Серологические (ретроспективные) методы диагностики вирусных болезней.
Серологические методы могут быть использованы для обнаружения в исследуемом материале как специфических антител, так и вирусных антигенов. Для этой цели исследуют парные сыворотки крови больных животных, для получения которых от каждого животного кровь для исследования на наличие специфических антител берут дважды с интервалом в 2—3 нед: в начале заболевания (в острой фазе) и в конце его (в период выздоровления — реконвалесценции).
Серологические реакции: 1. Реакция связывания комплемента.2. Реакция пассивной гемагглютинации и ее варианты (РНАг, РНАт).3. Реакция торможения гемагглютинации.4. Реакция гемагглютинации иммунного прилипания (комплекс антиген + антитело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах),ИФА и тд.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Получение, обработка и транспортировка вируссодержащего материала в лабораторию.
Отбирают строго в асептических условиях, в стерильную посуду, как можно раньше(при появлении первых признаков или в первые часы гибели после смерти или принудительного забоя)не более 1-2 часов.
Взятие материала для выделения вируса исходя из патогенеза изучаемой инфекции(респераторные инфекции смывы глотки;энтеровирусы-кал;нейротропные и.-кусочки мозга, а так же кровь,лимфа и тд)Используют парные сыворотки.
Транспортировка и хранение: быстро обеспечить условия,для замедления инактивации вирусов.(низкие тампературы) В пробирки с пат.материалом в термос с охлаждающей смесью(лед,снег,повар.соль).Мазки отпечатки. Надежная и четкая этикетка(пластырь с надписью).На термосе этикетка (вид животного,хозяйство,материал и дата),сопроводительный документ.
|
|
|
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Титрование вирусов (значение, методы).
Определить кол-во вирусов в материале. Без него невозможно эксперементальное заражение вирусами живых лабораторных систем, производство живых и инактивированных вакцин,препаратов,иммунных сывороток. Кол-во вируса в материале опред-ся по титру вируса в материале.(концентрация).Титр вируса-это кол-во вируса,в единицы объема материала.
Методы:1)Методом бляшек(в культуре клеток) и оспины(некротические узелки)на ХАО кур.эмбрионов.2) По методу ЦПД(цитопатическая доза) определение конечной точки;3)М-д флуорисцирующих факторов.
Реакция нейтрализации.
Принцип :в пробирке соединяют одинаковые объемы сывор.крови и суспензии вируса и после выдержки определяют есть ли активный вирус.Отсутствие действия в. На тест-объект(отрицательная биопроба).Основана на способности специф.АТ блокировать инфекционные ,иммуноглобулины,цитопатичность,бляшкообразные св-ва вирусов. Используют разведение.Каждым одинаковым объемом заражают чувствит-х к вирусу лаб.животных.Есть формулы.
|
|
|
Решение задач:1)определить титр вируснейтрализ-х АТ в сыворотке;2) Идентифицировать вирус;3)Установить АГенное родство между вирусами
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Реакция диффузной преципитации.
Основана на способности к диффузии в гелях АТи растворимых АГ и отсутствие такой способности у комплекса АГ+АТ.
Диффузия-проникновение молекул1го вещ-ва между молекулами другого(тепловое движение).АГ вирусов-это вирусные белки.
Определяет вирус, титр АГ.(в чашках петри,на предметных стеклах).
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации.
Выявляют АТ сыворотки крови с помощью АГ эритроцит.диагностики,,на эритроцитах адсорбированы частицы АГ. Формирование осадка(специфич.серологич.реакц-я). В РГА эритроциты склеиваются(агглютинируются) в результате взаимод-я их рецепт. С рецепторами вируса., а в РНГА –комплекс АГ-АТ.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
|
|
|
Реакция связывания комплемента.
Заключается в том,что при соответствии друг другу АГ и АТ они образуют Иммунный комплекс ,к которому через Железо фрагмент АТ присоед.комплемент,т.е. присоединит РСК АТ и АГ.
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Реакция иммунной флуоресценции.-
Сущность в поглащении различных видов энергии(световую,электрическую), атомы в возбужд. состояние. Используют ультрофиолет.
Основывается на обнаружении иммунного комплекса ,образуется путем взаимодействия АГ и АТ, меченого
флуоресцентным(свечение) красителем.(1)свежий мазок отпечаток,2)мазок отпечаток из патологич. Материалов).АТ меченные флуорохромом ,называются КОНЬЮГАТОМ.
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 1650; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!