Окраска жгутиков по методу Леффлера
а) приготовить мазок из 18–24-часовой культуры, для чего взвесь бактерий внести в каплю стерильной водопроводной воды, нанесенной на предметное стекло, и высушить;
б) мазок обработать в течение 15–20 минут протравой, содержащей
1 мл насыщенного спиртового раствора фуксина, 10 мл 25 % водного раствора танина и 5 мл насыщенного водного раствора серно-кислого железа;
в) мазок тщательно промыть водой, высушить на воздухе и докрасить фуксином Циля в течение 3–4 минут при легком подогревании;
г) препарат промыть водой и высушить.
Выявление спор способом Ожешки
а) приготовить мазок на краю предметного стекла;
б) нефиксированный мазок подвергнуть протравливанию кислотой при повышенной температуре, для чего на мазок налить 1 % раствор соляной кислоты и подогреть над пламенем горелки в течение 2–3 минут;
в) кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем.
При такой обработке оболочка споры размягчается и становится доступной для красителя. Далее мазок 13.окрасить по методу Циля – Нильсена:
а) на мазок поместить кусочек фильтровальной бумаги, на него налить карболовый фуксин Циля и подогреть стекло над пламенем горелки до появления паров;
б) охладить, снять бумагу, промыть водой и обесцветить 5 % серной кислотой в течение 30 секунд;
в) препарат тщательно промыть водой и докрасить раствором метиленового синего в течение 3–5 минут;
|
|
|
г) препарат промыть водой и высушить.
Карболовая кислота разрыхляет оболочку споры и тем самым повышает её тинкториальные свойства, а высокая концентрация красителя и нагревание в процессе окраски усиливают реакцию взаимодействия бактериальных спор с красителями. Споры окрашиваются в красный цвет. При обработке препарата серной кислотой вегетативные тела бактерий обесцвечиваются метиленовым синим.
Приготовление препарата «толстая капля»
На предметное стекло нанести две капли крови, которые равномерно распределить в виде пятна с 10-копеечную монету. Нефиксированный препарат окрасить по Романовскому – Гимза.
Окраска по Романовскому – Гимза
Краска Романовского – Гимза состоит из азура, эозина и метиленового синего. Цитоплазма окрашивается в голубой цвет, ядро – в красно-фиолетовый. Перед окраской 20 капель краски добавить к 10 мл дистиллированной воды и налить её на препарат на 30–40 минут, после чего краску слить, препарат промыть водой, высушить и микроскопировать.
Техника темнопольной микроскопии
С помощью осветителя и его диафрагмы равномерно освещают зеркало микроскопа и его вращением добиваются появления на верхней линзе конденсора освещенного кольца. На поверхность конденсора наносят каплю дистиллированной воды, препарат «раздавленная капля» кладут на столик микроскопа и конденсор поднимают до соприкосновения с предметным стеклом. Устанавливают большой сухой объектив, находят объект, с помощью зеркала достигают максимальной освещенности поля зрения, после чего добиваются резкости изображения. На тёмном фоне видны спирохеты в виде тонких, блестящих, спиралевидно закрученных нитей.
|
|
|
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 844; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!