЛПР, связанные с частым донорством, инфекционны ми и онкозаболеваниями, ожогами, беременностью, повторными гемотрансфузиямия, пересадкой органов, тканей, а также лиц, находящихся на гемодиализе (6-8%);
- "эндемическое" происхождение ЛПР - образцы из регионов с определенной краевой патологией (малярия, висцеральный лейшманиоз), ведущей к структурной модификации сывороточных иммуноглобулинов, после которой они начинают взаимодействовать с белками ВИЧ;
- присутствие в крови ревматоидного фактора, часто провоцирующего ВИЧ-ЛПР. Ревматоидный фактор является мощным индуктором аутоиммунных процессов, сопровождающихся формированием антител с высокой степени гомологии к антигенным детерминантам некоторых белков ВИЧ, например gp 41. Кроме того, сам ВИЧ индуцирует аутоиммунные процессы. Из этого следует, что сыворотки ВИЧ-инфицированных больных и особенно больных СПИДом пациентов, положительные в ИФА, содержат, как правило, определенную долю ложноположительной активности, связанной с ВИЧ опосредованно;
- наличие в крови обследуемых людей антител к gag-белкам ВИЧ и прежде всего к белку P24. Это - одна из основных и наиболее значимых причин ЛПР в ИФА. Сыворотки, имеющие в ИБ антитела только к P24 (реже в сочетании с антителами к P17 и/или к P55) и не имеющие антител к основным диагностическим (поверхностным) белкам ВИЧ, составляют весьма часто встречающуюся и сложную для оценки категорию ЛПР-образцов. Существует ряд гипотез об их происхождении, в частности с наличием антител к экзо- или эндо- генным не идентифицированными ещеретровирусами. Вместе с тем анти-P24 синтезируются в обязательном порядке на ранних стадиях ВИЧ-сероконвенрсии. Поэтому практически обоснованным является иммунологическое наблюдение за лицами с антителами к gag-белкам ВИЧ, а также отстранение их от донорства.
ИММУНОБЛОТИНГ (Вестерн-блот).
Является фактически конечным верификационным методом в цепи серологических исследований, позволяющих сделать окончательное заключение о ВИЧ-позитивности пациента или же отвергнуть таковую. Для постановки ИБ используют нитроцеллюлозные полоски, на которые методом горизонтального и затем вертикального иммунофорезазаранее перенесены белки ВИЧ в порядке нарастания их молекулярных масс. Антитела испытываемых сывороток взаимодействуют с белками определенных зонах полоски. Дальнейший ход реакции не отличается от такового для ИФА, то есть предусматривает обработку полоски (стрипа) конъюгатом и хромоген-субстратом с отмыванием не связавшихся компонентов и прекращением реакции дистиллированной водой.
Предварительное электрофоретическое разделение белков и их фиксацияна нитроцеллюлозе позволяет идентифицировать антитела к конкретным белкам в соответствии с наличием (или отсутствием) окрашивания (серовато-голубого) соответствующих зон полоски. Иммуноблотинг не может использоваться для массового скрининг исследования вследствие высокой стоимости и является методом индивидуального арбитража на заключительном этапе серологического исследования.
Существует достаточно четкие корреляции между результатами исследования сывороток в ИБ и ИФА. Дважды положительные в ИФА (в разных тест-системах) сыворотки интерпретируются затем в ИБ как ВИЧ-позитивные в 97-98% случаев. Сыворотки, положительные в ИФА лишь в одной из двух использованных тест-системах, оказываютсяВИЧ-позитивными в ИБ не чаще, чем в 4% случаев. При проведении подтверждающих исследований около 5% ИБ могут давать так называемые "неопределенные" результаты, которым, как правило, соответствуют положительные ИФА, но не РИП. Примерно в 20% случаев "неопределенные" ИБ вызывают антитела к gag- белкам ВИЧ-1 (p55, p25, p18). Однако есть данные о связи неспецифической реактивности с присутствием в сыворотке антител только к белку gp160 или gp41. В последнем случае обычно наблюдается одна четкая полоса в области gp41 вместо обычной для этого белка многополосной зоны окрашивания.
Наличие в сывортоке антител только к gag-белкам ВИЧ-1 всегда является поводом для дополнительного обследования пациента на инфицирование ВИЧ-2. Положительным результатом считается выявление не менее 2 (из 3-х возможных) env-полос, при наличии или отсутствии любых полос, соответствующих gag- и (или) pol-белкам. Отрицательному результату соответствует полное отсутствие полос. Другие профили принято относить к неопределенным результатам.
Дата добавления: 2018-06-01; просмотров: 144; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!