Сущность РСК и ее применение в диагностике вирусных заболеваний
Биопрепараты, их применение при вирусных заболеваниях и принципы изготовления.
Биопрепараты - иммунные сыворотки, вакцины и глобулины. Биопрепараты применяют при вирусных болезнях с лечебно-профилактической целью. Иммунные сыворотки-сыворотки, содержат большое количество антител против какого-либо заболевания. В технологии изготовления можно выделить следующие этапы: 1)подборреципиентов (лошади, КРС, свиньи, кролики), 2)карантинизация реципиентов, 3)иммунизация(вакцинация) реципиентов, 4) Сверх иммунизации (заключается в многократном введении АГ в организм животного для большей выработки АТ, 5) Эксплуатация (берут кровь и вводят очередную дозу АГ для активизации АТ, потом отстаивают 3 часа при 37 градусах и консервируют. Глобулины выделяют из полученной сыворотки спиртовым риваноловым методом т.е от болезни свиней выделяют АТ свиней.
Современная классификация вирусов.
Классификация вирусов включает различные иерархические уровни (таксоны): порядок; семейство; подсемейство;вид. Основа таксономии — это вид с высокой степенью фенотипичного свойства. Имеются ДНК содержащие вирусы: поксвиридэ, асфовиридэ,иридовиридэ, герпес. И РНК содержащие вирусы: ретровиридэ;дельтавирус; реовиридэ; парамиксовиридэ; пикорновиридэ; аренавиридэ;артериовиридэ;каронавиридэ. В основу современной классификации положены следующие основные критерии. 1) Тип нуклеиновой кислоты (РНК или ДНК), ее структура (количество нитей). 2. Наличие липопротеидной оболочки. 3. Стратегия вирусного генома. 4.Размер и морфология вириона, тип симметрии, число капсомеров. 5. Феномены генетических, взаимодействий. 6.Круг восприимчивых хозяев. 7. Патогенность, в том числе патологические изменения в клетках и образование внутриклеточных включений. 8. Географическое распространение. 9. Способ передачи.10. Антигенные свойства.Все вирусы независимо от круга естественных хозяев по фундаментальным признакам занимают в классификации следующие уровни (таксоны): порядок, семейство, подсемейство, род и вид. Однако, согласно правилам МКТВ, обязательными среди них считаются таксоны: семейство, род и вид.Ниже уровня вида существуют такие подразделения, как серотип, штамм, вариант, изолят. Их классификацией занимаются международные группы специалистов, которые принимают решение об отнесении того или иного изолята или группы изолятов в отдельный вид.Современная классификация позволила объединить все известные вирусы (имеющие таксономический статус) в три порядка, объединяющих семейства вирусов по сходной организации генома и единой стратегии репликации, 56 семейств, 9 подсемейств, 233 рода и 1550 видов. Вирусы позвоночных входят в 28 семейств, из которых 10 ДНК-содержащие и 18 — РНК-содержащие, и в два «свободных» рода. Некоторые из этих семейств имеют в своем составе также вирусы беспозвоночных и растений.
|
|
|
|
|
|
Врожденный иммунитет (видовой, естественный).
Иммунитет — невосприимчивость организма к чужеродному агенту, в частности инфекционному. Наличие иммунитета связано с наследственными и индивидуально приобретенными факторами, которые препятствуют проникновению в организм и размножению в нем различных патогенных агентов (бактерии, вирусы), а также действию выделяемых ими продуктов. Врожденный иммунитет является видовой особенностью животного и обладает очень высокой напряженностью. Человек обладает видовой невосприимчивостью к ряду инфекционных заболеваний животных (чума рогатого скота и др.), животные невосприимчивы к гонорее, брюшному тифу, проказе и др. В ряде случаев напряженность естественного иммунитета относительна (при искусственном снижении температуры тела птиц удается заразить их сибирской язвой, к которой они обладают видовой невосприимчивостью). - Видовой иммунитет наблюдается у всех особей данного вида. Различают видовой иммунитет абсолютный и относительный. Абсолютным называется такой вид иммунитета, когда заболевание у определенного вида животных невозможно вызвать ни при каких условиях. Относительным видовой иммунитет считается, если возможно его нарушение при определенных условиях (переохлаждении, перегревание, возрастные изменения).Естественный иммунитет включает врождённый иммунитет и приобретённый активный (после перенесённого заболевания), а также пассивный иммунитет при передаче антител ребёнку от матери.
|
|
|
4.Методы культивирования вирусов.
Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые. Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться invitro в определенных условиях. Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям. используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. Лабораторные животные. Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.Культивирование вирусов в организме естественно-восприимчивых животных.Данный метод имеет ограниченное применение; он используется в случаях, когда для изучаемого вируса нет биологической системы, на которой данный вирус успешно бы репродуцировался, минуя стадию адаптации, и когда есть заинтересованность сократить у выделенного вируса все исходные свойства (преимущественно патогенность и антигенные свойства). Культивирование вирусов в организме лабораторных животных. Многие виды лабораторных животных часто невосприимчивы в естественных условиях к определенному вирусу, однако при серийном пассировании и последующей адаптации он изменяет свои первоначальные свойства впроцессе репродукции в организме лабораторного животного. Этот метод до сих пор широко используется при диагностике и изучении ряда заболеванийживотных и человека, вызванных вирусами. Однако надо иметь в виду, что пассирование ряда эпизоотических штаммов вирусов на лабораторных животных ведет к изменению исходных биологических свойств и в первую очередь к утрате исходной патогенности и иммуногенности для естественного хозяина. Кроме того, этот метод требуетзначительных материальных затрат и создания специальных условий для организации опытов, и поддержания эпизоотической безопасности.
|
|
|
5.Характеристика сем. Поксвирусов.
Поксви́русы или вирусы оспы (лат. Poxviridae, от англ. рох — оспа + вирусы) — семейство вирусов животных, объединяющее самые крупные ДНК-содержащие вирусы, вирионы которых имеют кирпичеобразную или овоидную форму; включает виды, патогенные для человека, например, возбудителей оспы, пустулезного дерматита. Геном, представленный двунитчатой линейной гантелеобразной формы ДНК, покрыт двухслойным капсидом, между слоями которого находятся боковые тела. Поверх нуклеокапсида расположена двухслойная липопротеидная оболочка с воронкообразными фибрами. В семейство включают 2 подсемейства с 11 и 3 родами соответственно.Исследуют содержимое элементов сыпи, отделяемое носоглотки, кровь, пораженные органы и ткани. Вирус выявляют при электронной микроскопии, в РИФ. Выделяют вирус путем заражения куриных эмбрионов и культур клеток с последующей идентификацией в реакции нейтрализации (на куриных эмбрионах), РСК, РТГА. Серологическую диагностику проводят в РТГА, РСК, РПГА, реакции нейтрализации.Прочный иммунитет создает живая оспенная вакцина. Ее готовят из соскобов сыпи инфицированных телят или при культивировании вируса вакцины (осповакцины) на куриных эмбрионах.Вирус проникает в организм через слизистую оболочку верхних дыхательных путей и локализуется в регионарных лимфатических узлах. После первичной репродукции поступает в кровь, разносится по всему организму и локализуется в клетках лимфоидной ткани, в которых происходит вторичная репродукция вируса. Вирус выделяется из крови только в первые дни болезни. Кожные поражения появляются после его проникновения из крови в клетки эпидермиса. Образующиеся на коже пустулы могут быть контаминированы стафилококком, что приводит к бактериемии и даже сепсису. Интенсивное выделение вируса из организма происходит с 6-го по 9-й день болезни из очагов поражения слизистых оболочек рта. На месте пустул развивается некроз кожи, в результате у перенесших заболевание остаются рубцы. В клетках кожи появляются цитоплазматические, ацидофильные включения - тельца Гварниери.В репродуктивном цикле выделяют три стадии — начальную, раннюю и позднюю: Начальная стадия репродукции поксвирусов запускается сразу же после раздевания вируса и выхода вирусной ДНК в цитоплазму. Ранняя стадия репродукции поксвирусов. На этом этапе транскрибируется примерно половина вирусной ДНК. Синтезируются ферменты, кодируемые «ранними генами» и участвующие в репликации вирусной ДНК. Параллельно в небольшом количестве образуются структурные белки. Поздняя стадия репродукции поксвирусов совпадает с началом репликации ДНК (что переключает механизмы транскрипции на считывание второй половины генома). Регуляторные белки блокируют трансляцию «ранней мРНК» и запускают синтез поздних (структурных) белков. Сборка вирионов осуществляется только в цитоплазме посредством реакций мембранного синтеза. Высвобождение зрелых популяций сопровождается лизисом клетки.
Сущность РСК и ее применение в диагностике вирусных заболеваний.
РСК- реакция связывания комплемента. Цели: индикация идентификация и титрование вируса. Это сложная серологическая реакция в которой принимает участие две системы из пяти компонентов, каждый берется по 0.5. Первая система- исследуемая: стандартная сыворотка или стандартный вирус(АГ+АТ) 3 компонент-комплемент- неспецифический фактор белковой природы содержится в сыворотке крови, вторая система- гемолитическая 4 компонент- эритроциты барана, 5) -гемолитическая сыворотка, получается путем иммунизации кролика эритроцитами барана. Сущность реакции: если в исследуемой сыворотке имеется специфические АТ, то при добавлении АГ образуется комплекс АГ+АТ который адсорбирует на своей поверхности тройной комплекс АГ+АТ комплемент, жидкость мутная Р +, животное больное. РСК используют для определения вируса ящура в пат материале.
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 944; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!